不同洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞的检测结果分析

王惟 柴婷婷 李丹

不同洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞的检测结果分析

王惟 柴婷婷 李丹

目的 通过用两种洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞结果进行质量分析, 来比较应用不同洗涤溶液, 一类是9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠注射液、0.9%氯化钠；一类是9%氯化钠、0.9%氯化钠分别进行解冻红细胞洗涤, 选择合适制备冰冻解冻去甘油红细胞的洗涤方法。方法 随机抽取2010年采血6 d之内新鲜全血32份, 通过手工制备冰冻红细胞：6 d之内(2～6℃保存)新鲜全血经过25 min, 2300转, 离心后去除血浆, 将血液倒入三珠空袋内, 用无菌接驳机连接输血器, 应用甘油160 ml, 25 min加入振荡器60次/min, 室温沉淀30 min后放入-80℃冰箱速冻, 1个月后进行解冻。随机分为A、B两组, 每组16袋, 应用ACP215血液处理仪进行解冻红细胞。A组洗涤液包括9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠这三种溶液；B组洗涤液包括9%氯化钠、0.9%氯化钠这两种溶液。用两种不同洗涤溶液进行冰冻解冻去甘油红细胞洗涤, 通过检测项目为红细胞回收率%, 白细胞残留率%, 血小板残留率%, 甘油含量, 血浆游离血红蛋白含量, 体外溶血等指标进行检测分析。结果 A组解冻红细胞：红细胞回收率81.0%±2.6%, 白细胞残留率0.67%±0.14%, 血小板残留率0.00%, 甘油含量4.8±0.43 g/L, 血浆游离血红蛋白含量0.62±0.11 g/L, 体外溶血13%±5%。B组解冻红细胞：红细胞回收率82.0%±2.3%, 白细胞残留率0.61%±0.26%, 血小板残留率0.42%±0.1%, 甘油含量(5.1±0.13)g/L,血浆游离血红蛋白含量(0.53±0.12) g/L, 体外溶血12%±4%。两组结果均符合国家标准, 且无统计学意义。结论 通过手工制备冰冻红细胞后, 应用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞分别使用A、B两种洗涤液, 根据统计学分析洗涤效果无统计学意义, 检测结果均达到国家标准, 可以确定在洗涤中不加入羟乙基淀粉130氯化钠注射液, 检测结果也能达到国家标准。

冰冻解冻去甘油红细胞；洗涤液；羟乙基淀粉；130氯化钠注射液

冰冻红细胞在国内外已普遍在临床应用, 超低温甘油化冰冻保存红细胞, 可大幅度延长红细胞在体外存活时间, 平时贮备, 一旦临床需要可立即进行解冻洗涤。在制备冰冻解冻去甘油红细胞必须用一定的洗涤和程序, 去除高浓度甘油,使高渗状态下的红细胞, 通过洗涤过渡到生理等渗状态红细胞悬液, 并去除了绝大部分白细胞、血小板、血浆蛋白, 减少了输血副反应, 是临床患者理想、安全、可靠的成分制品。2010年以前长春市中心血站使用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞应用9%氯化钠, 羟乙基淀粉130氯化钠注射液, 0.9%氯化钠洗涤液进行血液洗涤；2010年5月以来进行A、B两种洗涤液洗涤试验, 为评价这2种洗涤液洗涤的冰冻解冻去甘油红细胞质量状况, 经检测得出2种洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞中各项指标并计算, 并比较2种洗涤液洗涤的冰冻解冻去甘油红细胞合格率, 来确认羟乙基淀粉130氯化钠注射液撤出对洗涤效果的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器设备 ACP215血液处理仪(ACP215型、美国Haemonetics公司)贺利氏(6000型、德国)电热恒温水浴箱(HHW21－600型、天津), 无菌接驳机(SC-201型、日本),血细胞计数仪(KX－21型、日本), 半自动生化分析仪(MF－6.24型、德国)调速多用振荡器(HY－4型、金坛市)-80℃速冻冰箱(MDF－U32V型、日本)。

1.2 试剂与材料 复方甘油试剂(北京博德桑特、080915)三珠袋(北京博德桑特、080904)ACP215红细胞洗涤耗材(美国血技、G09120)9%氯化钠(北京博德桑特、091221)羟乙基淀粉130氯化钠注射液(山东长富、10020183)0.9%氯化钠(山东威高、0809081)输血器(江西洪达、080903)钨酸钠(天津化学试剂四厂、20090316)氢氧化钠(天津博迪化工、20100307)乙二醇(天津富宇精细化工、090919)无水乙醇(沈阳华东试剂厂、20100307)稀释液(希森美康医用电子有限公司、G9142)酚酞(沈阳华东试剂厂、20091112)高碘酸钠(天津福晨化学试剂厂、20080620)血浆游离血红蛋白试剂盒(北京瑞尔达生物科技、C1005016)溶血剂(希森美康医用电子有限公司、R9059)

1.3 冰冻红细胞制备 取32袋距采用日期6 d之内新鲜全血200ml/袋, 用贺利氏6000, 2200转25 min离心, 用分浆夹去除上层血浆, 采用人工手法, 把浓缩红细胞用无菌接驳机接驳并转移到三珠袋, 用调速多用振荡器和输血器加入160ml复方甘油溶液, 室温静止30 min后, 装盒, 送入-80℃冰箱速冻。

1.4 冰冻解冻去甘油红细胞制备 将保存30 d的冰冻红细胞32袋随机分为两组, A组用洗涤液为9%氯化钠注射液、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠；B组用洗涤液为9%氯化钠、0.9%氯化钠。在37℃电热恒温水浴箱内4-6 min,使冰冻红细胞融解, 确认无渗漏后, 用ACP215血液处理仪、无菌接驳机接驳进行洗涤, 使用去甘油化洗涤程序进行解冻洗涤。

1.5 检测项目数据 分别计算两组红细胞回收率(%), 白细胞残留率(%), 血小板残留率(%), 甘油含量, 血浆游离血红蛋白含量, 体外溶血等指标。

1.6 质量标准 红细胞回收率≥80%, 白细胞残留率≤1%,血小板残留率≤1%, 甘油含量<10g/L, 血浆游离血红蛋白含量≤1g/L, 体外溶血≤50%

1.7 统计学方法 采用SPSS11软件进行检查

2 结果

两组洗涤液, A组(9%氯化钠溶液, 羟乙基淀粉130氯化钠注射液, 0.9%氯化钠溶液)、B组(9%氯化钠溶液, 0.9%氯化钠溶液)制备冰冻解冻去甘油红细胞, 检测数据及比较,两组检测数据之间均无统计学意义(P＞0.05)

组别 洗涤液 n(份)体外溶血(%)A组 9%氯化钠溶液，羟乙基淀粉130氯化钠注射液0.9%氯化钠溶液 16 81.0±2.6% 0.67±0.14% 0.00% 4.8±0.43 0.62±0.11 13±5 B组 9%氯化钠溶液 0.9%氯化钠溶液 16 82.0±2.3% 0.61±0.26% 0.00% 5.1±0.13 0.53±0.12 12±4红细胞回收率(%)白细胞残留率(%)血小板残留率(%)甘油含量(g/L)血浆游离血红蛋白(g/L)

3 讨论

冰冻红细胞制备基本有两种方法：高浓度甘油保存法和低浓度甘油保存法。高浓度甘油保存法：终浓度为40%, 储存在-65℃或-65℃以下冰箱中；中浓度甘油保存法：终浓度为20%, 储存在-120℃以下液氧中；低浓度甘油保存法：终浓度14%, 采用快速冷冻, 储存在-150℃液氧气箱或液氧中。制备冰冻解冻去甘油红细胞方法可分为慢速糖液聚集洗涤制备法, 由美国人哈斯(Huggins)发明, 加等体积的50%葡萄糖和10%蔗糖与0.9%氯化钠溶液, 先用高渗逐渐过度到等渗, 洗涤液为9%氯化钠、0.9%氯化钠组合, 目前我国一般采用9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠组合进行冰冻解冻红细胞洗涤, 但是本站发生6例在洗涤过程中发生机器堵塞现象, 既影响机器使用寿命, 又延误制备时间。用ACP215血液处理仪洗涤冰冻红细胞时, 在洗涤液中不添加羟乙基淀粉130氯化钠制备冰冻解冻去甘油红细胞各项检测指标均达到国家标准, 与添加羟乙基淀粉130氯化钠的洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞检测结果无显著差异。这样既可节约有耗材成本, 又能方便快捷, 为抢救患者生命争取了宝贵时间, 值得推广应用。

［1］ 王培华.输血技术学.北京：人民卫生出版社, 2002.

［2］ 邱艳.全血成分务质量要求与血液标准华.北京：中国标准出版社, 2003.

［3］ 中华人民共和国国家标准 全血成分血质量要求GB18469-2001.

［4］ 袁连根、李延成、张志勇 .冰冻红细胞解冻条件的改进.中国生物制品学杂志, 2007,20(11):861-862.

130033 长春市中心血站