病理学大鼠创伤愈合实验模型的构建*

朱 峰，范 豪，宋雅颖，张 健，李珊珊

1)郑州大学医学系09级六班开拓者创新团队 郑州 450052 2)郑州大学第一附属医院病理科 郑州 450052

创伤愈合是《病理学》课程中的重要章节，按照常规教学方法，老师做理论讲解后，学生观看组织学和病理学图片。学生只在理论上知道创伤愈合的炎症渗出、组织增生、瘢痕形成三个阶段，印象并不深刻。作者探索建立一种简便易行的创伤愈合大鼠模型，以便学生动态观察创伤愈合过程，从而更好地理解理论知识，拓展思路并培养其动手能力。

1 材料与方法

1.1动物与分组清洁级SD大鼠28只，郑州大学实验动物中心提供，雌雄不拘，10～12周龄，体质量250～350 g。采用随机数字表将实验动物分为1、3、5、7、14、28 d模型组及正常对照组，每组4只大鼠。

1.2造模方法戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，置俯卧位，臀背部剃毛约6 cm直径大小区域，常规消毒，铺一次性无菌巾。模型组大鼠于臀背部脊柱两侧旁开1 cm处各做长1.5 cm皮肤切口，右侧创口缝合，左侧创口不缝合，创面自然止血，不包扎，不施药。正常对照组大鼠臀背部脊柱一侧旁开1 cm切开3 cm，分离皮下组织和肌肉，分层进行解剖学组织结构观察；另一侧臀背部取材1 cm3组织块。手术后分笼饲养，给予消毒饲料及饮水，注意保持伤口干燥。

1.3观察方法裸眼观察各模型组大鼠创口愈合情况。断颈处死各组大鼠，取创缘及周围1 cm3组织块。所有组织块均石蜡包埋、切片及常规HE染色，显微镜下观察创伤组织愈合情况及病理组织学改变。

2 结果

2.1正常大鼠臀背部解剖和组织学结构大鼠背部解剖结构由浅入深依次为：皮肤和皮下组织、浅筋膜、浅层肌肉组织、深筋膜、深层背部肌肉。组织学见皮肤层含有毛囊和附属器，皮下组织较为疏松，浅筋膜由疏松结缔组织和弹力纤维组成、染色较浅，浅层肌肉为束状环形，肌肉下深筋膜组织较厚且致密。深筋膜下为纵行的背部肌肉。

2.2大鼠臀背部创口愈合过程的大体观察1 d模型组大鼠：缝合创口轻度肿胀，少许渗出物，边缘对合整齐，无出血和皮下组织外露；未缝合创口红肿较严重，渗出物较多，创口哆开，皮下组织及浅层肌肉外露，创口少许渗血。3 d模型组大鼠：缝合创口肿胀消退，表面干燥，边缘对合整齐；未缝合创口红肿减轻，创面趋于干燥，创口边缘回缩，创口两侧间距缩小。5 d模型组大鼠：缝合创口表面干燥，边缘对合整齐；未缝合创口局部红肿消退，创面干燥，创口边缘继续回缩、两侧间距进一步变小，渗出物及肉芽组织逐步填平创口。7 d模型组大鼠：缝合创口拆线，留下一淡红色的线形痕迹；未缝合创口创缘进一步回缩，创口两侧间距进一步变小。14 d模型组大鼠：缝合创口仅留下一白色线状瘢痕；未缝合创口留下表面较为粗糙的瘢痕。28 d模型组大鼠：创口均已愈合，看不出造创痕迹。见图1。

2.3大鼠臀背部创口愈合过程的病理组织学观察

1 d模型组大鼠：未缝合创口哆开、创缘不整，可见大量中性粒细胞浸润；缝合创口组织缺损少，创缘较整齐，可见少量炎细胞浸润。创口边缘基底细胞增生，向创口中心迁移。3 d模型组大鼠：未缝合创口大量炎性细胞浸润，创口内可见周围脂肪组织嵌塞；缝合创口创缘整齐，少量炎细胞浸润；创口边缘开始长出肉芽组织。5 d模型组大鼠：未缝合创口底部及边缘长出多量的肉芽组织；缝合创口肉芽组织趋于填满创口。7 d模型组大鼠：未缝合创口仍有较多炎性细胞浸润，从创口底部及边缘长出多量的肉芽组织，创面收缩明显；缝合创口肉芽组织基本将创口填满，表皮结构已基本恢复正常。14 d模型组大鼠：未缝合创口炎细胞浸润减少，创缘可见新生毛细血管减少，纤维成分增多；缝合创口创面已基本消失，胶原纤维平行于皮肤表面，毛囊等附属器尚未长出，肌层尚未完全修复。28 d模型组大鼠：未缝合创口瘢痕完全形成，瘢痕中胶原纤维与皮肤表面平行，纤维结缔组织仍富于细胞，毛囊等皮肤附属器未见再生，瘢痕部肌层缺如；缝合创口表皮和真皮的结构均已基本恢复正常，几乎看不出造创痕迹。见图2。

图1 模型组大鼠臀背部创伤愈合的大体观察

图2 大鼠臀背部创伤愈合的病理组织学观察(HE,×10)

3 讨论

3.1大鼠创伤愈合实验模型作为教学实验的可行性创伤愈合是《病理学》课程中的重要章节，但本科生教学时间和经费有限，因此采用什么实验动物、使用较少的经费、在较短的时间内完成创伤愈合实验需要探索。文献[1-2]显示，创伤愈合常用的动物有鼠、兔或猪等，切口常选在动物的背部或腹部，这种模型适合观察创口愈合过程、全身或局部使用药物和敷料等对创口愈合的影响[3]。大鼠常用于眼科、妇产科创伤愈合和外科胃肠吻合实验研究[4-6]。大鼠价格低廉、饲养方便，形体适合进行1～3 cm大小的创伤实验，并且大鼠性格温顺，观察方便，创伤愈合过程较快，Ⅰ期愈合在7～14 d可以完整观察到炎症渗出、组织增生、组织改建三个创伤愈合的基本过程。所以该研究选用大鼠作为病理学创伤愈合实验模型动物。

3.2大鼠创伤愈合过程该实验结果显示，大鼠臀背部创伤后，缝合创口和自然愈合创口愈合时间和愈合后局部组织结构明显不同。

缝合(Ⅰ期愈合)创口：大体观察创口炎症反应较轻微，可在5～7 d达到临床愈合标准；病理组织学显示炎症渗出不明显，3 d开始长出肉芽组织，7 d创口区基本为肉芽组织填平，14 d已进入组织改建期，28 d组织改建完成，组织结构基本恢复正常。

自然愈合(Ⅱ期愈合)创口：大体观察创口表面哆开、炎症反应明显，炎症渗出至5 d，5～7 d创口结痂，14 d创口表面愈合；病理组织学显示，1～3 d创口内大量炎细胞浸润，5～7 d长出多量肉芽组织，纤维母细胞大量增生，14 d时开始形成瘢痕，28 d创口区大量瘢痕结构。

创伤愈合过程涉及许多细胞因子的作用[7]，也可以通过类似实验进行观察研究。该实验研究显示：大鼠创伤愈合炎症渗出、组织增生、组织改建等病理过程可在2周内完成。

3.3进行创伤愈合实验的意义①学会了观察和爱护实验动物：如果不细心观察和爱护动物，动物意外死亡，会影响实验进程；实验动物为教学和科研做出贡献，值得爱护和保护。②通过实验，学会了麻醉和固定动物，确保实验顺利进行。③学会和懂得了无菌术的重要性：通过创伤实验，学会了手术区消毒、器械和辅料消毒，操作过程遵守无菌术，才能避免手术感染，保证实验的成功。④熟练掌握了切开、分离、止血、缝合、打结等外科基本手术技术。⑤懂得了掌握适当方法的重要性：如实验开始时使用剪刀和刮刀给大鼠剃毛，费时费工且效果不好，通过询问有经验的老师，使用剃毛推子，既快又好。⑥学会了病理取材方法，增加了对病理切片制作过程的了解和对病理学应用于临床的感性认识。⑦增强了思考问题、动手解决问题的能力，学会了许多相关知识和技能。⑧提高了学习兴趣。

总之，希望“大鼠创伤愈合实验模型”能够应用到本科病理学教学实践中，从而提高学生的学习兴趣，提高学生的动手能力，提升学生对创伤愈合和病理学的深刻认识。

致谢：衷心感谢眼科实验室的老师们为实验提供了场地和器械；感谢病理科的老师们为实验进行病理组织学制片；感谢郑州大学第一附属医院病理科副主任李珊珊教授的指导！

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