四氯对苯醌为受体荷移分光光度法测定苯唑西林钠

(太原理工大学化学化工学院,太原030024)

1 引言

苯唑西林钠(oxacillin sodium )，属半合成青霉素类抗生素，其抗菌作用方式与青霉素相似,对耐青霉素G 的金黄色葡萄球菌具有杀菌作用。 临床主要用于治疗敏感菌所致的各种感染，如肺炎、败血症、乳腺炎、烧伤创面感染、化脓性脑膜炎和骨髓炎、扁桃体炎、峰窝组织炎及脓皮病等。目前关于苯唑西林钠已报道的分析方法主要有，高效液相色谱法[1-3]、分光光度法[4，5]、化学发光法[6]和电位滴定法[7]等。而利用四氯对苯醌作为配体与苯唑西林钠反应形成荷移络合物测定苯唑西林钠含量的方法尚未见文献报道。实验参考有关文献[8]，基于药物分子中含有能够给予电子的基团，它与电子接受体四氯对苯醌发生荷移反应,在乙醇介质中药物分子与四氯对苯醌形成稳定的1∶1荷移络合物。详细研究了苯唑西林钠与四氯对苯醌形成荷移络合物的反应条件,探讨了反应机理,建立了一种简便，快速测定苯唑西林钠含量的分光光度新方法，结果令人满意。

2 实验部分

2.1 主要仪器与试剂

仪器：UV-265紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，HH-S 型恒温水浴锅(河南巩义市英峪予华仪器厂)。

试剂：3×10-3mol.L-1四氯对苯醌乙醇溶液(上海易利生化试剂有限公司,AR)；2000 μg/mL苯唑西林钠乙醇标准溶液(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水。

2.2 实验部分

准确吸取一定量的2000 μg/mL苯唑西林钠乙醇标准溶液于10 mL容量瓶中,加入3×10-3mol/L 四氯对苯醌乙醇溶液4.0 mL，用乙醇稀至刻度,摇匀后在40℃恒温水浴中放置10 min,用1cm 的比色池以试剂空白为参比，于波长424.8 nm处测定其吸光度。

3 结果和讨论

3.1 吸收光谱

按照实验方法配制溶液于分光光度计上扫描,所绘制吸收光谱见图1,四氯对苯醌试剂的吸收波长λmax=280.0 nm,苯唑西林钠的吸收波长λ max=339.0 nm，在苯唑西林钠溶液中加入四氯对苯醌溶液后，在424.8 nm处出现一新的吸收峰，表明有新物质生成，且吸光度值与浓度在一定范围内呈良好的线性关系。本实验以络合物424.8 nm作为测定波长，同时以试剂空白为参比，测定溶液的吸光度值。

图1 吸收光谱A.四氯对苯醌；B.苯唑西林钠；C.络合物

3.2 溶剂的选择

选用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、二甲基亚砜等不同的溶剂按照实验方法配制溶液,测量其吸光度，结果表明,苯唑西林钠与四氯对苯醌在乙醇溶剂中测得其吸光度值最大，本实验选择乙醇作为反应溶剂。

3.3 反应温度与反应时间的影响

按照实验方法进行实验，改变反应温度20～60 ℃和反应时间5～30 min，测量其吸光度，结果表明苯唑西林钠与四氯对苯醌生成的络合物在反应温度40 ℃，反应时间5～30 min时其吸光度达到最大值并趋于稳定，本实验选择反应时间为10 min。

3.4 四氯对苯醌试剂用量的影响

按照实验方法进行,改变四氯对苯醌试剂用量,结果表明,苯唑西林钠与3×10-3mol/L四氯对苯醌反应时,四氯对苯醌试剂用量在3.0～6.0 mL范围内吸光度趋于稳定，本实验选用四氯对苯醌试剂4.0 mL,见图2。

图2 四氯对苯醌试剂用量的影响

3.5 标准曲线及灵敏度

分别取0.2 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL的苯唑西林钠2000 μg/mL标准溶液，按照实验方法测量其吸光度，并绘制标准曲线，见图3。苯唑西林钠含量在40～400 ug/ml符合比尔定律，相关系数为 r=0.9997，线性方程A=0.0009358C+0.01065，表观摩尔吸光系数ε=4.32×102L.mol-1.cm-1。

3.6 络合物组成及反应机理探讨

用等摩尔连续变化法测定苯唑西林钠与四氯对苯醌形成络合物的组成比为1∶1,见图4。在苯唑西林钠分子中含有电子给予体的基团存在[5，8]，而四氯对苯醌是一个良好的电子接受体[9]，在乙醇溶液中苯唑西林钠与四氯对苯醌可生成稳定的荷移络合物，经实验测得在波长424.8 nm处有一强的特征吸收峰，与原来药物吸收峰相比有明显红移，证明生成了荷移络合物。

图3 标准曲线

图4 等摩尔连续变化法[D]—苯唑西林钠；[R]—四氯对苯醌

3.7 干扰物质实验

在实验的最佳条件下考察了其它物质对苯唑西林钠测定的干扰情况。当相对误差在 ±5% 时，800倍量的乳糖或淀粉,400 倍量的蔗糖或萄葡糖,250倍量的硬脂酸镁和100倍量的果糖等共存物质均不干扰测定。

3.8 样品分析

3.8.1 试样溶液制备

分别取苯唑西林钠胶囊20粒(苯唑西林钠250 mg/粒)，将胶囊中药剂倒出混匀,准确称取含有苯唑西林钠的药粉1/25(约含苯唑西林钠200 mg)，用适量水溶解,并过滤于100 mL容量瓶中,用水洗涤,除去不溶物,用水稀释至刻度(浓度约为2000 μg/mL),摇匀备用。

取注射用苯唑西林钠1支(苯唑西林钠500 mg/支)，准确称取苯唑西林钠药粉200 mg，用适量水溶解,至于100 mL容量瓶中,用水稀释至刻度(浓度约为2000 μg/mL),摇匀备用。

3.8.2 样品含量的测定

精密量取上述样品制备溶液1.00 mL于10 mL的容量瓶中，按实验方法进行测定，代入线性方程计算每枚药物中苯唑西林钠的平均含量，结果见表1。

3.8.3 方法的回收率和精密度

精密量取经多次测定已知含量的同一批苯唑西林钠适量样品制备溶液,分别加入不同量的苯唑西林钠标准溶液,至于10 mL的容量瓶中，按实验方法测量其吸光度，平行测定5次，按标准加入法测定回收率为98.74%-100.3%,相对标准偏差≤2.56%，结果见表1。

表1 样品测定结果及回收率(n=5)

胶囊：苯唑西林钠胶囊由朗致集团博康药业有限公司生产，标示量为0.25g/粒。

针剂：注射用苯唑西林钠由上海新先锋药业有限公司生产，标示量为0.5g/支。

4 结论

该方法利用四氯对苯醒试剂作为电子接受体与电子给予体苯唑西林钠反应，在乙醇溶液中形成稳定的1∶1荷移络合物,并在波长424.8 nm处出现较强的络合物特征吸收峰，证明生成了荷移络合物，与原来药物吸收峰相比有明显红移。经对实验条件进行优化，苯唑西林钠含量在40～400 ug/ml符合比尔定律，相关系数为 r=0.9997，同时对市售样品苯唑西林钠针剂和胶囊进行测定及回收率实验。回收率为98.74%～100.3%,相对标准偏差≤2.56%。该方法简便，快速，测定波长在可见区，易于推广，为定量测定苯唑西林钠制剂提供了一种新方法。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:441-443.

[2]Samanidou Victoria F,Evaggelopoulou Evaggelia N,Papadoyannis Ioannis N.Development of a validated HPLC method for the determination of four penicillin antibiotics in pharmaceuticals and human biological fluids [J].Journal of Separation Science 2006,29(11)：1550-1560.

[3]吴琦琦,刘雁鸣,倪孟祥.反相高效液相色谱法测定注射用苯唑西林钠有关物质[J].中南药学,2011,9(3):203-205.

[4]庞向东,邓钦心,吴言兵,江虹.玫瑰精B光度法测定苯唑西林的含量[J].2011,27(3):406-408.

[5]Gujral Rajinder Singh,Haque Sk Manirul,Shanker Prem.A novel spectrophotometric method for the determination Oxacillin sodium[J].International Journal of Biomedical Science,2009,5(4):373-379.

[6]石文兵.KMnO4-鲁米诺体系测定苯唑西林钠[J].分析试验室，2009,28(6):39-42.

[7]刘炜,杜增辉,张筱红,张菁,常俊山.硫酸亚汞电极的研制与电位滴定法分析测定青霉素类抗生素[J].药品质量及检验，2002,37(4):294-298.

[8]Askal Hassan F,Saleh,Gamal A,Omar Nabil M.Utility of certain π-acceptors for the spectrophotometric determination of some penicillins [J].Analyst,1991,116(4):387-90.

[9]Ayman Abouel Fetouh GOUDA,Ragaa EL-SHEIKH,Alaa Sayed AMIN.Utility of some π-Acceptors for Spectrophotometric Determination of Gatifloxacin in Pure Form and in Pharmaceutical Preparations[J].Chemical and Pharmaceutical Bulletin,2008,56(1) :34-40.