静脉全血放置时间对网织红细胞参数结果的影响

刘艳红， 李 艳， 何 颖， 万 奖

(武汉大学人民医院检验科，湖北 武汉 430060)

血液分析仪因其方便、快速、准确已被广泛应用，静脉全血样本的存放时间对血液分析结果的影响已有较多报道[1-2]，但大多探讨的是对血液分析常规项目结果的影响，而对网织红细胞(RET)测定的影响少有报道。因RET测定项目非部分医院每日必查常规项目，可能会集中几天的标本统一测定。但标本放置时间是否会影响RET检测结果的准确性，且贫血与非贫血患者标本是否有存在差异，我们采集了20例门诊非贫血患者和30例住院部贫血患者血常规标本于不同时间节点做了比较实验。

材料和方法

一、研究对象

随机选取武汉大学人民医院2010年5月至7月门诊非贫血患者20例及住院贫血患者30例，其中营养性贫血9例，溶血性贫血4例，骨髓增殖性疾病7例，慢性病(高血压、恶性肿瘤、慢性炎症等)贫血10例。

二、仪器和试剂

日本Sysmex公司XE-2100全自动血液分析仪;进口专用配套试剂、质控液及校准液。

三、方法

1.XE-2100 RET参数精密度评价 血液分析仪检测静脉全血之前进行全面保养，并进行重新校准，RET的校正按照厂家维修手册指定的方法进行，再采用配套质控品 CHECK分别评价RET参数的批内精密度和天间精密度，结果均达到厂家规定要求。

2.正规采集门诊患者静脉血2 mL，颠倒5～8次充分混匀。共收集20例标本，标本中红细胞相关参数均为正常。立即在XE-2100全自动血液分析仪上进行RET测定，并分别于采血后2、4、8、24、48及72 h再重复进行 RET检测，并记录RET各参数及白细胞计数的结果。

3.收集住院贫血患者标本30例，于采血后2 h检测RET，然后分别于采血后8、24、48及72 h再重复进行RET检测，并记录 RET各参数及WBC计数的结果。

4.门诊及住院贫血患者标本均于每次检测后存放于4℃冰箱保存，每次检测前从冰箱中取出标本在室温下放置15 min，恢复至室温后再进行检测。

四、统计学方法

结 果

将20例门诊非贫血患者采血后于即时、2、4、8、24、48及72 h分别进行RET检测，结果显示:采血后2、4、8、24、48 及 72 h 分别与即时检测结果相比较，RET计数(RET#)及RET%的结果差异无统计学意义(P＞0.05);其他参数未成熟RET比率(IRF%)、高荧光强度RET(HFR%)、中荧光强度RET(MFR%)及低荧光强度RET(LFR%)的结果在48 h及以前各时间点亦差异无统计学意义(P＞0.05)，而在72 h时检测结果出现明显变化，具体表现为HFR%、MFR%和IRF%呈极明显增高(P＜0.01)，而 LFR%呈极明显降低(P ＜0.01)，见表1。

将30例住院贫血患者采血后于2、8、24、48及72 h分别进行RET检测，结果显示:采血后8、24及48 h分别与2 h时检测结果进行比较，RET#及RET%的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)，仅在72 h时出现明显降低(P ＜0.05);其他参数IRF%、HFR%、MFR%及LFR%的结果从24 h开始即出现明显变化，具体表现为IRF%和MFR%呈极明显增高(P＜0.01)，HFR%呈明显增高(P＜0.05)，而LFR%呈极明显降低(P＜0.01)，见表2。

比较20例门诊非贫血患者采血后于72 h与即时的白细胞计数差异，另将30例住院贫血患者采血后于24 h及72 h分别与2 h进行白细胞计数差异的比较，结果显示:2组之间差异无统计学意义(P ＞0.05)，见表3。

表1 20例非贫血患者静脉全血不同检测时间下RET相关参数的比较

表2 30例贫血患者静脉全血不同检测时间下RET相关参数的比较

表3 贫血及非贫血患者静脉全血不同检测时间下白细胞计数的比较

讨 论

高端血液分析仪检测速度快、精密度高，且可进行RET多项参数的检测。RET是晚幼红细胞脱核后发育为成熟RBC过程中胞浆中含有残留RNA的RBC，Sysmex XE-2100全自动血液分析仪根据RET RNA含量的不同用荧光染料使其着色，用流式细胞术将 RET分成 HFR、MFR和LFR，荧光强度越高，RET越幼稚。IRF是指含高RNA的RET与总RET的比值，是评价红系增生活跃有用的指标，各参数间的关系是:IRF%=HFR%+MFR%。然而由于RET测定非常规项目，标本量较少，有些医院可能会集中几天的标本一起进行测定。为明确标本放置时间过长进行RET检测是否会影响结果的准确性，本实验比较了贫血及非贫血患者采血后不同时间点RET检测结果的差异。

我们认为，采血后立即进行检测(如床边检测)结果应为准确值，此时血液成分尚来不及与抗凝剂发生充分作用，产生形态变化及假性凝集等情况从而影响检测结果。本组研究结果显示，非贫血患者采血后即刻直至72 h为止，RET#及RET%检测结果均无明显改变(P＞0.05);而IRF%、HFR%、MFR%及LFR%的结果至72 h时检测结果才出现明显变化(详见表1)。与此结果略有不同的是，贫血患者RET#及RET%至72 h时检测结果开始出现明显降低(P＜0.05);而IRF%、HFR%、MFR%及LFR%的结果从24 h开始即出现明显变化(详见表2)。该结果与国内张春平等[3]报道的“RET、IRF、LFR 在 3d的保存时间内虽有轻微的变化趋势，但与初次检测值比较均未发生明显改变”的结论并不完全一致，这可能是由于所选病例组成不同的原因。

虽然贫血与非贫血患者RET各指标发生变化出现的时间有所不同，但变化的趋势是一致的，均表现为IRF%、HFR%和MFR%呈明显增高(P＜0.05)，LFR%呈明显降低(P ＜0.05)。推测此现象产生的原因可能是由于RET离体后会在体外继续发育成熟，首先表现为较成熟的网织红细胞(LFR)先转变为成熟RBC，LFR的减少导致HFR和MFR的相对比例增加，而RET总量会逐渐减少[4]。贫血患者标本各指标出现明显变化较非贫血患者早，可能是由于贫血患者RET体外发育所需时间较正常人短所致。当然，贫血的严重程度不同时由于RET含量不同也可能对标本放置时间的反应有不同影响，还有待进一步探讨。另外，通过比较2组患者在不同时间点白细胞计数的差异，结果显示差异无统计学意义(见表3)，因此，可以排除WBC降解碎片混入RET检测区域致使核酸含量增高所带来的干扰影响。

一般来说，临床上有检测RET相关参数需求的患者多数为RBC系统生成障碍患者，即贫血患者。因此，原则上对于凡是需要进行RET检测患者的标本，应最好在24 h以内检测方能较好地反映结果的准确性。

[1]史占林，刘新记，付红芹.标本放置时间对血细胞分析仪检测结果的影响[J].职业与健康，2010，26(5):509-510.

[2]刘华森.保存标本的时间和温度对血细胞参数的影响[J].现代临床医学生物工程学杂志，2006，12(2):191-192.

[3]张春平，唐小平，钟亚玲，等.全血标本不同保存温度和时间对Sysmex XE-2100测定血细胞参数的影响[J].西部医学，2010，22(7):1312-1314.

[4]李雪光，梁月桂，王 薇，等.采血后体外放置时间对网织红细胞计数的影响[J].中华检验医学杂志，1996，19(6):32.