白藜芦醇对高脂喂养C57BL/6J小鼠肝脏脂代谢的影响

赵 越，詹志鹏，袁 媛，王博涵，郑晓南，任亚浩

(中国医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室，辽宁沈阳 110001)

白藜芦醇对高脂喂养C57BL/6J小鼠肝脏脂代谢的影响

赵 越，詹志鹏，袁 媛，王博涵，郑晓南，任亚浩

(中国医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室，辽宁沈阳 110001)

目的 探讨白藜芦醇对高脂饲料喂养的C57BL/6J小鼠肝脏脂代谢的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠30只，按体重分为对照组、高脂组和干预组，每组10只，对照组和高脂组分别喂饲基础饲料和高脂饲料并给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，干预组在喂饲高脂饲料的同时给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液溶解的白藜芦醇灌胃，第16周解剖分离小鼠肝脏，制作HE切片，测定肝脏甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及游离脂肪酸(FFA)含量。结果 肝脏HE切片可见高脂组肝细胞有大量脂肪空泡形成，而干预组与对照组相似，肝细胞未见脂肪变性改变;肝脏TG和TC含量，高脂组(TG 为5.78±1.69 mmol/L，TC为2.69±1.20 mmol/L)均明显高于对照组(TG 为4.22 ±1.41 mmol/L，TC 为0.96 ±0.35 mmol/L)和干预组(TG 为4.63 ±1.70 mmol/L，TC 为 1.65 ±0.89 mmol/L)(P＜0.05)，而干预组和对照组相比，差异均无显著性意义(P＞0.05);肝脏FFA含量，各组间差异无显著性意义(P＞0.05)。结论 白藜芦醇可降低高脂喂养C57BL/6J小鼠肝脏TG、TC含量。

白藜芦醇;C57BL/6J小鼠;甘油三酯;总胆固醇

近年来，随着经济的发展和居民生活水平的提高，中国的膳食结构正在逐渐向西方化转变，膳食高能量、高脂肪和体力活动减少造成非酒精性脂肪肝病的发病率快速上升。白藜芦醇是一种植物多酚类物质，大量存在于葡萄皮和中药虎杖中，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、诱导细胞凋亡、延长寿命等多种生物活性［1-3］。本研究采用白藜芦醇对高脂饲料喂养的C57BL/6J小鼠进行预防性干预，通过观察肝脏HE切片及测定肝脏脂代谢相关指标，探讨白藜芦醇对肝脏脂代谢的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物

30只雄性C57BL/6J小鼠，体重18～22 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

1.2 主要仪器及试剂

ECOM-F6124半自动生化分析仪(德国 Eppendorf);UV310紫外可见光分光光度计(英国PYE-UNICAM);甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)测定用试剂盒(北京中生北控生物科技有限公司);游离脂肪酸(FFA)测定用试剂盒(南京建成生物技术有限公司);白藜芦醇(西安冠宇生物技术有限公司);胆固醇、胆盐、羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)。

1.3 动物分组与干预

30只雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养1周后，按体重随机分为基础对照组(对照组)、高脂饲料组(高脂组)、白藜芦醇干预组(干预组)，每组10只。对照组和高脂组在每天分别喂饲基础饲料(由中国医科大学实验动物部提供)和高脂饲料(含88.75%的基础饲料、10%的猪油、1%的胆固醇和0.25%的胆盐)的基础上给予0.5%的羧甲基纤维素钠溶液灌胃，干预组在喂饲高脂饲料的同时每天给予0.5%的羧甲基纤维素钠溶液溶解的浓度为22.5 mg/kg·bw·d的白藜芦醇灌胃。实验期间小鼠自由摄食、饮水，室内通风良好，温度(22±2)℃。干预时间为16周。

1.4 样本采集与指标测定

干预期末，将小鼠禁食12 h后，用乙醚麻醉，脱颈椎处死，迅速分离肝脏，于肝右叶中部取1块1 cm×0.5 cm×0.3 cm大小的肝组织放入10%中性甲醛中固定制作HE切片，采用Olympus光学显微镜观察肝脏病理改变。称取150～200 mg肝组织，氯仿 - 甲醇法［4］测定肝脏 TG、TC 含量，另取50～100 mg肝组织，用0.9%生理盐水制成10%组织匀浆，3000 r/min离心15 min，取上清液，按试剂盒说明用UV310紫外可见光分光光度计测定FFA含量。

1.5 统计学方法

实验结果用±s表示，用 SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析，组间两两比较用LSD法，检验水准 α =0.05。

2 结 果

2.1 各组小鼠肝脏病理学改变

干预结束时小鼠肝脏HE染色光镜下观察，高脂组小鼠肝组织呈弥漫性脂肪变，约有30% ～50%的肝细胞发生了脂肪变性;而干预组和对照组相似，肝小叶结构完整，肝细胞形态正常，排列紧密，未见脂肪变性改变。见图1。

2.2 各组小鼠肝脏TG、TC、FFA含量比较

小鼠肝脏TG和TC含量，高脂组均明显高于对照组和干预组(P＜0.05)，而干预组和对照组相比，差异无显著性意义(P＞0.05);小鼠肝脏FFA含量，以高脂组最高，干预组次之，对照组最低，但各组间差异无显著性意义(P＞0.05)。见表1。

图1 各组小鼠肝脏HE切片(×400)Fig 1 HE staining of mice in each group

表1 各组小鼠肝脏TG、TC、FFA含量比较Tab 1 The contrast of TG，TC and FFA content of mice live in each group (n=10，±s)

表1 各组小鼠肝脏TG、TC、FFA含量比较Tab 1 The contrast of TG，TC and FFA content of mice live in each group (n=10，±s)

1)与高脂组比较，P＜0.05

组别 TG(mmol/L) TC(mmol/L) FFA(μmol/L)对照组 4.22 ±1.411) 0.96 ±0.351)114.63 ±24.33 108.38 ±20.55高脂组 5.78 ±1.69 2.69 ±1.20 122.65 ±20.79干预组 4.63 ±1.701) 1.65 ±0.891)

3 讨 论

目前，动物脂肪肝造模方式主要分为先天型、转基因动物、化学物质诱导和高脂饲料诱导这4种形式［5］。用高脂饲料诱导的动物脂肪肝模型，病理特征接近人类、方法简单、价格低廉，是诱导非酒精性脂肪肝的常用方法［6］。而雄性C57BL/6J小鼠对营养性肝脏损伤有显著易感性，是该类研究的最佳受试对象。本次研究中高脂组和干预组C57BL/6J小鼠共喂饲高脂饲料16周，干预组在喂饲高脂饲料的同时采用白藜芦醇进行预防性干预。有研究显示，白藜芦醇干预剂量为22.5 mg/kg·bw·d时，降低小鼠血脂的作用最为明显［7］，故本次研究中白藜芦醇的干预剂量定为22.5mg/kg·bw·d。由各组小鼠肝脏HE切片可见，高脂组肝组织具有明显的脂肪变性改变，而干预组肝组织形态正常，提示白藜芦醇能够预防高脂饮食下C57BL/6J小鼠肝脏脂肪变性的发生。但本研究未对小鼠肝脏病理学改变进行半定量分析，即脂肪特殊染色苏丹Ⅲ染色。由各组小鼠肝脏TG、TC和FFA水平可见，干预组TG、TC含量均明显低于高脂组;而FFA含量干预组与高脂组比较虽无显著性意义，但呈现一定的下降趋势。这一结果提示白藜芦醇对肝脂肪变性的预防保护作用可能主要是通过降低肝脏TG、TC含量实现的。以往研究认为，白藜芦醇可通过多种途径调节肝脏脂代谢。尚敬等［8］采用白藜芦醇对高脂饮食大鼠进行干预，发现白藜芦醇可通过磷酸腺苷活化蛋白激酶途径同时改善胰岛素抵抗和降低肝脏TG、TC含量。研究表明利用白藜芦醇对软脂酸钠诱导的肝细胞脂肪变性进行干预，风险白藜芦醇可以激活沉默信息调节因子1(SIRT1)，抑制固醇调节元件结合蛋白的表达，进而降低肝细胞内脂质的积累［9］。

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［3］Cucciolla V，Borriello A，Oliva A，et al.Resveratrol:from basic science to the clinic［J］.Cell Cycle，2007，6(20):2495-2510.

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［9］Wang GL，Fu YC，Xu WC，et al.Resveratrol inhibits the expression of SREBP1 in cell model of steatosis via Sirt1-FOXO1 signaling pathway［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2009，380(3):644 -649.

Effect of resveratrol on liver lipid metabolism in high-fat diet C57BL/6J mice

ZHAO Yue，ZHAN Zhi-peng，YUAN Yuan，WANG Bo-han，ZHENG Xiao-nan，REN Ya-hao
(Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，China Medical University，Shenyang110001，China)

［Abstract］ObjectiveTo explore the effect of resveratrol on liver lipid metabolism in high - fat diet C57BL/6J mice.MethodsThe male C57BL/6J mice(n=30)were randomly divided into 3 groups(10 mice in each group)，including normal control group(NC)，high fat diet group(HFD)and resveratrol intervention group(RI).NC and HFD were fed a stock rodent diet and a high fat diet respectively，and meanwhile，both were given 0.5%CMC intragastric administration.RI was fed a high fat diet and given resveratrol intragastric administration.After 16 weeks，separated mice livers and made HE slices，determined liver triglyceride(TG)，total cholesterol(TC)and free fatty acid(FFA).ResultsObserved from the liver HE slices，there were many fat empty bubbles in the HFD.RI was the same as NC and no steatosis changes.Liver TG(5.78 ±1.69)mmol/L and TC(2.69 ±1.20)mmol/L content in HFD were both higher than RI(TG:4.22 ±1.41 mmol/L，TC:0.96 ±0.35 mmol/L)and NC(TG:4.63 ±1.70 mmol/L，TC:1.65 ±0.89 mmol/L)(P＜0.05)，but there were not significantly different between RI and NC(P＞0.05).Liver FFA content was not significantly different among 3 groups(P＞0.05).ConclusionResveratrol can reduce liver TG and TC content in high-fat diet C57BL/6J mice.

［Key words］resveratrol;C57BL/6J mice;triglyceride;total cholesterol

R 151.2

A

1671-7295(2013)02-0116-03

赵越，詹志鹏，袁媛，等.白藜芦醇对高脂喂养C57BL/6J小鼠肝脏脂代谢的影响［J］.大连医科大学学报，2013，35(2):116 -118.

10.11724/jdmu.2013.02.04

辽宁省教育厅高校科学基金(2009A720)

赵越(1968-)，男，辽宁沈阳人，主管技师。E-mail:feigo_dl@163.com

2012-11-26;

2013-03-04)