金银花多糖对脾淋巴细胞的增殖作用

刘蓓 刘玉红

·实验研究·

金银花多糖对脾淋巴细胞的增殖作用

刘蓓 刘玉红

目的研究金银花多糖对脾淋巴细胞的增殖作用。方法用MTT法体外观察金银花多糖在不同浓度对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果金银花多糖在浓度10～250 μg/ml时可显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，以浓度100 μg/ml时作用最为明显。结论金银花多糖体外具有免疫促进作用。

金银花；多糖；淋巴细胞增殖

多糖在抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促进免疫等方面都发挥着重要生物活性，因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的关注。我们前期研究表明，清热解毒类中药金银花，其多糖组分可以抑制小鼠S180肉瘤的生长并且没有明显的毒副作用[1]。为进一步探讨其抗肿瘤的作用机制，基于多种多糖确切的免疫增强活性报道，本文采用脾淋巴细胞增殖实验，研究了金银花多糖体外的免疫活性。

1 实验材料

金银花多糖(自制[1])；RPMI-1640培养基(Gibco公司)；刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司)；噻唑篮(MTT)(Sigma公司)。BALB/c小鼠，体重(20+2.0)g，由山东大学实验动物研究中心提供。

2 实验方法

2.1脾淋巴细胞悬液制备 取小鼠颈椎脱臼处死，70%酒精浸泡10 min，取脾，研磨过100目筛网，Hank’s液冲洗，收集脾细胞悬液，离心，弃上清；加红细胞裂解液(Tris-NH4Cl)10 ml，混匀脾细胞，静止4～5 min，离心，弃上清，Hank’s液洗2～3遍，用RPMI-1640培养液重悬细胞，计数，调整细胞浓度为6～8×106个/ml。

2.2测定法 于96孔培养板中，每孔加入100 μl细胞悬液，再加入100 μl不同浓度的金银花多糖溶液，同时设空白对照组(Control，加100 μl培养液)、阳性对照组(加100 μl ConA，浓度10 μg/ml)。置5%CO2，37℃培养48 h。培养结束前4 h，于每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培养结束后，每孔加入酸化的20%的SDS溶液120 μl裂解细胞，过夜，在酶标仪上测各孔的A(测定波长570nm，参比波长630nm)。计算结果:淋巴细胞增殖指数=供试样品组吸光值/空白对照组吸光值。

3 实验结果

结果见表1。不同浓度的金银花多糖(10～250 μg/ml)均可显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，在浓度100 μg/ml时作用最强，增殖指数为1.172，高于或低于此浓度，促进作用减弱，呈钟罩形的剂量-效应曲线。说明金银花多糖具有一定的免疫促进作用，为金银花多糖抑制小鼠S180肿瘤生长的作用机制之一。

表1 金银花多糖对脾淋巴细胞增殖的影响

注：*P<0.05 and**P<0.01 vs. control group

4 讨论

多数多糖是通过增强机体的免疫调节作用发挥抗肿瘤作用或治疗其他免疫缺陷性疾病。脾脏是T、B淋巴细胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场所，它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关。本文研究了金银花多糖体外对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响，结果表明在浓度10～250 μg/ml范围内，金银花多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖具有不同程度的刺激作用，并且有最适剂量，超过或低于最适剂量则效应减弱，呈钟罩形的剂量-效应曲线，这种特点与许多免疫调节剂的量效关系曲线的特点相似，提示其免疫调节作用具有双向性。金银花多糖的免疫调节作用可能为其抗肿瘤作用机制之一。

[1] 刘玉红，刘玉国，蒋海强. 金银花多糖对小鼠S180肉瘤的抑制作用与机制研究. 肿瘤学杂志，2012,18(8)：584-587.

山东省医学科学院科技计划项目(项目编号：200818)

250355 山东中医药大学药学院

刘玉红 E-mail: liuyuhongwu@126.com