琼玉口服液对衰老小鼠脑组织SOD活性及血清中SOD和MDA含量的影响

刘焕兰,武夏林,曲卫玲,闻 哲

(广州中医药大学基础医学院,广东广州510006)

衰老是生命发展过程中的必然规律,是一个全身性的、缓慢的、渐进的、十分复杂的退化过程。衰老虽不可避免,但延缓衰老却是可能的。杨丽华等[1]认为气虚及津液不足会对人体的脏腑功能、气血运行和阴阳平衡产生一定影响,对衰老的发生发展有密切的关系。琼玉膏是益气养阴的古代经典名方,由于配伍组成独特,决定了其在抗衰老及对老年性疾病的保健治疗作用。本文拟以琼玉膏组成为基础制成琼玉口服液,研究分析其对衰老小鼠脑组织SOD活性及血清中SOD、MDA含量的影响,以确定其是否有抗衰老作用,从而为临床选用抗衰老药物提供科学数据及参考。

1 实验材料

1.1 动物 昆明种小鼠72只,雌雄各半,体质量18～22 g,由广州中医药大学实验动物中心提供。

1.2 药物与试剂 琼玉口服液由广州中医药大学养生教研室提供;六味地黄丸,北京同仁集团。D-半乳糖,由广州科因公司提供;SOD(超氧化物歧化酶试剂盒)、MDA(丙二醛)试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 仪器与设备 WFZ-UV2000紫外可见分光光度计,离心机,水浴锅,移液枪,电子天平均由广州中医药大学中药药理实验室提供。

2 实验方法

2.1 动物分组与造模 取昆明种小鼠72只,雌雄各半,体质量 18～22 g。共分6组:空白组、衰老模型组、阳性对照组及琼玉口服液高、中、低剂量组,每组14只,其中除空白组外其余各组每天颈背部皮下注射5%D-半乳糖0.005 g/10 g体质量,连续造模6周,建立小鼠衰老模型,空白组注射等量的生理盐水。从实验第1天起模型组和空白组每天灌胃给予蒸馏水0.2 mL/10 g体质量,阳性对照组灌胃给予六味地黄丸0.15 g/10 g体质量,其余3组受试药物组分别按高中低(0.1 mL/10 g体质量,0.05 mL/10 g体质量,0.025 mL/10 g体质量)3个剂量给予琼玉口服液,各组均按0.2 mL/10 g体质量给药,连续给药6周。

2.2 样本处理和指标测定 1)血样:小鼠眼眶取血,3 500 r/min离心5 min,取上层血清,测血清中SOD、MDA含量,测定方法严格按照试剂盒所附方法步骤进行。2)大脑SOD测定:取大脑称重,按1∶9(W/V)加入冰生理盐水,低温(4℃)匀浆,3 500 r/min离心取上清液,测定方法严格按照试剂盒所附方法步骤进行。

2.3 统计学方法 采用SPSS软件16.0进行统计分析,各指标以均数±标准差(±s)表示,组间样本均数比较采用方差分析和t检验。

3 结果

3.1 小鼠脑组织SOD活性的测定 见表1。统计处理表明,与空白对照组比较,模型对照组小鼠脑组织SOD活性明显降低(P<0.01);与模型对照组相比较,琼玉口服液低剂量组小鼠脑组织SOD活性变化不明显,琼玉口服液高剂量组、阳性对照组含量增加(P<0.05),琼玉口服液中剂量组小鼠脑组织SOD活性显著增加(P<0.01)。

表1 琼玉口服液对脑组织SOD活性(±s)

表1 琼玉口服液对脑组织SOD活性(±s)

注:与空白对照组比较,##P<0.01;与模型对照组比较,#P<0.05,##P<0.01。

组别 n 脑SOD活性(u/mL)空白对照组 12 67.85±9.70##模型对照组 12 51.75±4.27##低剂量组 12 54.25±2.12中剂量组 12 60.17±4.03##高剂量组 12 59.64±8.39#阳性对照组 12 60.01±9.09#

3.2 对衰老小鼠血清SOD、MDA含量的影响 见表2。从表2中可以看出,空白组和模型组比较各指标均有显著性差异(P<0.01),有统计学意义。琼玉口服液中、高剂量组跟模型组比较,前两组血清中SOD的含量明显大于模型组,有显著性差异(P<0.01或者P<0.05),MDA的含量明显小于模型组,有显著性差异(P<0.01或者 P<0.05),均有统计学意义。琼玉口服液低剂量组跟模型组比较除了血清中SOD的含量明显增加有显著性差异(P<0.05)外,其它指标无统计学意义;与阳性组和模型组比较,各项指标均无统计学意义。

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影响(±s)

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影响(±s)

注:与模型对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与空白对照组比较,##P<0.01。

组别 n 血清SOD活力/(u/mL)血清MDA活力/(nmol/mL模型组 12 12.02±1.21## 36.944±12.760##空白组 12 13.60±0.52## 23.419±7.493##琼低组 12 13.27±0.93# 29.701±7.284琼中组 12 13.75±0.66## 24.461±10.169#琼高组 12 13.17±1.80# 25.889±7.033#阳性组 12 13.05±1.37 29.893±9.240)

4 讨论

衰老是指生物体在正常环境条件下发生的机能减退,逐渐趋向死亡的现象,是机体在成年以后随着年龄的增长而逐渐产生的一系列生理功能和形态结构方面的变化。众所周知,由于衰老原因纷繁复杂,但众多的学说之中,最为中外学者所认同的是自由基学说。正常情况下,体内存在的氧化防御系统包括SOD等,对抗氧化应激反应,清除机体内产生的自由基,从而起到抗衰老的作用[2]。因此,在研究中药抗衰老的实验中,测定自由基的代谢水平有重大意义。琼玉膏又名“神仙琼玉膏”,是益气养阴的古代经典名方,按宋·洪遵《洪氏集验方》卷一引申铁翁方,由生地黄、茯苓、人参、蜂蜜组成。从古代医籍对琼玉膏的相关记载及现代研究来看,此方是集治疗、保健于一身的古代良方,在延缓衰老方面有重要作用。

4.1 琼玉口服液抗氧化作用评价 SOD是体内一种清除氧自由基的酶,对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要作用,是机体抗自由基损伤的重要防御机制[3];SOD通过催化超氧阴离子歧化为H2O2和O2,从而达到清除自由基,抗衰老的作用[4],其活性随着年龄增长而减弱,是评价衰老的重要指标之一。

从实验结果看出,琼玉口服液能抑制衰老小鼠血清SOD及脑组织中SOD的活性,从而提高机体抗氧化物质的活性起到抗衰老作用。与模型组相比,中剂量效果显著,并优于阳性对照组。在与中、高剂量对比中,中剂量的数据在趋势上呈现出明显优势,因中剂量小鼠血清中SOD的含量在6个组中最高,和模型组比较含量增加显著(P<0.01),故可以初步判断中剂量效果最佳。

4.2 琼玉口服液清除代谢产物能力评价 MDA是体内脂褐素形成的中间产物,随着年龄的增长而升高,它能间接反映机体内的脂质过氧化水平[5],反映机体内自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度。在老年色素类生物垃圾以及与衰老相关的蓄积产物的形成过程中起着核心作用。研究表明,在患病及衰老的动物和人体内,脂质过氧化物质(其中约85%为丙二醛)明显升高[6]。因此,一般认为,MDA可以作为评价衰老的指标之一[7]。

本实验中进行该指标测定,能反映出给药后是否有改善机体抗脂质过氧化能力及减少小鼠体内自由基的生成,从而证明其抗衰老作用。琼玉口服液对血清MDA的影响表明,琼玉口服液中、高剂量可以减少机体自由基的生成,从而减少自由基对身体的伤害,达到延缓衰老的目的。同时,血清MDA含量在中剂量组均出现了最低趋势,进一步证明了中剂量在各组中的优势。

综上所述,琼玉口服液在增加小鼠体内抗氧化物质含量、减少小鼠体内自由基生成方面有一定作用,能够起到延缓衰老的功效。然而中药成分复杂多样,复方更是如此,对人体疾病的调节是多种成分综合作用的结果,其作用机制还需进一步深入研究。

[1]杨丽华,马春.中医机理衰老探析[J].吉林中医药,2008,28(12):862.

[2]王爱梅,周建辉,欧阳静萍.黄精对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用研究[J].长春中医药大学学报,2008,24(2):137-138.

[3]陈鸿鹏,谭晓风.超歧化物氧化酶(SOD)研究综述[J].经济林研究,2007,25(1):59-65.

[4]Schuessel K,Bayer T A,Czech C,et al.Impaired Cu/Zn-SOD activity contributes to increased oxidative damage in APP transgenic mice[J].Neurobiology of Disease,2005,18(1):89-99.

[5]Del Rio.D,Stewart A.J,Pellegrini N.A review of recent studies on malondia1dehyde as toxic molecule and biological marker of oxidative stress[J].Nutr MetabCardiovasc Dis,2005,15(4):316-328.

[6]陈菁菁,方垂,李芳序,等.丙二醛对大鼠空间学习、记忆能力及海马CA1区超微结构的影响[J].动物学报,2007,53(6):1041-1047.

[7]Junqueira.V,Barros.S.Aging and oxidative stress[J].Molecular Aspects of Medicine,2004,25(1-2):5-16.