高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量

李建芳，黄劲通

(1.广西壮族自治区北海食品药品检验所，广西 北海 536000; 2.广西恒拓集团仁盛制药有限公司，广西防城港 535500)

银花感冒冲剂由金银花、连翘、防风等6味药组成的中药制剂，收载于《国家卫生部药品标准·中药成方制剂(第二册)》，具有清热、解毒、利咽等功效，用于治疗感冒发热、头痛、咽喉肿痛等症，临床应用广泛。原质量标准无含量测定项。方中金银花的有效成分为绿原酸。为控制制剂质量，保证临床用药安全有效，本试验中采用高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸的含量[1]，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10Atvp型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD－10Avp型紫外检测仪(日本岛津);威玛龙色谱数据工作站;BP211D型电子天平(瑞士梅特勒)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110753－200413，供含量测定用);银花感冒冲剂样品(自制产品，批号分别为110921，111010，111015);乙晴为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13∶37);检测波长:327 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL。在此条件下，色谱图见图1，理论板数按绿原酸计算应不低于1 500，绿原酸的保留时间约为12.5 min，阴性对照品溶液在绿原酸峰相应位置处无吸收峰，对测定无干扰。

2.2 溶液制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液(10℃以下保存)，作为对照品溶液;取本品适量，研细，取1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率200 W，频率 50 kHz)30 min，取出，放冷，再称重，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取不含金银花的其余各味药，按银花感冒冲剂处方和制备工艺，制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:分别精密吸取2.2项下3种溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依法测定。结果供试品溶液与对照品溶液均在相同保留时间内出现吸收峰，而阴性对照品溶液无干扰峰，方法具有专属性(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取绿原酸对照品溶液1，3，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，依法测定，以峰面积积分值为纵坐标、进样量(μg)为横坐标进行线性回归，回归方程为Y=2.998 710 7X+1.691 010 4，r=0.999 9(n=6)。结果表明，绿原酸进样量在0.050 4～1.008 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，依法重复进样 6次，测定并记录绿原酸峰面积。结果的RSD为 0.4%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别在0，4，8，12，24 h时依法进样测定。结果峰面积的RSD为1.67%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品6份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定。结果绿原酸平均含量为 2.524 8，RSD=1.6%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品6份，每份约1.0 g，分别精密加入对照品溶液(1.001 4 g/L)1，2，2.5 mL，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，每批样品平行测定3次，按外标法计算绿原酸含量。结果批号为110921，111010，111015的样品中绿原酸含量分别为 2.529 3，2.554 7，2.504 1 mg/g。

表1 绿原酸加样回收试验结果(n=6)

3 讨论

2010年版《中国药典(一部)》金银花项下绿原酸含量测定所用流动相为乙腈－0.4%磷酸溶液(10∶90)，本试验通过调整乙腈与0.4%磷酸溶液的比例并作了一系列比较，结果表明，本试验所用的流动相比例，能较好地将绿原酸与相邻峰达到基线分离，分离效果好，阴性无干扰。曾比较了供试品溶液制备的超声处理时间(20，30，40 min)对绿原酸含量的影响，结果表明30 min时己能提取完全。方法学考察结果表明，本方法简便、结果准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:205.