益经汤对卵巢早衰大鼠作用的实验研究

张广梅，任世存，王仁嫒，赵协慧，洒玉萍，赵艳霞，康文娟，李永平

(青海大学医学院，青海 西宁 810001)

卵巢早衰是妇科内分泌领域的常见病，是一种病因复杂、治疗困难、给患者造成巨大痛苦的疾病，目前还没有明确的、有效的针对恢复卵巢自然功能的治疗方法。西医多采用雌孕激素的人工周期疗法，但用药后的副作用使患者难以长期坚持，使用的禁忌证又使一部分患者无法治疗。临床和实验研究证实，中药对卵巢有多系统、多环节的整体调节作用。因此，辨证论治运用中药比单纯应用西药针对雌激素水平降低的干预措施有着明显优势并且能够避免性激素带来的不良反应与依赖性。

我们选用明末清初著名的医学家傅山的《傅青主女科》中治疗“年未老经水断”的益经汤［1］，对雷公藤多苷片灌胃导致的卵巢早衰模型大鼠进行治疗，并通过与空白组、中药对照组及模型组间FSH、E2的检测、卵巢组织形态学变化的观察，了解益经汤对卵巢早衰的作用效果，揭示益经汤治疗卵巢早衰的作用机制。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

雷公藤多苷片(每片10mg，湖南协力药业有限公司，批号20101201，国药准字Z43020138);益经汤(青海省中医院药剂科提供)组成:熟地黄30g，白术30g，山药 15g，当归 15g，白芍 15g，生枣仁 9g，沙参 9g，牡丹皮6g，党参6g，柴胡6g，杜仲3g，水煎后去渣，浓缩至每毫升含生药1g，4℃冰箱恒温保存;六味地黄丸(青海宝鉴堂国药有限公司，批号 WJ631059，国药准字Z63020070);性激素化学发光免疫分析试剂盒(西门子公司)。

1.2 实验动物

SD雌性大鼠，12周龄，体质量250～270g，由青海省地方病实验动物中心提供。适应性喂养2～3天，连续5～10天做阴道涂片，有动情周期的大鼠纳入实验组。

1.3 方法

1.3.1 动物分组 将纳入实验组的动物随机分组，每组10只，即空白组，模型组，益经汤高、低剂量组，中药对照组。

1.3.2 造模 空白组每天生理盐水20mL/kg灌胃，其余各组均用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃造模，每日1次，连续灌胃14天。

1.3.3 给药方法

空白组:喂普通饲料+生理盐水9mL/kg灌胃;模型组:造模后喂普通饲料+生理盐水9mL/kg灌胃;益经汤低、高剂量组:造模后喂普通饲料+益经汤水煎液(按人鼠换算计量)灌胃。高剂量组造模结束后24h用益经汤24g/kg灌胃，每日1次;低剂量组造模结束后24h用益经汤12g/kg灌胃，每日1次。中药对照组:造模后喂普通饲料+六味地黄丸水溶液20mL/kg/d灌胃。

益经汤高、低剂量组和中药对照组分别连续治疗20天，在末次治疗24h后，五组大鼠腹主动脉取血测检测指标，断颈处死大鼠，剖腹取卵巢。

1.4 观测指标

1.4.1 观察大鼠动情周期

光镜观察大鼠阴道脱落细胞的变化来判定动情周期。

1.4.2 大鼠血清性激素(FSH、E2)水平检测

大鼠用20%的乌拉坦2～5ml麻醉后，腹主动脉取血，置一干净试管中，放入室温自然静置30min后，以3 000r/min速度离心，取上清液于－80℃冰箱保存，用化学发光免疫法测定FSH、E2值。

1.4.3 大鼠卵巢组织形态学观察

采血后断头法处死动物，摘取卵巢，剔除脂肪和其他组织，放入天平精确称取其重量;并将卵巢固定、包埋、切片、HE染色，进行组织学检查。

1.5 统计学处理

实验数据采用 SPSS 17.0统计软件进行分析处理。

2 结果

2.1 大鼠阴道脱落细胞涂片

将细棉签用生理盐水浸湿，插入大鼠阴道内轻轻转动后取出。将分泌物涂在玻片上，95%乙醇固定20min，巴氏染色法染色。空白组见大而无核的角化细胞为动情期，每只大鼠的动情期为平均每次4～5天;模型组为平均每次7～8天。中药高、低剂量、六味地黄丸组依次为平均每次4～5天，6～7天，5～6天。

2.2 血清性激素水平检测 结果见表1。

表1 大鼠血清E2、FSH结果(±s)

表1 大鼠血清E2、FSH结果(±s)

注:与空白组比较，*P＜0.05;与模型组比较，▲P＜0.05;与六味地黄丸组比较，#P＜0.05。

组别 n E2(pg/mL) FSH(mIU/mL)空白组0.0209 ±0.0034 10 84.47 ±22.67 0.0279 ±0.0028模型组 10 53.79 ±26.02* 0.0143 ±0.0014六味地黄丸组 10 64.85±30.41▲ 0.0160±0.0038益经汤低剂量组 10 69.82±27.58▲ 0.0124±0.0013益经汤高剂量组 10 78.54±22.91▲#

由表1可知，模型组E2水平降低与空白组比较，其差异有统计学意义;治疗后E2水平升高，以益经汤高剂量组为最显著(P＜0.05);FSH各组与空白组比较，差异无统计学意义。

2.3 卵巢组织形态学结果

光镜观察:大鼠卵巢组织形态学病理分析:1)空白组:卵巢体积大，卵巢皮质内见多量初级卵泡及生长卵泡，黄体发育好，体积大，黄体细胞丰富，间质及纤维血管少、间质腺少见(图1)。2)模型组:卵巢体积缩小，卵巢皮质内见少量初级卵泡及生长卵泡，黄体数量少，闭锁卵泡多，可见较多间质、纤维血管、间质腺(图2)。3)中药高剂量组、中药低剂量组、六味地黄丸组:卵巢皮质内见大量初级卵泡及生长卵泡，较多近成熟卵泡，黄体数多，黄体生长良好(图3～5)。以中药高剂量组最为明显。

图1 正常组HE染色图(40×)

图2 模型组HE(染色图40×)

图3 益经汤高剂量组HE染色图(40×)

图4 益经汤低剂量组HE(染色图40×)

图5 六味地黄丸组HE(染色图40×)

3 讨论

中医学中虽无卵巢早衰病名，但古医书籍有相似证散见于闭经、血枯、年未老经水断、早发绝经、不孕等证的记载之中。中医学认为，月经的产生和肝、脾、肾三脏密切相关。肾藏精，主生殖，为先天之本，所以肾脏对月经的产生及生理活动起主导作用;肝肾同源，肝藏血，主升发、疏泄，条畅全身气机，具有排泄月经功能，对月经有重要的调节作用;脾主运化，为气血生化之源、后天之本，为月经提供物质基础。而心通过胞脉与胞宫相通，且心气下通于肾，心肾相交，血脉流畅，月事如常。若肾阴亏虚，水不涵木可致肝阳上亢，水不上济心火则心肾不交;脾失健运，气血生化乏源，心失所养。以上原因都会导致患者出现一系列躯体及精神心理症状。因此，现代医家认为肾精亏乏、肾气不足是其根本病机，而心肝脾功能失常与卵巢早衰发病密切相关。本虚标实、虚多实少是本病的病机特点。所以对于卵巢早衰基本治则应为益肾健脾，养心调肝，活血通经。

益经汤出自明末清初著名的医学家傅山的医著《傅青主女科》上卷调经篇“年未老经水断”中，方剂由熟地黄、白术、山药、当归、白芍、生枣仁、牡丹皮、沙参、柴胡、杜仲、人参组成。傅山在益经汤方后注明“此方心肝脾肾四经同治药也。妙在补以通之，散以开之……”，且云此方“连服八剂而经通矣，服三十剂而经不再闭，兼可受孕”。可见本方具有良好的治疗卵巢早衰的临床功效。而现代临床应用也证实，益经汤对于继发性闭经、不孕症、围绝经期综合征都有着显著的疗效［2－4］。

本实验结果表明，雷公藤可明显损伤大鼠卵巢组织萎缩，使各级卵泡减少，尤其是成熟卵泡减少，因此雌激素分泌减少，故E2水平比较，模型组较空白组明显降低，其差异有统计学意义(P＜0.05)，表明造模成功。而FSH各组间比较差异无统计学意义。益经汤可使实验性卵巢早衰大鼠降低的雌激素水平升高并接近正常水平，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，且疗效以益经汤高剂量组为最好。说明益经汤具有促进各级卵泡发育，尤其是促使优势卵泡成熟化从而促进颗粒细胞增殖，增加雌激素分泌，对卵巢早衰有较好的治疗效果。

［1］傅山.傅青主女科［M］.上海:上海科学技术出版社，1991:27.

［2］宋永秀，解祥丽.益经汤治疗继发性闭经28例［J］.中国民间疗法，2004，12(3):45 －46.

［3］张秀梅，和岚.益经汤加减治疗虚性闭经34例体会［J］.浙江中医药大学学报，2007，31(5):585 －587.

［4］张素香，陈燕妮.中西医结合治疗卵巢早衰［J］.实用中西医结合临床，2010，10(1):38 －40.