逍遥散对抑郁症模型大鼠海马 TNF-α和 c-fos表达的影响

李艳丽

(佳木斯大学附属第二医院,黑龙江 佳木斯 154002)

抑郁症是各种原因引起的以抑郁为主要症状的心境障碍或情感障碍[1]。临床表现为情绪低落、思维迟钝、言语动作减少、自罪感、工作失去兴趣、自觉无用、常有自杀倾向,与癌症及艾滋病并驾齐驱,被公认为是新世纪的三大疾病。中医认为其病因是肝失疏泄、肝气不舒;心神失常、心气不足。临床常用疏理肝脏气机,恢复肝功能,安神养心、补心脾,滋补肝肾的中药复方制剂为主。中药复方制剂由于化学成分多,相互之间起协同作用可以弥补西药易产生耐药性和副作用明显的缺点,在治疗抑郁症等精神疾病中有着不可替代的作用和广泛的前景。逍遥散主要功效为疏肝解郁,在临床上广泛应用于抑郁症的治疗,但实验研究甚少,本实验通过慢性应激和隔离孤养复制抑郁症大鼠模型,来探讨逍遥散治疗抑郁症的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

①实验动物:健康雄性清洁级 SD大鼠 72只 ,体重(200±30)g,由佳木斯大学实验中心提供,合格证号:SCXK-(黑)2010-0008。实验过程中动物自由摄食和饮水 (禁食、禁水应激除外 ),室温18～24℃(冷、热应激除外),相对湿度60%～

70%。②实验药品:处方饮片均购自北京同仁堂制药集团哈尔滨药店,经黑龙江中医药大学佳木斯学院陈孝忠副教授鉴定。遵照《太平惠民和剂局方》原文,逍遥散的制备方法为:准确称取柴胡15g,当归15g,白芍 15g,白术 15g,茯苓 15g,甘草7.5g,于中草药粉碎机中粉碎成最粗粉,加水1500 mL煮沸,保持沸腾 20min,加入 5g煨姜和5 g薄荷,再保持沸腾煎煮10 min,煎煮液过 5层纱布,滤液浓缩至 2g/mL(按生药量计)。阳性对照药氯丙咪嗪购于同泰药店(湖南洞庭药业股份有限公司生产 ,批号:99026)。③实验仪器及试剂:TGL-16G-C型高速台式冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);电子天平(沈阳龙腾电子公司);电击箱(北京医科院药研所);石蜡切片机(莱卡2135型 德国);显微摄影系统(OlymPus B×60日本);医学数码图像分析系统 (麦克奥迪厦门公司)。DAB浓缩型试剂盒(中杉试剂有限公司);兔抗人 TNF-α抗体、兔抗 c-fos抗体(中杉试剂有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组

Wistar大鼠40只,佳木斯大学实验动物中心提供,饲养7d后 ,参考体重和 open-field评分,分为空白组、模型组、阳性对照组,逍遥散组,共计4组,每组10只。于造模 7d后,连续灌胃21d。大鼠给药量参考成人体表面积与大鼠体表面积比例换算,以成人1日生药量为准。阳性对照组:给予0.36mg·kg-1·d-1氯丙咪嗪 ,逍遥散药液给予 5mL·kg-1·d-1。正常组、模型组给予等体积生理盐水。每日1次 ,连续给药21d。每7d复测体重1次,根据体重变化更新灌胃剂量。

1.2.2 模型制备[3]

正常对照组每笼饲养5只,在实验中不接受任何刺激。其余各组每笼1只。在实验的 28d内 ,接受 7种不同的慢性应激,每天随机选取 1种,同种刺激不连续出现,使大鼠不能预料将发生的刺激,包括:足底电击、4℃ 冰水游泳、倾斜鼠笼、潮湿饲养、昼夜颠倒、禁水 12h、禁食 12h。

1.2.3 观测指标

1.2.3.1 糖水消耗量[4]:在实验开始第0天、28天进行,实验开始前24h对各组大鼠禁食,禁水,用含1%浓度的蔗糖水作为大鼠的饮用水,每瓶 150mL,实验当天晚 7点开始,做好标记,次日早7点记录所有瓶中剩余蔗糖水量,计算出糖水消耗量。

1.2.3.2 大鼠海马 TN F-α和 c-fos的表达:实验第28天,大鼠称得体重及行为学测试后,立即断头取双侧海马,置于10%甲醛中固定,石蜡包块,进行免疫组化测定。

1.3 统计学处理

所得数据均采用 SPSS 15.0软件进行单因素方差分析统计学处理,结果均以 (±s)表示。

2 结果

逍遥散对大鼠糖水消耗的影响见表1。逍遥散对大鼠海马 TNF-α和 c-fos表达水平的影响,见表2。

表1 逍遥散对大鼠糖水消耗的影响(mL,±s,n=12)

表1 逍遥散对大鼠糖水消耗的影响(mL,±s,n=12)

注:与模型组比较,★★P ＜0.01。

组别 第0天 第28天空白组 59.5±3.45 58.05±3.87★★模型组 60.83±6.81 30.53±3.09阳性对照组 61.08±5.76 46.52±2.73★★逍遥散组 59.92±4.34 51.70±2.95★★

表2 逍遥散对大鼠海马 TNF-α和 c-fos表达水平的影响(±s,n=12)

表2 逍遥散对大鼠海马 TNF-α和 c-fos表达水平的影响(±s,n=12)

注:与模型组相比,★★P ＜ 0.01;★P ＜ 0.05。

组别 TNF-α阳性细胞面密度×100阳性细胞面密度×100空白组 0.84±0.12★★ 0.52±0.09模型组 1.55±0.18 0.96±0.11★★阳性对照组 1.14±0.16★★ 0.61±0.13★★高剂量组 1.02±0.13★★ 0.58±0.20★

3 讨论

抑郁症是一种常见的精神疾病,主要表现为情绪低落、兴趣减低、悲观、思维迟缓、缺乏主动性、自责自罪、饮食、睡眠差、担心自己患有各种疾病、感到全身多处不适、严重者可出现自杀念头和行为。其发病机制尚无定论,主要有单胺假说[5]、神经递质受体假说[6]、神经内分泌功能学说[7]、免疫系统假说[8]等。本实验通过慢性应激和隔离孤养复制抑郁症大鼠模型,来探讨逍遥散治疗抑郁症的作用机制和抑郁症的发病机制。与空白组相比,模型组大鼠体重减轻、垂直、水平测试得分明显减少、糖水消耗减少;同时模型组大鼠出现类似抑郁症的症状,说明抑郁症模型较理想。

越来越多的研究推测与免疫激活相关的细胞因子分泌可能引起抑郁症。TNF-α等前炎症性细胞因子通过激活下丘脑室旁核中含促肾上皮质激素释放激素神经元,促使腺垂体释放促肾上腺皮质激素,从而活化 HPA轴,导致抑郁症。有研究显示[9],当机体遭受疼痛、缺氧、寒冷等刺激时,使大脑海马的痛感受性神经元被激活,从而导致海马神经元细胞过度增殖,c-fos蛋白的表达增加,启动 CasPase级联反应,最终激活 CasPase-3,导致海马神经元细胞凋亡。本实验结果表明逍遥散可增加模型大鼠体重增长速度、糖水消耗及行为学运动得分,有显著性差异。逍遥散能降低海马 TNF-α和 c-fos的表达,其抗抑郁机制可能是与调节免疫系统功能、抑制海马神经元细胞凋亡和减少脑损伤有关。

[1]龚绍麟.抑郁症 [M].北京:人民卫生出版社,2003,5

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[3]张均田.现代药理实验方法(上册)[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1998,1061-1062

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[9]卢静戴,体俊,曾因明.c-fos基因表达的相关机制和意义 [J].国外医学,2005,25(5):273-275