复方中药合剂对AA肉仔鸡脾脏和法氏囊结构及发育的影响

靳双星，张桂枝

（河南牧业经济学院畜牧工程系，郑州 450046）

复方中药合剂对AA肉仔鸡脾脏和法氏囊结构及发育的影响

靳双星，张桂枝

（河南牧业经济学院畜牧工程系，郑州 450046）

选用7日龄健康AA肉仔鸡240只，随机分4组，每组设5个重复，对照组自由饮水，试验组按0.5%、1%、1.5%的浓度添加复方中药合剂于饮水中，试验期为4周。分别于14日龄、21日龄、28日龄和35日龄，每组随机抽取10只鸡，颈静脉放血致死，取法氏囊和脾脏，测定脾脏和法氏囊指数。在免疫器官指数对比的基础上，选取效果最佳组和对照组的脾脏和法氏囊，固定，制作石蜡切片，H·E染色，显微观察、拍照。与对照组相比，试验组显著或极显著提高肉仔鸡21、28及35日龄的脾脏指数和法氏囊指数（P＜0.05或P＜0.01）。1%浓度添加组脾小体平均直径、动脉周围淋巴鞘平均面积和法氏囊淋巴滤泡平均面积显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）；并且脾脏结构清晰，白髓内的脾小体数量较多；脾动脉周围淋巴鞘明显增厚，鞘内淋巴细胞密集；法氏囊内淋巴小结数量较多，排列紧密，法氏囊皱襞发达，皱襞内淋巴细胞增多。说明复方中药合剂能显著促进AA肉仔鸡脾脏和法氏囊的发育，增强机体的免疫功能。

复方中药合剂；免疫器官指数；脾脏；法氏囊

近年来，畜禽免疫抑制危害严重，畜禽免疫功能下降，造成免疫失败、混合感染增加、生产性能下降、死亡率上升，给养殖者造成极大的经济损失。因此，如何增强畜禽免疫功能引起关注。中草药及其制剂因其具有安全、高效、低毒、低残留、价格低廉、不易产生耐药性等优点，在动物疫病防控中发挥重要作用[1-2]。研究表明，许多中草药具有免疫增强作用，能提高机体的非特异性和特异性免疫功能[2-8]。但多数采用单味中草药提取物进行研究，然而中药方剂讲究配伍，配伍不同，药效和功能变化很大。本研究科学组方，研制出以连翘、板蓝根、黄芪等中药组成的复方中药合剂。通过在饮水中添加不同剂量的复方中药合剂，测定肉仔鸡的脾脏、法氏囊指数并观察其组织结构变化，探讨复方中药合剂对肉仔鸡免疫功能影响，旨在为兽医临床及生产实践提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验样品

复方中药合剂由连翘、板蓝根、黄芪、甘草、茯苓、白术、枳实、山楂等中药组成。连翘采用醇提法提取连翘提取物；白术、枳实采用蒸馏法提取挥发油，滤液与黄芪、茯苓、甘草、山楂、板蓝根混合水煎2次，合并上述滤液浓缩至相对密度1.10（温度60℃）、加入乙醇使其沉淀，滤过；滤液与连翘提取物混合，加入白术、枳实挥发油及吐温-80，加入30%蔗糖，调节药物浓度至1∶1，并调节pH 7.0，流通蒸汽灭菌，备用。

1.2 主要仪器和试剂

水浴锅（常州澳华仪器有限公司，型号：HH-4）；石蜡切片机（德国Leica，型号：2016）；测微尺、显微镜、OlympusCH-30显微摄影系统（日本Olympus光学工业株式会社，型号：CH-30）；甲醛溶液、各级浓度的酒精、二甲苯、盐酸酒精、冰醋酸、石蜡、中性树胶、苏木素染色液、伊红染色液等。

1.3 试验动物与分组

1日龄健康AA雄性肉仔鸡，隔离饲养至7日龄，选取240只体重相近健康肉仔鸡，随机分为4组，即为试验1组、试验2组、试验3组和对照组，每组5个重复，每个重复12只鸡，分笼饲养。试验组从7日龄开始，饮水中分别添加体积分数为0.5%、1.0%、1.5%的的复方中药合剂，对照组正常饮水，试验期4周。采用两阶段三层笼养，24 h光照、自由采食、自由饮水。整个饲养期分为2个阶段，1～21 d为前期；22～35 d为后期。基础日粮参照NRC（1994）肉仔鸡营养标准配制。所有鸡均在7日龄1倍量点眼滴鼻接种新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗；14日龄1.5倍量滴口接种法氏囊病中等毒力偏弱疫苗；21日龄3倍量饮水接种新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗；28日龄3倍量饮水接种法氏囊病中等毒力偏强疫苗。

1.4 检测指标及测定方法

1.4.1 免疫器官指数测定

于14、21、28和35日龄，每重复随机抽取2只体重相近健康的肉仔鸡，每个处理组共选10只鸡，分别称重，颈静脉放血致死，迅速摘取脾脏和法氏囊，进行称重并计算其免疫器官指数。

免疫器官指数=免疫器官重量（g）/试验阶段体重（kg）。

1.4.2 组织切片制作

在35日龄测定免疫器官指数后，迅速把脾脏和法氏囊置于固定液中，结合免疫器官指数4次测定结果，选取对免疫器官指数影响显著的试验组与对照组脾脏和法氏囊，制作石蜡组织切片，参照文献[9]，显微摄影系统观察、测量与摄影。

1.5 统计分析

试验数据采用SPSS 12.0中One-Way ANOVA过程进行单因素方差分析，用Duncan氏法进行多重比较，以P＜0.05或P＜0.01作为差异显著或极显著的判断标准，结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 复方中药合剂对肉仔鸡脾脏指数的影响

由表1可知，14日龄，试验2、3组脾脏指数显著高于对照组（P＜0.05）。21日龄，试验2、3组脾脏指数极显著高于对照组（P＜0.01）。28日龄，试验2、3组脾脏指数显著高于试验1组（P＜0.05），极显著高于对照组（P＜0.01）。35日龄，试验2、3组脾脏指数显著高于试验1组（P＜0.05），极显著高于对照组（P＜0.01）。

2.2 复方中药合剂对肉仔鸡法氏囊指数的影响

由表2可知，14日龄，试验组法氏囊指数均高于对照组，但差异不显著（P＞0.05）。21日龄，试验2、3组法氏囊指数显著高于试验1组和对照组（P＜0.05）。28日龄，试验2、3组法氏囊指数显著高于试验1组（P＜0.05），极显著高于对照组（P＜0.01）。35日龄，试验2、3组法氏囊指数显著高于试验1组（P＜0.05），极显著高于对照组（P＜0.01）。

2.3 复方中药合剂对肉仔鸡脾脏组织结构的影响

2.3.1 对肉仔鸡脾小体平均直径和动脉周围淋巴鞘平均面积的影响

由表3可知，试验2组脾小体平均直径显著高于对照组（P＜0.05）；试验2组动脉周围淋巴鞘平均面积极显著高于对照组（P＜0.01）。

表1 饮水中添加复方中药合剂对肉仔鸡脾脏指数的影响Table 1 Effects of Compound traditional Chinese medicine mixtures on organ indexes of Spleens in Broilers（g·kg-1）

表2 饮水中添加复方中药合剂对肉仔鸡法氏囊指数的影响Table 2 Effects of Compound traditional Chinese medicine mixtures on organ indexes of Fabricius in Broilers（g·kg-1）

表3 复方中药合剂对肉仔鸡脾小体平均直径和动脉周围淋巴鞘平均面积的影响Table 3 Effects of Compound traditional Chinese medicine mixtures on diameters of spleen node and area of periaterial lymphatic sheath in Broilers

2.3.2 对脾脏组织结构的影响

从图1、2可知，与对照组相比，试验2组肉鸡脾脏的结构清晰，脾动脉周围淋巴鞘明显增厚，鞘内淋巴细胞密集；白髓内的脾小体数量较多，体积增大，淋巴细胞数量增多。

图1 对照组脾脏（200×，H.E）Fig.1 Spleens of control group

图2 试验2组脾脏（200×，H.E）Fig.2 Spleens of experimental 2 group

2.4 复方中药合剂对肉鸡法氏囊组织结构的影响

2.4.1 对肉仔鸡法氏囊淋巴滤泡面积的影响

由表4可知，试验2组法氏囊淋巴滤泡面积极显著高于对照组（P＜0.01）。

表4 复方中药合剂对肉仔鸡法氏囊淋巴滤泡面积的影响Table 4 Effects of Compound traditional Chinese medicine mixtures on area of lymphoid follicle of fabricius in Broilers（μm2）

2.4.2 对法氏囊组织结构的影响

从图3、4可知，与对照组相比，试验2组法氏囊内淋巴小结数量较多，排列紧密，大小均匀，体积较大，法氏囊皱襞发达，皱襞内淋巴细胞增多，而对照组法氏囊皱襞较小，法氏囊淋巴小结大小不均，淋巴细胞较少，法氏囊有退化现象。

图3 对照组法氏囊（100×H.E）Fig.3 Fabricius of control group

图4 试验2组法氏囊（100×H.E）Fig.4 Fabricius of experimental 2 group

3 讨论与结论

3.1 组方原理及药理作用分析

本复方中药合剂是由连翘、板蓝根、黄芪、甘草、茯苓、白术、枳实、山楂等中药组成。其中，黄芪、白术是君药，茯苓、板蓝根、连翘是臣药，枳实，山楂是佐药，甘草是使药。黄芪、白术补中益气，茯苓健脾利水，板蓝根、连翘扶正祛邪，枳实破积行气，山楂消食健脾，甘草调和诸药，因此此方具有补中益气，健脾和胃，兼以清热解毒、消导理气的作用。现代药理研究表明，方中黄芪、板蓝根、茯苓、白术、甘草及连翘等都具有免疫增强作用，能显著促进鸡脾脏和法氏囊的发育和免疫活性细胞的生成，并可增加血液中白细胞总数，促进中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，增强细胞免疫和体液免疫[7-8,10-14]。

3.2 复方中药合剂对肉仔鸡脾脏和法氏囊指数的影响

脾脏和法氏囊是禽类重要免疫器官，是免疫细胞发生、分化、成熟、定居、增殖及产生免疫应答场所[15-16]。机体免疫力的强弱取决于免疫器官状况，衡量免疫器官状况的重要指标是免疫器官指数。通过测定免疫器官指数，可从生长发育角度评价机体免疫状态和免疫能力[17]。试验结果表明，饮水中添加一定剂量的复方中药合剂可显著提高肉仔鸡脾脏和法氏囊指数，这与谢红兵[3]、葛剑[4]和唐胜球[6]等报道的结果基本一致。说明本中药复方合剂可促进肉仔鸡淋巴器官的生长发育和迅速成熟，这与方剂中含复合多糖成分促进免疫器官的发育有关[7-8,10-12]。比较研究结果发现，随着中药合剂用量增加，促进免疫器官指数增加，但以1.0%用量的效果最佳。1.5%试验组没有1%试验组效果好，是否因浓度太高影响适口性或长期采食酸性物质积累而导致采食量下降影响免疫增强效果，有待于进一步研究。

3.3 复方中药合剂对肉仔鸡脾脏和法氏囊组织结构的影响

脾脏良好发育对提高肉鸡的免疫功能起重要作用[18]。试验结果表明，试验组脾小体平均直径显著高与对照组，动脉周围淋巴鞘平均面积极显著高于对照组；脾脏的结构清晰，脾动脉周围淋巴鞘明显增厚,鞘内淋巴细胞密集；白髓内的脾小体数量较多，体积增大，淋巴细胞数量增多，说明复方中药合剂能显著地促进脾脏发育，提高脾脏的免疫功能，这与史秋梅研究结果基本一致[19]。法氏囊的囊壁形成一些皱襞，皱襞内分布着很多腔上囊淋巴滤泡，淋巴滤泡内含有丰富的淋巴细胞和巨噬细胞，随着淋巴滤泡面积的增加，淋巴细胞和巨噬细胞的数量也在增加，因此，法氏囊淋巴滤泡面积是反应法氏囊功能的重要指标。试验结果表明，试验组法氏囊淋巴滤泡面积极显著高于对照组；且法氏囊内淋巴小结数量较多，排列紧密，大小均匀，体积较大，法氏囊皱襞发达，皱襞内淋巴细胞增多，说明复方中药合剂可延缓肉仔鸡法氏囊的退化，促进法氏囊的发育，提高法氏囊的免疫功能。这与金光明等的试验结果基本一致[20]。复方中药合剂可增加免疫器官重量和免疫器官指数，促进免疫器官的发育，改善脾脏和法氏囊组织结构，增强免疫器官的免疫功能。添加1.0%的剂量效果最佳。

[1]徐娇,宋旭,殷中琼,等.18味中药提取物体外抗鸭瘟病毒活性的研究[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2013,39(1): 105-110.

[2]王春花,金秧敏,张燕华,等.8种中药多糖及其硫酸化衍生物对新城疫病毒的影响[J].中国兽医杂志,2012,48(8):42-45.

[3]谢红兵,常新耀,苗志国,等.香菇多糖对肉仔鸡生产性能及免疫器官的影响[J].贵州农业科学,2011,39(9):149-150.

[4]葛剑,杨翠军,孙茂红,等.马齿笕多糖对雏鸡免疫器官指数及抗氧化功的影响[J].中国饲料,2012(9):15-18.

[5]章世元,徐春燕,董晓芳.苜蓿多糖和黄芪多糖对肉仔鸡淋巴细胞增殖的影响[J].动物营养学报,2010,22(3):670-674.

[6]唐胜球,董小英.牛膝对肉鸡生产性能与免疫器官指数的影响[J].中国饲料,2012(10):24-26.

[7]司昌德,闵亚宏.黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响[J].中国预防兽医学报,2008,30(12):978-980.

[8]张训海,王德云,胡元亮,等.黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用[J].中国兽医学报,2009,29(3):312-314.

[9]金光明,张敏,汤苏丽.半胱胺对鸡免疫器官组织结构及发育的影响[J].畜牧与饲料科学,2009,30(3):9-11.

[10]邱妍,崔保安,胡元亮,等.4种多糖对免疫雏鸡抗体效价和T淋巴细胞的影响[J].南京农业大学学报,2008,31(1):77-81.

[11]蒋娟,肖佩,李倩,等.茯苓多糖对小鼠血清IgA、IgG和IgM生物合成水平的影响[J].检验医学教育,2012,19(4):44-46.

[12]赵燕飞,汪以真,王静华.白术、微米白术及白术多糖对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响[J].中国畜牧杂志,2012,48 (13):56-59.

[13]林云成,武瑞,王跃强,等.归芪甘草汤对小鼠免疫功能的影响[J].中国兽医杂志,2011,47(11):55-57.

[14]高海,刘开永,李秀岚,等.中药复方连翘对感染法氏囊病毒雏鸡免疫功能的影响[J].畜牧兽医学报,2009,40(1):109-116.

[15]Nockels C F.Protective effects of supplemental vitamin E agajnst infection[J].Fed Proc,1997,38(8):2134-2137.

[16]呙于明.家禽营养与饲料[M].北京:中国农业大学出版社,1997,204-213.

[17]王中华,黄修奇.牛磺酸对肉鸡生产性能和免疫器官指数的影响[J].中国家禽,2011,33(15):68-69.

[18]谢电,陈耀星,王子旭,等.单色光对脂多糖应激后肉鸡脾脏组织结构及脾细胞免疫功能的影响[J].中国农业大学学报,2007,12(1):13-16.

[19]史秋梅,李春玲,高桂生,等.中药免疫增强剂对鸡脾脏的影响[J].中国兽医杂志,2008,44(12):53-54.

[20]金光明,韩玉娟,丁常宏.中药四黄提取物对AA肉仔鸡法氏囊组织结构的影响[J].安徽科技学院学报,2012,26(1):5-8.

Effect of compound traditional chinese medicine mixtures on tissue structure and development of spleen and fabricius in broilers

JIN Shuangxing,ZHANG Guizhi
(Animal Department,Henan University of Animal Husbandry and Economy,Zhengzhou 450046,China)

240 healthy AA broilers at the age of 7 day old were selected,and divided into experimental and control groups randomly.There were 5 repeating groups in each group.The control group was watered normally,and the experimental groups were watered with 0.5%,1.0%and 1.5%the compound traditional Chinese medicine mixtures,respectively.The trial period was 4 weeks.On 14,21,28 and 35 days old after gavaged,10 chickens were sampled randomly from each group and slaughtered by bloodletting in jugular vein.Then Fabricius and spleens were collected for determination of immune organs index.Spleens and Fabricius were randomly selected from the best experimental groups and control group and fixed.Paraffin sections were stained with HE and observed under microscope.The results showed that the immune organ indexes were significantly higher in the experimental groups than those of in the control group in aged 21,28and 35 days(P＜0.05 orP＜0.01).The diameters of spleen node and area of periaterial lymphatic sheath and lymphoid follicle of fabricius of the experimental 1%groups were significantly higher than the control group（P＜0.05 orP＜0.01).The structure of spleen was clear.The amount of splenic nodule increased in white pul.Splenic periarterial lymphatic sheath thickening,lymphocyte becomes more and more intensive.The amount of lymphoid nodule in bursa of fabricius increased and arranged closely.Folds of fabricius had more developed and increased in lymphocyte numbers.These results showed that the compound traditional Chinese medicine mixtures could improve and enhance the immune function in broilers.

compound traditional Chinese medicine mixture;immune organ indexe;spleen;fabricius

S831.7

A

1005-9369（2014）04-0094-05

2013-10-15

河南省教育厅自然科学研究计划项目（2011A230013）

靳双星（1970-），男，副教授，硕士，研究方向为畜禽疫病防治。E-mail:jinshuangxing@126.com

时间2014-4-21 13:22:46[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20140421.1323.014.html

靳双星,张桂枝.复方中药合剂对AA肉仔鸡脾脏和法氏囊结构及发育的影响[J].东北农业大学学报,2014,45(4)∶94-98.

Jin Shuangxing,Zhang Guizhi.Effect of compound traditional chinese medicine mixtures on tissue structure and development of spleen and fabricius in broilers[J].Journal of Northeast Agricultural University,2014,45(4)∶94-98.(in Chinese with English abstract)