204株淋球菌对5种抗生素敏感性的监测

陈文锋，谢文光 (广东省阳江市妇幼保健院，广东 阳江 529500)

了解阳江地区2012年度淋球菌对抗生素的敏感率情况，分析耐药菌株的流行特征，为淋病的防治提供参考依据。笔者测定菌株对5种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)，按世界卫生组织(WHO)西太区淋球菌耐药性监测统一标准判断敏感性，现将具体情况报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株:204株淋球菌由门诊患者的泌尿生殖道分泌物中分离得到，男性标本自尿道内用专用拭子于2 cm处转动取分泌物，女性用无菌棉拭子插入宫颈口内2 cm处转动并停留约10 s取材，其中男性菌株68例，女性菌株136例。接种于选择性培养基Thayer-Martin(TM)，所有菌株经CO2培养、染色、镜检，实验室检查过氧化氢酶、糖发酵、氧化酶等确证备用。

1.1.2 抗生素:5种抗生素分别是大观霉素、青霉素、头孢曲松、四环素和环丙沙星。

1.1.3 培养基:GC巧克力培养基、选择性培养基Thayer-Martin(TM)。

1.1.4 标准菌株:6 株淋球菌标准菌株A、B、C、D、E、J，其中E株为产 β-内酰胺酶(PPNG)阳性菌株，A、B、C、D、J株为产 β-内酰胺酶阴性菌株。

1.2 方法

1.2.1 菌株对抗生素敏感性测定:使用淋球菌耐药监测规划协作组推荐的琼脂稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，判断药物敏感性和耐药性，统计MIC50和MIC90。先将各抗生素用适当的缓冲液溶解，配成溶液后倍比稀释，各抗生素在培养基平皿上的最终浓度分别为:大观霉素0.5～128 μg/ml，头孢曲松0.001 ～1 μg/ml，青霉素、四环素和环丙沙星均为 0.03 ～32 μg/ml。试验菌株、标准菌株先在GC培养基上传代2次，用17～18 h的新鲜培养物调整为107～108 cfu/ml的菌悬液，接种器蘸取菌液接种于各抗生素琼脂平皿，经35.0℃培养24 h观察结果。每批次试验均由标准菌株作质控，以能抑制淋球菌生长的最小药物浓度为该药的最小抑菌浓度(MIC)并统计出 MIC50及MIC90。

1.2.2 产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)测定:采用纸片酸度法。以标准菌株E株作为阳性对照，标准菌株B株为阴性对照。

1.2.3 质粒介导的四环素高度耐药淋球菌(TRNG)测定:用的琼脂稀释法，当四环素MIC≥16 μg/ml，判为质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG株)。

2 结果

2.1 PPNG和TRNG测定结果:204株淋球菌共检出64株产β-内酰胺酶淋球菌PPNG(31.4%)，72株质粒介导高度耐四环素淋球菌TRNG(35.3%)。

2.2 MIC测定结果:青霉素耐药株165株(80.9%)，中敏株39株(19.1%);四环素耐药株 153株(75.0%)，中敏株51株(25.0%);环丙沙星耐药株为183株(89.7%)，中敏株21株(10.3%);头孢曲松敏感株 132 株(64.7%)，中敏株 72 株(35.3%);大观霉素敏感株204株(100%).暂未发现对头孢曲松、大观霉素耐药株。详见表1。

表1 204株淋球菌对5种抗生素的敏感性、MIC50、MIC90和PPNG、TRNG菌株结果［株(%)］

3 讨论

本组资料结果表明，5种抗菌药物中，结果显示淋球菌对环丙沙星、青霉素的耐药率较高，其中环丙沙星耐药率达到89.7%，与李燕娃等的报道96.9%相近［1］，显示过去一年阳江地区淋球菌对环丙沙星的耐药情况非常令人担忧。环丙沙星是较新的喹诺酮类药物，其问世时对淋球菌等感染有很好的治疗效果，因其价格低廉且购买方便，相关部门对抗生素使用存在监管缺失，甚至因为观念上的问题导致性病患者到私营诊所医治或私自购买药品错用和滥用，使性病患者得不到规范治疗和早治疗，特别是多次、反复小剂量等错误使用，更容易导致淋球菌对环丙沙星耐药性增加。国内各地淋球菌对环丙沙星的耐药率均在90%［2］。调查结果显示，淋球菌对头孢曲松和大观霉素的敏感性分别为64.7%和100.0%，敏感性最高，没有出现耐药株，与连续监测的结果类似，充分证明，头孢曲松和大观霉素这两种药物治疗淋病能取得较为满意的效果。但本次监测中头孢曲松中敏的有72株(35.7%)，治疗时应注意加大剂量和动态观察疗效，防止头孢曲松耐药菌株的发生。并嘱患者与性伴侣到有资质的医疗机构接受正规治疗防止交叉感染发生。

数据表明阳江地区产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)流行率从2006年的15.8%增加到2010年的19.3%，到本次监测的31.4%。与2010年的19.3%相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。但明显低于柯丹等报道重庆地区的 56.99%［3］，与裴俊明等报道汕头地区的33.7%和张丽君等报道深圳地区的35.7%接近［4-5］。研究表明本地区产 β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)对青霉素的耐药率升高是由染色体介导的耐药流行株增多引起，2012年的监测数据说明本地区近年进入产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)高流行区，而且是处在快速增长期，这点应高度重视。质粒介导的四环素高度耐药株(TRNG)是美国在1985年首次鉴定的，耐药原理是由25.2Md质粒编码，该质粒可能是24.5Md结合质粒与首先发现于链球菌的tetM决定因子重组而成，通过转化或结合于敏感菌株，导致质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)的流行［1］。笔者的连续监测资料显示，本地区2009～2012年质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)的流行率从20.0%上升到35.3%，远低于李燕娃等报道佛山地区的63.4%［1］。有研究表明，淋球菌对四环素的耐药增加主要由质粒介导导致，本年度质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)检出率为35.3%，提示本地区本年度质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)流行程度越来越严重，呈进行性加剧，结合此地区具体的流行趋势，采用四环素治疗淋病有可能会造成质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)的流行。本次调查显示，大观霉素敏感率达100%，头孢曲松敏感率64.7%，说明抗菌作用仍较强，作为阳江地区淋球菌治疗的首选药物为大观霉素和头孢曲松。

［1］李燕娃，潘洪亮，吴兴中.佛山地区淋球菌流行株对抗生素敏感性测定［J］.热带医学杂志，2009，9(7):796.

［2］刘小凤，伍昆山，吴光中，等.珠海地区淋球菌对抗生素的耐药性分析［J］.皮肤性病诊疗学杂志，2011，18(3):163.

［3］柯 丹，庆 春，代祥良，等.淋球菌对抗菌药物敏感性的监测分析［J］.中国皮肤性病学杂志2008，22(9)，549.

［4］裴俊明，章淑燕，黄进波，等.广东省汕头市92株淋球菌药物敏感性检测［J］.皮肤性病诊疗学杂志，2010，17(4):268.

［5］张丽君，何 亮，王 峰，等.深圳地区淋球菌株耐药性流行趋势［J］.热带医学杂志，2010，10(5):561.