RP-HPLC测定保婴镇惊丸中甘草苷的含量

巩长芹

·实验研究·

RP-HPLC测定保婴镇惊丸中甘草苷的含量

巩长芹

目的建立保婴镇惊丸中甘草苷的含量测定方法。方法采用C18柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(14∶86)，检测波长为276nm，柱温为40℃，流速：1.0 ml/min。结果甘草苷进样量在0.0973μg～0.9730μg之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996)；平均回收率98.0%，RSD(相对标准偏差)=1.08%(n=6)。结论该方法操作简便，准确性好，可作为保婴镇惊丸中甘草苷的质量控制。

保婴镇惊丸；甘草苷；高效液相色谱法；含量测定

保婴镇惊丸收载于部颁标准第八册，由大黄、甘草、朱砂组成，原质量标准中只有性状和检查项目而无含量测定，为了能更好的控制其质量，本文测定了甘草中甘草苷的含量，建立了准确、简便、可靠分析方法，能有效控制其质量，也有利于提高药品生产质量管理水平。

1 材料与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；Agilent-C18色谱柱；XS205DU电子天平(梅特勒-托利多生产)；电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)；甘草苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111610-201106，含量以93.7%计)；保婴镇惊丸(市售，批号：1012001、1012002、1012003)；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件及系统适应性 以C18为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液(14∶86)为流动相；流速为1.0 ml/min；柱温为40℃；检测波长为276nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于3000。

2.2对照品溶液 精密称取甘草苷对照品20.76 mg，置于200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液 参考快胃片的含量测定方法[1]。取本品，剪碎，取约0.7 g，精密称定，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，回流1 h，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

2.4专属性 按保婴镇惊丸中处方比例精密称取全方中除甘草外的其他药材，按“供试品溶液”条件制备成阴性溶液。照样品测定方法测定，结果在主成分出峰处无干扰。

图1 HPLC图A.对照品 B.供试品

2.5线性关系 分别精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，作标准曲线为Y=1609.09X+4.8507，r=0.9996，结果甘草苷进样量在0.0973～0.9730μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.6精密度 取甘草苷对照品溶液5μl，分别进样6次，以2.1项下的色谱条件测定，以峰面积计算，结果RSD为0.24%，表明仪器的精密度良好。

2.7重复性 取同一样品(1012002)6份，按2.3项下的方法制备供试品溶液，以2.1项下的色谱条件分别进样测定，计算含量，结果甘草苷含量的RSD为1.26%，表明重复性良好。

2.8稳定性 取同一份供试品溶液(1012002)，分别于0、1、2、4、8、12、24 h进样测定，结果甘草苷的RSD为1.37%，表明样品在24 h内稳定。

2.9加样回收试验 取6份已知含量的样品(1012002)，甘草苷的含量为3.12 mg/g，精密称定，取6份，每份中精密加入甘草苷对照品溶液15 ml，按2.3项下的方法制备成供试品溶液，依法，测得量分别为2.5260，2.5319，2.5440，2.5039，2.4968，2.5251 mg，计算得回收率分别为98.01%、98.12%、99.83%、96.78%、97.13%、98.19%，平均值为98.0%，RSD为1.08%。

2.10样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备溶液，依法测定按外标法计算含量。结果批号为1012001、1012002、1012003的样品中甘草苷的含量分别为3.13，3.12，3.21 mg/g。

3 讨论

3.1对甘草苷进行紫外吸收光谱扫描在276nm处有最大吸收，选择276nm波长作为检测波长。

3.2流动相参考快胃片的流动相[1]，通过调整比例，结果以乙腈-0.2%磷酸溶液(14 ∶ 86)为流动相，所得色谱峰峰形较好，阴性无干扰，测定结果准确。

3.3通过试验，证明本方法快速、准确可靠，能有效控制本制剂的质量，可作为本品甘草的质量控制标准。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京：中国医药科技出版社，2010:769-770.

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