结核抗体检测在小儿结核病诊断中的应用

普 毅白圆圆雷 金孙 立

1.个旧市疾病预防控制中心，云南个旧 661000；2.个旧市第三人民医院，云南个旧 661000

结核感染仍是威胁全世界人类健康的重要疾病，虽然我国公共卫生发展迅速，疫苗接种率较高，但近年来发生率又呈现反弹趋势[1]，每年新增病例约占世界的15%，位居第二，其中儿童仍是结核病（TB）的主体人群[2]。目前，儿童结核发病初期诊断仍存在一定的困难，痰菌阳性率较低，肺外结核细菌检查的阳性率更低[3]。本文通过对结核抗体检测在小儿结核病诊断中的应用效果进行分析，旨在探讨其在小儿肺结核诊断中的应用价值及优势。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本地区2012年3月—2013年3月收治的疑似结核病患儿患48例为观察组，其中男21例，女27例，年龄6个月～11岁，平均5.7岁，肺结核29例，肺外结核19例。所有患儿的临床表现和影像学检查均符合结核感染的标准[4]。另以同期入院的非结核病患儿35例为对照组，男18例，女17例，年龄8至14岁，平均6.2岁，两组间基本资料具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

所有患儿入院后均接受体液标本涂片、卡介菌纯化蛋白衍生物和结核抗体检测，体液涂片参照《结核病诊断细菌学检验规格》完成：采集患者5 mL痰液加入5 mL消化液，充分混匀后消化5～8 min，转移至试管内并加入蒸馏水10 mL，以转速为3000 r/min条件下离心10 min（Anke TDL-5-A型低速离心机，上海安亭科学仪器厂），弃上清，留沉渣0.2ml混匀后完成涂片，并以萋-尼（Ziehl-Neelsen）染色。PPD试验：采用左前臂掌侧中下1/3处皮内注射 PPD 0.1 mL（成都生物制品研究所），含PPD 5IU，于 72h后观察，阳性标准：硬结直径大于10 mm；结核抗体检测：按照结核分枝杆菌胶体金法原理，采用结核抗体试剂盒（上海奥普生物医药有限公司，规格：20人/盒）进行检测，操作方法：①在反应板中各孔内加入2 mL封闭液，等待薄膜吸入；②取患者40 mL采集受试者血清，加入反应孔中，等待薄膜吸入；③ 在反应孔中加入6滴洗活液，等待薄膜吸入；④加入2滴金标液，等待薄膜吸入；⑤加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，并目测结果。

1.3 统计学方法

所有数据分析采用SPSS 13.0进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 检测结果比较

三种方法在两组间差异均具有统计学意义（P<0.05），结核病患儿诊断方面，三种方法间比较，以PPD法阳性率最高，涂片法最低，PPD法和结核抗体法阳性率差异不显著（χ2=3.49，P>0.05），但均显著高于涂片法（χ2=13.81和 5.32，P<0.05），非结核病患儿中，涂片法和结核抗体法的特异度均为100%，而PPD特异度仅为 77.1%，差异具有显著性（P<0.01），见表 1。

表1 三种方法检测结果比较

2.2 不同类型结核检测结果比较

涂片法肺结核的阳性率显著高于肺外结核（P<0.05），而PPD法和结核抗体法在肺结核和肺外结核的阳性率方面差异均不显著（P>0.05），见表 2。

表2 不同类型结核检测结果比较

3 讨论

近年来，结核病的发病率呈抬头趋势，尤其是儿童免疫力较低，更易感染。传统的结核感染诊断金标准主要依赖于体液涂片中结核杆菌的发现，辅以影像学等检查确诊，可用于结核病的早期诊断。但由于儿童呼吸系统发育不完善，结核肺内感染多见于肺内通气较好，且膨胀度高的部位，加之咳痰困难，因而痰液中排菌率低[3]，均不利于诊断的早期完成。

近年来，小儿结核感染的早期诊断困难已经受到学界的普遍关注，相关的生物工程技术也陆续引入该领域，但均存在着一定的阳性率低，或假阳性率高的问题。PPD技术不仅可用于卡介苗免疫效果的评价，也逐渐应用于儿童潜伏感染的诊断，其阴性可在排除免疫因素外，作为机体未受到人工或自然感染的佐证，多用于潜伏感染的排查[5]，本研究也发现结核患儿PPD阳性率高达68.8%，与国内报道相近，但与结核抗体比较，差异不显著（P>0.05）但均高于涂片法，可能与儿童体液中结核活菌少有关。同时也有报道表明虽然PPD方法灵敏，但影响因素较多，10%的患儿对其无应答[5]，且操作过程中部分患儿对其易产生不良反应，这也抑制了其使用。结核抗体研究始于1898年，作为结核感染的辅助诊断手段至今已有上百年的历史，人感染结核菌后，即会有免疫应答，T淋巴细胞识别后，特异性的表达抗原，因而不受感染部位和活菌排出的影响，而且用于抗体检测的新方法也不断涌现[3-4]。黄绍梅等[3]报道表明与PPD法相比，结核抗体检测可有效区分结核菌感染与、卡介苗注射以及其他分枝杆菌引发的特异性抗体表达，因而假阳性率较低。本组结果也表明在非结核病患者诊断时，结核抗体法特异度高达100%，显著高于PPD法77.1%，这与国内报道相近[6]，提示结核抗体法可作为可靠的诊断依据。此外，结核感染部位也是限制诊断的重要因素，虽然涂片法和影像学诊断更为直接，但由于小儿肺外结核的体液获取更为困难，也限制了诊断的完成，本研究结果表明，涂片法在肺结核的阳性率显著高于肺外结核，而结核抗体法和PPD法在肺结核和肺外结核的诊断方面则无差别，提示体液应答不受感染部位的影响，因而结核抗体法具有较为稳定的诊断效果，更适于肺外结核的无创诊断，这与李晓非等[2]报道基本一致。

总之，结核抗体检测、涂片法和PPD检测在结核病诊断中各有特色，其中结核抗体检测尤其适于作为儿童、肺外结核及无痰患者的快速辅助诊断手段。

[1]曾永学.肺结核的影像诊断及活动性评价 [J].现代医药卫生，2013,29（5）：751-752.

[2]李晓非，李冬玲，施巧霞，等.三种检测方法对结核病诊断价值的比较研究[J].实用医技杂志，2008,15（4）：451-452.

[3]黄绍梅，邱薇，许柳清.蛋白芯片法检测结核抗体在儿童结核病中的诊断价值[J].广东医学，2012,33（16）：2421-2422.

[4]李瑞，刘继贤，包丽丽，等.检测分泌r-干扰素T细胞对诊断儿童结核的意义[J].医技与临床，2013,17（10）：80-83.

[5]周亚玲，郑梅，郑跃杰.深圳市553例门诊儿童PPD试验反应分析[J].第三军医大学学报，2008,30（17）：1676-1677.

[6]杜正强.结核抗体检测在32例小儿结核病诊断中的临床意义分析[J].山西医药杂志，2013,42（5）：574-575.