应用HPLC 法测定天麻头风灵胶囊中天麻素含量

陈韵蓓

(四川省骨科医院，四川 成都610041)

天麻头风灵胶囊由天麻、槲寄生、牛膝、玄参、地黄、当归、钩藤、杜仲、川芎、野菊花等10 味中药制成，功能滋阴潜阳、祛风、强筋骨，用于治疗顽固性头痛、长期手足麻木、慢性腰腿酸痛等，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第五册。本品的质量标准(WS3-B-0903-91)虽在实行中药保护时进行研究修订(WS3-B-3034-98)，但也只有齐墩果酸及当归的定性鉴别，没有含量测定项，且本方中槲寄生、牛膝均含有齐墩果酸［1，2］，原质量标准中对齐墩果酸的定性鉴别不具有专属性。而天麻作为本方的君药，本品质量标准并没有对其中的天麻素含量进行测定。为了全面评价天麻头风灵胶囊的质量，本研究建立天麻素含量测定的高效液相色谱法(HPLC)［3，4］，拟使天麻头风灵胶囊的质量控制更简便、准确、可靠。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 SPD-10AVP 高效液相色谱仪(日本岛津);分析天平(Sartorius，BS110S);天麻头风灵胶囊(贵州益佰制药股份有限公司，批号:130101、130410、130808);天麻素对照品(批号:807-200205，中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯，TEDIA);甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司);重蒸馏水为自制;其他所用试剂均为分析纯。

1.2 方法 ①对照品溶液的制备:精密称取80 ℃

减压干燥1 h 的天麻素对照品适量，加流动相制成每1 ml 含50 μg 的溶液，即得。②供试品溶液的制备:取本品内容物约2 g，精密称定，置50 ml 圆底烧瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，回流提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至5 ml 量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。③阴性样品溶液的制备:按处方比例称取除天麻以外的其他药材，参照天麻头风灵胶囊质量标准中制法项下工艺制得阴性样品，按②项方法制成阴性样品溶液。④色谱条件［5］与系统适用性试验:色谱柱:Dikma ODS，4．6 mm × 250 mm，5 μm;流 动 相:乙 腈-水-磷 酸(1 ∶98．9 ∶0．1);柱温:30 ℃;检测波长为220 nm;流速为1．0 ml/min。理论板数按天麻素峰计算应不低于5000。⑤空白干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定。⑥标准曲线与线性关系:取天麻素对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 ml 含250 μg 的溶液，分别吸取上述溶液0．5、1、2、3、4、5 ml，分别置10 ml 量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为各对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，依法测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，以天麻素进样量微克数(X)为横坐标，绘制标准曲线并计算得回归方程。⑦精密度试验:精密吸取对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪测定6 次，计算峰面积。⑧重现性试验:取本品内容物约2 g，精密称定，按供试品溶液制备方法平行制备5 份，依法测定，并计算样品中天麻素的含量。⑨稳定性试验:取室温放置的对照品溶液与供试品溶液，在0、1、2、4、8、12、24 小时分别进样。为了更全面地考察稳定性，分别计算峰面积和天麻素含量的相对标准偏差(RSD)。⑩加样回收率试验:取已知含量的样品内容物约1．0 g，精密称定，平行5 份，各精密加入天麻素对照品溶液1 ml(精密称取天麻素对照品10．08 mg，置10 ml 量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，即得，按供试品的制备方法制备供试品溶液，依法测定各样品天麻素的含量，计算回收率。

2 结果

2.1 空白干扰试验 供试品色谱中天麻素峰分离度良好，柱效高，且阴性样品色谱中在与天麻素峰相同保留时间处无干扰色谱峰，见图1。

2.2 标准曲线与线性关系 线性关系回归方程为Y=1786227．55X-27588．39，相关系数r= 0．9997。结果表明天麻素进样量在0．2328 ～2．3280 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3 精密度 计算得峰面积积分值RSD 为0．72%。

2.4 重现性 样品中天麻素含量RSD 为2．4%。

2.5 稳定性 峰面积和天麻素含量的RSD 分别为1．1%和0．57%，显示天麻素对照品溶液及供试品溶液室温放置24 h 内基本稳定。

2.6 加样回收率试验 天麻素的平均回收率为97．74%，RSD 为1．9%，见表1。

图1 天麻素含量测定HPLC 图 a:对照品;b:供试品;c:阴性;1．天麻素峰

表1 回收率试验结果

2.7 样品含量 取贵州益佰制药股份有限公司生产的天麻头风灵胶囊样品3 批，每批3 份，按1．2②项方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液20 μl，在上述色谱条件下进样分析，并计算得各批样品的含量。结果见表2。

表2 样品中天麻素的含量测定结果

3 讨论

中国药典2010 年版一部天麻项下规定天麻素的含量不低于0．2%，由表2 可以看出市售产品中天麻素的平均含量为0．205 毫克/粒，参照《中华人民共和国卫生部药品标准》可计算出样品中天麻素的含量均符合《药典》要求，其中第一批样品含量相对较低，可能是因为厂家生产时原料差异造成的，但均符合药典要求。

天麻为本方中君药，虽然用量较少，但制定其含量测定方法是非常重要的。本文使用的含量测定方法有较强的实用性、可操作性，能合理、规范地测定天麻头风灵胶囊中天麻素的含量，为以后天麻头风灵胶囊含量限度的制定及质量标准的更新提供了依据。

［1］国家药典委员会．《中华人民共和国药典》一部［S］．北京:化学工业出版社，2010:350．

［2］郑虎占，董泽宏，佘靖．中药现代研究与应用［M］． 北京:学苑出版社，1998:1055．

［3］张辉，陈文秋，余敏灵，等．应用气相色谱法测定冰硼散中樟脑的含量［J］．实用医院临床杂志，2014，11(2):100-102．

［4］童荣生．高效液相色谱法测定山茱萸中没食子酸的含量［J］． 实用医院临床杂志，2006，3(4):27-28．

［5］国家药典委员会．《中华人民共和国药典》一部［S］． 北京:化学工业出版，2010:54．