三明地区规模猪场传染性胃肠炎和呼吸道冠状病毒病血清学调查

陈小丽 吴德喜 福建省三明市农业局 福建三明 365500

近年来，猪场传染性胃肠炎（TGE）给三明市规模化养殖场造成了严重经济损失。TGE是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种以2周龄以内仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性肠道传染病［1-2］。病原为冠状病毒科冠状病毒属的单股正链RNA病毒，只有一个血清型，与猪呼吸道冠状病毒（PRCV）有一定的抗原相关性。后者被认为是TGEV的一个基因缺失变异株，不表现临床症状或临床症状比较温和，给猪传染性胃肠炎实验室血清学诊断带来一定干扰［3-4］。同时，猪呼吸道冠状病毒病（PRC）在国外的流行和传播证据表明，该病在猪场的传播和隐性存在，对TGE的感染和发病有一定的影响。这也是在开展猪传染性胃肠炎血清学监测的同时，引入PRC监测的原因。2012年通过监测三明地区21个规模猪场传染性胃肠炎和呼吸道冠状病毒病的血清学情况，从而掌握两种疫病在三明市的流行状况，为规模猪场的疫病防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪血清样品 2012年共采集21个规模猪场的血清样263份。

1.1.2 诊断试剂盒 猪传染性胃肠炎和呼吸道冠状病毒病抗体检测试剂盒（Svanova，批号44000-6084）。

1.1.3 仪器设备 Eppendorf单道移液器、Transferpette 8道移液器、Sunrise Remote酶标仪、Tecan自动酶标洗板机。

1.2 方法

1.2.1 操作过程 所有试剂在使用前一律恢复至室温（18～25℃），轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀。PBS原液20倍稀释，HRP酶结合物稀释根据说明书操作。未加入样品前，用PBS-Tween溶液洗板3次，每次让洗液在板中停留1 min，最后1次将板拍干。按照说明书分别加入100 uL阳性对照、阴性对照，样品孔双孔，每孔分别加入50 uL PBS-Tween和50 uL血清，轻微震荡反应板，密封，于37℃温箱中孵育2 h，洗涤3次，拍干。分别加入100 uL antitgev溶液至样品第一孔，加100 uL anti-tgev/prcv溶液至样品第二孔，室温孵育30 min，洗涤3次，拍干。每孔加入100 uL酶结合物，室温孵育30 min，洗涤3次，拍干。加100 uL底物，室温孵育30 min，加50 uL终止液，混匀，15 min内在450 nm波长（或双波长450 nm和620 nm）测定和记录样品以及对照的吸光值。

1.2.2 计算结果 在阴性、阳性对照成立的基础上，根据试剂说明书对结果进行判断。

2 结果分析及讨论

从表1中可以看出，PRC抗体含量高的场，TGE抗体含量明显偏低，这是由于猪只感染PRCV后所产生的抗体可中和TGEV，产生交叉保护。

PRCV的感染呈亚临床型，所引起的临床症状及严重程度取决于毒株的差异，临床症状比较温和或不表现症状，与TGE完全不同［3-4］。仔猪人工感染PRCV后出现短暂发热，肺部啰音，生长受阻；母猪人工感染后，部分猪只出现咳嗽及繁殖障碍。仔猪通过吮乳获得保护，并可抵抗TGEV感染。PRCV可通过空气或相互接触而感染所有年龄的猪只。

从表2的结果可以看出，三明地区完全没有感染的场较少，仅有3个场，占14.3%。

加强饲养管理是控制该病的关键。TGEV极易传入猪场，因此，猪场应坚持自繁自养，如确实需要引进种猪，则应避免从疫区或发病猪场引进，并对引进的种猪严格检疫，在隔离场隔离观察1个月以上，经检测确实无该病时方可合群。同时，禁止外来人员及车辆进入猪场范围内。实施“全进全出”的生产模式，分娩舍应做好保温工作，特别是冬春季节，日夜温差较大，应注意防寒保暖，保持猪舍干燥、清洁卫生，尽早使初生仔猪吃足初乳［5］。

表1 三明地区规模猪场PRCV和TGEV检测情况

表2 三明地区规模猪场PRCV和TGEV感染情况

［1］许世清.猪传染性胃肠炎［J］.中国畜牧兽医文摘，2011（6）：160-161.

［2］彭旺兴.试论猪传染性胃肠炎［J］.现代农业科学，2009（4）：207-208.

［3］李焕荣，张春叶，林祥梅，等.猪呼吸道冠状病毒及实验室诊断方法研究进展［J］.北京农学院学报，2007（2）：78-80.

［4］房红莹，窦守强，罗满林.猪呼吸道冠状病毒研究进展［J］.中国兽药杂志，2007（5）：40-43.

［5］刘蒙恩，刘秋侠.冬春季节养猪谨防猪传染性胃肠炎［J］.中国动物保健，2010（2）：71-72.