GC 法同时测定芎姜CO2超临界提取物成分含量

夏晓静，董 宇，俞忠明，王明军

(1.浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100;2.浙江省中医药研究院，浙江 杭州 310007)

运用正交试验筛选出具活血化瘀和缩宫效应的傅氏生化汤的优选方——由川芎和炮姜组成的芎姜合剂 (9∶2)［1］，在此基础上，经提取工艺优化试验，选择CO2超临界提取法作为川芎合剂的最佳提取工艺。通过气相色谱法，建立了同时测定芎姜合剂CO2超临界提取物中阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 含量的方法［2-6］，为进一步的制剂工艺研究及中药新药研发提供质量控制的依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

安捷伦6890N 气相色谱仪 (美国安捷伦公司)，FID 检测器，Mili-Q 纯水仪，METTLER AE 240 分析天平，KQ-400DB 型数控超声波清洗器。阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的对照品 (北京恒元启天化工技术研究院、北京世纪奥科生物技术公司联合研制，纯度均≥98%)，川芎药材 (杭州华东中药饮片有限公司，批号121014)和炮姜药材 (杭州华东中药饮片有限公司，批号121003)经浙江省中医药研究院鉴定为正品药材。无水乙醇为分析纯。

1.2 试剂配制和色谱条件

1.2.1 混合对照品溶液配制

分别称取阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的对照品18，276，100 mg，用无水乙醇溶解定容至10 mL，制成对照品储备液，分别制成含量为0.180 0，2.76 和1.000 mg·mL-1的混合对照品溶液，经微孔滤膜 (0.45 μm)过滤，续滤液作为对照品溶液备用。

1.2.2 供试品溶液配制

称取芎姜CO2超临界提取物40 mg，置10 mL 容量瓶中，加无水乙醇定容，微孔滤膜 (0.45 μm)过滤，续滤液作为供试品溶液。

1.2.3 色谱条件

HP-5 毛细管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm);气化室温度250℃，检测器温度250℃;分流比25∶1，进样量1 μL;尾吹40 mL·min-1，检测器FID。升温程序:初始温度120℃，保持2 min;以10℃·min-1升温至165℃，保持8 min;载气氮气流速2 mL·min-1，氢气流速35 mL·min-1，空气流速435 mL·min-1。在此色谱条件下各色谱峰均达到基线分离，各主成分色谱峰的理论板数均＞5 000。

2 结果与分析

2.1 样品专属性

取供试品、对照品和空白样品溶液 (不含超临界萃取物的溶剂)分别注入气相色谱仪分析显示，供试品色谱中，在与对照品色谱各主峰相应位置均检出色谱峰，而空白样品则无色谱峰，表明阴性样品无干扰，说明此方法具有较好专属性。

2.2 各成分的线性关系

分别吸取阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的混合对照品溶液，稀释成梯度浓度，测定、记录指标成分峰面积。以各指标成分的浓度 (X)为横坐标，以相应的峰面积 (Y)为纵坐标，绘制标准曲线，各成分的回归方程相关系数和线性范围见表1。

表1 阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的线性关系和相关系数 (n=6)

2.3 检测限和定量限

取混合对照品溶液适量，稀释成不同梯度浓度溶液，在气相色谱条件下测定，信噪比为3 和10时的浓度为指标成分的检测限和定量限 (表1)。

2.4 精密度试验

取混合对照品溶液，在气相色谱条件下连续进样6 次。结果阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 峰面积的相对标准差分别为1.36%，1.93%和0.94%，表明精密度良好。

2.5 重复性试验

取芎姜CO2超临界提取物共6 份，将制备的供试品溶液在气相色谱条件下测定，记录峰面积，计算含量。结果阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 平均含量为0.043 8，1.302 0 和0.317 0 mg·mL-1，相对标准差为2.86%，2.88% 和2.90%，表明方法重现性良好。

2.6 稳定性试验

室温下，取同一供试品溶液于0，2，4，6，8，12，24 h 分别进样，记录峰面积。阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 峰的相对标准差分别为1.55%，1.52%和0.78%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性较好。

2.7 加样回收试验

取同一芎姜合剂CO2超临界提取物6 份，每份约40 mg，置于10 mL 量瓶中，加入各对照品，依1.2.2 的方法制备供试品溶液，依1.2.3 的条件测定、计算阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的加样回收率 (表2)。

表2 阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 加样回收率 (n=6)

2.8 样品测定

取3 批芎姜合剂CO2超临界提取物，每批2份，每份约40 mg，置于10 mL 容量瓶，无水乙醇定容。取上述各供试品溶液进样，测定峰面积，计算3 批芎姜CO2超临界提取物中阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的含量 (表3)。

表3 芎姜CO2超临界萃取物含量测定

3 小结

采用石英毛细管色谱柱 (HP-5，30 m×0.32 mm，0.25 μm)、FID 检测器测定芎姜合剂CO2超临界提取物中主要成分阿魏酸、6-姜酚和洋川芎内酯A 的含量，结果表明，此法测定芎姜复方CO2超临界提取物中萃取成分含量简便、快速、准确，可适用于芎姜合剂的质量控制。

［1］王明军，叶定江，朱荃.傅氏生化汤缩宫效应的正交设计分析［J］.成都中医药大学学报，2000，23 (4):39-40.

［2］汪杨丽，严铸云，马云桐，等.不同品种和产地川芎油GC-MS 分析［J］.中成药，2010，32 (8):1433-1435.

［3］郭小藤，赵睁睁，容蓉，等.两种方法测定川芎油中藁本内酯、洋川芎内酯和正丁基苯酞的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18 (13):95-98.

［4］王楠，张艺，李响，等.全二维气相色谱/飞行时间质谱分析不同产地的川芎挥发油［J］.色谱，2010，28 (4);329-335.

［5］曾志，谢润乾，谭丽贤，等.川芎水蒸气蒸馏和超临界CO2提取物化学成分的GC-MS 分析鉴别［J］.应用化学，2011，28 (8):956-962.

［6］郑伟然，陶永华，苗宏伟，等.炮姜超临界CO2萃取6-姜酚的工艺研究［J］.中草药，2011，42 (10):2023-2025.