左卡尼汀口服液稳定性的研究

刘 青，王姿婧，戴学文，杨金荣，房志仲

（天津医科大学药学院药剂学教研室，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

左卡尼汀是哺乳动物能量代谢中必需的体内天然物质，其主要功能是协助细胞中的长链脂肪酰辅酶A穿过线粒体内膜而进入线粒体基质内进行β氧化而产生能量，与机体的器官、组织代谢密切相关[1]。左卡尼汀的缺乏会导致能量供应障碍及脂肪酸代谢的各种中间产物累积中毒，出现心肌病变、心律失常、机体疲劳等症状[2]。由于其正常剂量内不良反应少、安全性高的特点，现临床上得到了广泛的应用[3]。目前临床上使用的主要剂型有注射剂和口服剂，但室温下贮存期应多长时间为有效，尚未见相关报道。为此，笔者对左卡尼汀口服液的稳定性进行科学考察。本文采用经典恒温加速试验法对左卡尼汀口服液的稳定性进行试验，为制定其有效期提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 ALC-210.4型电子天平 (北京赛多利斯系统仪器有限公司)；KQ-100B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；美国高效液相色谱Spectra-Physics，检测器Spectra Focus100，输液泵SP8810，色谱柱 Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm，P/N：91182045）；Anastar色谱工作站；2DY-II-I IKVA型高精度单相交流稳压电源（国营启动电讯厂）；SYC－15型超级恒温水浴（南京桑力电子设备厂）；SWQ智能数字恒温控制器（南京桑力电子设备厂）；酸度计PHS－25（数显）p H计（上海精密科学仪器有限公司）。

1.1.2 试药 酒石酸左旋肉碱原料药 (郑州安诚生物科技有限公司，批号：120102AC)；左卡尼汀注射液对照品（意大利西格马生物制药公司，批号：111595）；阿斯巴甜（日本味之素株式会社，批号：T06X22003）；甲醇（天津市风船化学试剂科技有限公司，分析纯，批号：20121018）；磷酸二氢钾（天津市风船化学试剂科技有限公司，分析纯，批号：20100108）；磷酸（天津市化学试剂三厂，分析纯，批号：20090108）；重蒸水（自制）。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件色谱柱：KromasilC18（200mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.05mol·L－1磷酸二氢钾溶液（80%磷酸调节 p H 至 2.4）∶甲醇＝95∶5，流速：0.5mL·min－1，检测波长：225nm，柱温：室温，进样量：20μL。

1.2.2 供试液的配制 供试药液I：精密量取左卡尼汀对照品适量，加流动相制成每1mL中约含有左卡尼汀2mg的溶液，即得。

1.2.3 标准曲线的绘制 精密称取酒石酸左旋肉碱约3.638 3 g，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取此溶液0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4 和 0.5mL 分别置 10mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按照“1.2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。

1.2.4 精密度试验 取供试药液I，按照“1.2.1”项下色谱条件于同一天内平行进样6次，计算RSD值，得到日内精密度。连续进样6 d，计算RSD值，得到日间精密度。

1.2.5 稳定性试验 取供试药液 I，按照“1.2.1”项下色谱条件分别于 0、3、6、9、12、24 和 48 h 进样，计算RSD值。

1.2.6 回收率试验 精密称取酒石酸左旋肉碱，按处方量的80%、100%、120%分别精密加入相应的辅料，加入流动相稀释为3种不同浓度的溶液，每组不同比例各3份(共9份)，按“1.2.1”项下色谱条件，测定峰面积(A)，按照外标一点法，计算浓度，并将测得值与加入值比较，计算回收率。

1.2.7 破坏性试验

1.2.7.1 酸破坏：精密称取酒石酸左旋肉碱3.638 3 g于 100mL 量瓶中，加入 0.1mol·L－1HCl50mL，水浴加热，每隔30min取样2mL，试验进行3 h。每个样品冷却至室温后，用0.1mol·L－1NaOH中和，过滤，精密吸取续滤液0.2mL于10mL量瓶，流动相稀释定容，于上述色谱条件进样，测定，记录其色谱图。

1.2.7.2 碱破坏：精密称取酒石酸左旋肉碱3.638 3 g于 100mL 量瓶中，加入 0.1mol·L－1NaOH 50mL，水浴加热，每隔30min取样2mL，试验进行3 h。每个样品冷却至室温后，用 0.1mol·L－1HCl中和，过滤，精密吸取续滤液0.2mL于10mL量瓶，流动相稀释定容，于上述色谱条件进样，测定，记录其色谱图。

1.2.7.3 氧破坏：精密称取酒石酸左旋肉碱3.638 3 g于 100mL 量瓶中，加入 0.1mol·L－13%H2O250mL，水浴加热，每隔30min取样2mL，试验进行3 h。取出的样品敞口加热，使H2O2分解，过滤，精密吸取续滤液0.2mL于10mL量瓶，流动相稀释定容，于上述色谱条件进样，测定，记录其色谱图。

1.2.8 经典恒温试验[4]将左卡尼汀口服液样品灌装于 10mL 安瓿中，熔封，分别置于 60、70、80、90 ℃的恒温水浴中，各温度按试验设计时间取样，每次分别取出2支安瓿，自然冷却至室温，按“1.2.2”项下配制成供试品溶液，进样20μL测定。

2 结果

2.1 标准曲线 按“1.2.3”项下条件进行测定，左卡尼汀的回归方程为：C=38 189A+27 720，r=0.999 8。结果表明左卡尼汀在0.50～10.00mg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。

2.2 精密度 测得左卡尼汀样品溶液的日内精密度的相对标准偏差为0.48%，日间精密度的相对标准偏差为0.39%，均小于2%，方法重现性良好，符合要求。

2.3 稳定性 测得左卡尼汀样品溶液稳定性的相对标准偏差为0.39%，小于2%，结果表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.4 回收率 测得样品中左卡尼汀的平均回收率为100.38%，RSD为0.85%，回收率在98%～102%之间，相对标准偏差小于2%，符合规定。结果见表1。

表1 左卡尼汀回收率试验结果(n=9)Tab 1 Resu ltsof recovery testof L-carnitine(n=9)

2.5 破坏试验 酒石酸左卡尼汀在强酸条件下较稳定，在强碱、氧化破坏时，左卡尼汀均不易与酒石酸分离，影响测定结果。见图1~3。

图1 左卡尼汀酸破坏HPLC图Fig 1 HPLC chromatogram sof L-carnitineacid destruction

图2 左卡尼汀碱破坏HPLC图Fig 2 HPLC chrom atogram sof L-carnitinebasedestruction

图3 左卡尼汀氧破坏HPLC图Fig 3 HPLC chromatogram sof L-carnitineoxidantdestruction

2.6 经典恒温试验 按“1.2.8”项下方法进行测定，得出左卡尼汀口服液在不同温度下的分解数据。见表2。

表2 左卡尼汀口服液在不同温度下的分解数据Tab 2 Degradation of L-carnitine oral liquid at different temperatures

以相对质量分数的对数（lgC）对时间（t）作图，得到不同温度下左卡尼汀的回归方程及分解速度常数。结果见表3。

表3 左卡尼汀口服液在不同温度下的回归方程及分解速度常数Tab 3 Regression equations and the degradation rate constantsof L-carnitineoral liquid atdifferent tem peratures

根据Arrhenius指数定律：lgK=-E/2.303RT+lgA，以lgK对1/T做线性回归，得回归方程：lgK=-2 934.5/T+5.805 7；|r|=0.990 4。由此推算室温（25℃）的分解速度常数K及有效期为：K25℃=9.190 49E-05，t0.9=0.105 4/K25℃=1 146.84 d ≈ 3.19 年。

3 讨论

稳定性试验的目的是考察原料药或药物制剂在温度、湿度、光线等因素的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、运输、贮藏条件提供依据，并通过试验数据分析确定药品的有效期[5-6]。多数情况下，药物的降解都符合一级反应动力学规律[7]。加速预测法中的经典恒温法尤其适用于液体制剂，其原理是根据Arrhenius的指数定律K=Ae-E/RT，主要反映温度对于反应速率常数的影响，从而预测药物在常温下的稳定性情况[8]。以lgK对l/T作图得一直线，由直线的斜率可以计算出活化能E，将直线外推至室温，可以求出室温时的降解常数（K），由K25℃可以求出分解 10%所需的时间（即 t0.9）[9]。

由于加速试验的试验条件有别于实际贮存条件，得出的结果存在一定的偏差。因此，加速试验的数据可以用来指导制剂处方设计、制备工艺的确定及其有效期的预测，及时发现问题并加以纠正，但是不能以此作为确定药物稳定性及有效期的唯一依据[10]。

本试验采用经典恒温法考察左卡尼汀口服液的稳定性。加速试验结果表明，温度和时间不影响其颜色、澄明度和pH值。经推算左卡尼汀口服液在室温下有效期为3年，表明本品在室温下是稳定的。

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