一测多评法研究进展＊

沈小钟 ，刘 瑶 ，杨燕军 ，杨 帆

(1.广东省中药研究所，广东 广州 510520;2.暨南大学药学院，广东 广州 510632;3.重庆市食品药品检验所，重庆 401121)

随着中药现代化步伐的进一步加快，无论是消费者、药品生产企业、科研工作者还是药品监管机构，都对中药质量提出了更高要求。现有中药标准多以单一成分含量反映中药产品质量，但中药成分复杂，仅以一种成分含量无法全面反映中药质量，通过多指标同步质量控制反映中药质量已成为众多专家学者的共识[1]。传统多指标同步质量控制必然要求众多中药对照品，为实现在中药对照品紧缺、成本高昂的条件下的多指标同步质量控制，王智民等[2]于2006年首次提出了一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-maker，QAMS)来解决此问题。该法通过采用一种内参物检测多种组分，节约、准确，已得到广泛认可和应用，并收载于2010年版《中国药典(一部)》[3]。现对近年“一测多评”理论与应用的研究进展进行初步探讨，为中药质量控制提供参考。

1 概念与原理

一测多评法是通过测定中药中一种代表性成分的含量，依据相对校正因子推算该中药中多种待测成分含量，并控制计算值与实测值符合定量方法学要求的一种多指标同步质量控制方法。部分学者提出了其他名称，如系统内标法、内标多控法、替代对照品法等[4-16]，原理基本相同。

该方法的原理是[1]，在一定的线性范围内，成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比。在多指标(s，a，b，…，i，…)质量评价时，以药材(或成药)中某一典型有效成分作内参物(s)，建立内参物与其他待测成分(a，b，…，i，…)间的相对校正因子(RCF，fsa，fsb，fsc，…)，fsi=fs/fi=(As/Cs)/(Ai/Ci)(公式一)式中 As为内参物对照品s峰面积，Cs为内参物对照品s浓度，Ai为某待测成分对照品i峰面积，Ci为某待测成分对照品i浓度。

在方法学建立时，主要是求出内参物与各待测成分间的RCF，并把它作为一个常数用于含量测定中[3]。在测定含量时，内参物(s)的浓度可按常规方法(药典附录ⅥD)进行测定(Cs)，应用 RCF(fsa，fsb，fsc，…)，结合内参物(s)实测值 Cs，计算待测成分(a，b，…，i，…)的浓度 Ci。Ci=fsi× Cs× (Ai/As)(公式二)式中 Ai为供试品中待测成分i的峰面积，Ci为供试品中待测成分i的浓度，As为供试品中内参物s的峰面积，Cs为供试品中内参物s的浓度，fsi为内参物s对待测成分i的校正因子。

一测多评法由王智民等[2]首次提出，并应用于木通的质量评价研究。到目前为止，该方法已在多种中药质量评价研究中得到应用，涉及皂苷、黄酮、生物碱、蒽醌等多类成分。高慧敏等[16]认为，一测多评法将会成为未来中药质量评价的重要发展方向。

2 应用

2.1 皂苷类内参物

王智民等[2]以木通药材为研究对象，实现了通过皂苷PJ1与白木通皂苷B和白木通皂苷C之间相对保留时间差进行色谱峰定位，利用皂苷PJ1和校正因子计算含量，结果与外标法测定值无显著性差异。朱晶晶等[17]同步测定人参和三七药材中8种人参皂苷的含量，利用人参皂苷Rb1和校正因子同步测定人参二醇型皂苷 Rg1，Re，Rf，Rh1和原人参三醇型皂苷 Rc，Rb2，Rb3，Rd 含量，并将结果与外标法所测结果进行比较，进一步验证了一测多评法的可靠性和可行性。黄帅等[18]对一测多评法用于柴胡药材3种皂苷含量测定技术适用性和应用可行性进行了探讨，实现了以柴胡皂苷a与柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之间的相对保留时间差进行色谱峰定位，利用柴胡皂苷a和相对校正因子计算含量，结果与外标法测定值无显著性差异。曹恒涛等[19]建立了替代药品对照法测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的含量测定方法，采用柴胡皂苷d为对照品，以柴胡皂苷d与4种重楼皂苷相对保留时间比进行色谱峰定位，利用柴胡皂苷和相对校正因子计算4种重楼皂苷含量。马超一[20]则利用重楼皂苷Ⅰ为对照，采用一测多评法同时测定5种甾体皂苷含量。宋永贵等[21]建立了同时测定木通果实预知子中多种三萜皂苷成分的一测多评质量控制方法，以皂苷PD和相对校正因子计算皂苷X、皂苷B、皂苷A含量。详见表1。

表1 皂苷类内参物QAMS研究

2.2 黄酮类内参物

朱晶晶等[22]建立了黄芩药材中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种成分一测多评法含量测定方法，通过黄芩苷和相对校正因子计算各成分的含量，与外标法测定结果无显著性差异。该试验还考察了相对保留时间差和保留时间比作为色谱峰定位指标的准确性，得出相对保留时间差作为黄芩中目标色谱峰定位方法比较合理。彭维等[23]建立了以槲皮苷为内参物的一测多评法，验证了其测定田基黄中4个黄酮成分含量与外标测定法测得结果无显著性差异。蔡海霞等[24]建立了黄芪中4个主要异黄酮类化合物的一测多评含量测定方法，以芒柄花素和相对校正因子计算毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的含量，实现一测多评，并对34批黄芪药材及饮片计算结果与外标法测定结果进行比较，结果均显示计算值与实测值间无显著性差异。于霄等[25]以淫羊藿药材为研究对象，药材中4个主要有效成分为指标成分，分别建立淫羊藿苷与朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相对校正因子，计算含量，实现一测多评，并通过相对保留时间比对色谱峰进行定位，同时采用外标法验证，得出一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著差异。李爱红等[26]以槲皮素为内参物，实现通过槲皮素与山柰素、异鼠李素之间相对保留时间比进行色谱峰定位，采用槲皮素和相对校正因子计算含量;同时分别采用外标法和一测多评法测定银杏叶胶囊中3种黄酮醇苷类成分的含量，结果显示一测多评法计算值与外标法的实测值之间没有显著性差异。孔晶晶等[27]采用一测多评法同步测定连翘中4个主要成分的含量，重点探讨不同类型化合物之间开展一测多评研究的准确性和可行性。详见表2。

表2 黄酮类内参物QAMS研究

2.3 生物碱类内参物

宋亚芳等[28]以吴茱萸为研究对象，重点探讨了一测多评法在不同类成分之间应用的可行性与适应性，建立吴茱萸次碱与吴茱萸内酯、吴茱萸碱的相对校正因子，并用该校正因子进行含量计算，实现一测多评;同时采用外标法测定药材中含量，并比较计算值与实测值并无显著性差异。研究发现，在选择内参物时，以吴茱萸次碱为内参物，采用相对校正因子计算样品中其他两种成分的含量与实测结果误差最小，而以吴茱萸内酯或吴茱萸碱为内参物计算其他两种成分含量与实测结果误差偏大。该方法对目标色谱峰选择相对保留比值方法进行定位。匡艳辉等[29]以黄连药材为研究对象，以药材中5个典型生物碱为指标，建立小檗碱与巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱的相对校正因子，并用该校正因子进行含量计算，实现一测多评;同时采用外标法测定药材中该5种生物碱的含量，并比较得出计算值与实测值无显著性差异。刘晖晖等[30]在药典标准基础上，建立黄连配方颗粒的一测多评标准。汪坤等[31]应用一测多评法优选黄连最佳提取工艺，可以有效提取黄连中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀多种生物碱，为中药工艺合理性评价提供了新的思路。李文亮等[32]以博落回果实为研究对象，建立以原阿片碱和相对校正因子，计算别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量，实现一测多评;同时采用外标法测定药材中4种生物碱的含量，验证一测多评法的准确性和可行性。尹萌等[33]建立了同时测定关黄柏中小檗碱、巴马汀和药根碱3种生物碱的一测多评方法，可用于控制关黄柏药材及饮片的质量。李岑等[34]以藏药当佐为研究对象，建立胡椒碱和校正因子计算没食子酸、羟基红花黄色素-A、桂皮醛的含量的一测多评法。刘永利等[35]建立咳喘宁片中5种生物碱类成分的一测多评含量测定方法，以吗啡为对照，建立吗啡和校正因子计算磷酸可待因、盐酸罂粟碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量的一测多评方法，在进行色谱峰定位时研究发现两种定位方法均不可靠。见表3。

表3 生物碱类内参物QAMS研究

2.4 其他类内参物

李文龙等[36]分别以绿原酸和咖啡酸为内参物建立了金银花中6种有机酸的一测多评方法。杨菲等[37]以中药丹参为研究对象，以丹参素钠为内参物建立了原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B一测多评法。黄山君等[38]以芍药苷为内标物，建立其与芍药内酯苷的相对校正因子，并进行含量测定，实现一测多评。杨芳等[39]首次将一测多评法应用于川白芷药材的质量评价中，该法所得3种香豆素类成分含量与传统外标法所得含量之间没有显著性差异。杨桂秀等[40]将一测多评法应用于党参研究，以党参炔苷为内标，实现党参炔苷、党参苷Ⅳ和苍术内酯Ⅲ的一测多评。王钰莹等[41]建立三黄片中以大黄素为内参物，大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚的一测多评法。王瑞等[42]建立了赤芍中两种不同类型共6个化学成分的一测多评法。冯伟红等[43]以中药秦皮为研究对象，以秦皮甲素为参照物，建立了秦皮乙素、秦皮苷和秦皮素一测多评法。贺凤成等[44]建立五味子中4个木脂素类化合物一测多评法。林芳等[45]建立了杜仲中不同类成分的一测多评法，同时测定绿原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量。孟江等[46]建立干姜药材中4种姜酚类成分含量同时测定的一测多评法。见表4。

表4 其他类内参物QAMS研究

3 结语

一测多评法因其独特优势，具有广泛的应用前景。从已有的研究结果来看，合理建立的中药一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著性差异。由于该理论提出时间尚短，加上部分同原理却不同名称的方法出现，使得在应用该法时，关键参数计算方法和取值标准选择尤为重要，如相对校正因子RCFs取值:王智民教授等最初提出该理论时给出的 f值定义为 fi=Ci/Ai[2];而几年后他对定义作了修正，在2011年其发表的一测多评法建立的技术指南中由公式一[1]推出f值定义已经修正为 fi=Ai/Ci。因此，部分研究者试验得出的RCFs值实际是1/f，但是未作说明容易产生混乱;此外，如作为一种标准建议统一取值方法，试验结论需要对影响因素限定的应该依据试验结论加以限定并且进行验证，个人认为f值应取验证值为佳。

另一重要问题是多成分同步测定时指标峰的定位。部分研究者可能忽略了该法是为克服对照品缺乏情况下，以一种对照品的检测实现多指标同步测定和质量评价，部分文献没有给出校正时间，影响了研究在生产检验中的实际应用价值;部分研究者在深入研究后发现建立的一测多评方法无法在缺少对照品前提下进行指标峰定位，如刘永利等经过深入研究后发现以吗啡为内参物建立咳喘宁片的含量测定方法一测多评法可以用于含量测定但是无法进行色谱峰定位，说明该方法用于该制剂质量控制时还需要进一步深入研究。

笔者首次从应用角度对现有一测多评研究现状进行初步探讨，并浅议了实际使用该法测定过程中可能碰到的一些问题。一测多评法是在对照品缺乏的情况下欲实现多指标同步评价，由王智民教授提出，并且得到许多学者的推广。作为一种多指标质量控制评价新模式和新方法，虽然提出之初是作为含量测定方法的一种补充，但是随着药品标准的提高，对照品需求量将会越来越庞大，制备大量对照品必然消耗过多的药材资源并衍生出其他一些问题，而现代社会越来越提倡节约、低碳和环保理念，今后这种矛盾将会更加突出。如应用该方法建立QAMS全国共享数据库，不仅可拓宽该法的应用范围，也可为缓解日益突出的资源矛盾作出贡献。

致谢:本文得到了广东省食品药品监督管理局药品审评认证中心周卫军老师的指导，在此致谢。

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