米托蒽醌长循环脂质体的制备及特性

王翠艳 李占山 张锦 王林

(河北联合大学附属医院药剂科，063000)

米托蒽醌长循环脂质体的制备及特性

王翠艳 李占山 张锦 王林

(河北联合大学附属医院药剂科，063000)

目的 通过对米托蒽醌长循环脂质体的制备，达到一种高效的抗癌治疗作用。方法 采用逆相蒸发法以DSPC DSPE-34HCSI胆固醇为原料，制备了米托蒽醌空间稳定多相脂质体。并对其粒径、分布、载药量、包封率及在小鼠体内分布进行了测定。结果 米托蒽醌长循环脂质体在体内循环时间延长，肝、肺脏分布增高。结论 对增强其抗癌效果和降低毒副作用具有一定意义。

米托蒽醌；逆相蒸发法；长循环脂质体

讯作者：李占山

米托蒽醌(mitoxantrone，DHAQ)是合成的蒽环类抗癌药，临床及基础研究证明，米托蒽醌对白血病、乳腺癌、何杰金氏病和原发性肝癌有较好的疗效。但仍有较为严重的骨髓抑制、胃肠道反应和心脏毒性。目前临床使用为米托蒽醌的粉针剂型。本文通过国内外研究较多的长循环脂质体技术，采用逆相蒸发法制备了米托蒽醌长循环脂质体，目的是为了研究更好的新剂型，进一步提高米托蒽醌的抗癌效果和降低全身毒副作用。

1 仪器与试药

S-450型电子扫描显微镜；日本岛津UV-3000型分光光度计；NICOMP-370型particle sizing system；JP-3305 Sintilation Counter，81-2型恒温磁力搅拌器；L8-80M超速低温离心机；SHZ-88-1型台式水浴恒温振荡器。昆明种小鼠，雌雄各半，由河北医科大学实验动物中心提供。米托蒽醌质量符合部颁标准，水为重蒸馏水，试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 米托蒽醌长循环脂质体的制备 采用逆相蒸发法制备[1]，用3只小试管分别精密称取6.6mgDSPC，3.3mgCH和2.0mgDSPE34-HCSI加入振荡器中，再加入CHCL600μL和600μLdisopropylether进行超声振荡使药物充分溶解，然后加入Tris缓冲液(pH8.0)600μL进行超声乳化15min，60℃水浴中氮气流挥干有机溶媒，获得乳白色混悬液，再加入缓冲液200μL，用NICOMP-370型particle sizing system经过2张重叠的200 nm polycarbonate filters压滤10次，即得。

2.2 米托蒽醌长循环脂质体的粒径及分布 采用Volume-weighted Gaussian Distribution Analysis测定米托蒽醌长循环脂质体的粒径及其分布[2-3]，结果表明最大粒径为199nm，最小粒径为83nm，平均粒径为167.8nm(CV＝0.320)。

2.3 米托蒽醌长循环脂质体的载药性能 根据文献[4]可知，米托蒽醌在610 nm处有较强的吸收峰，而其他辅料在此波长并无吸收峰存在，所以采用分光光度法测定包封率和载药量[5]。从而得到标准曲线方程为：A＝0.0073＋0.4246C(C＝mg/100mL)r＝0.999 7。用空白长循环脂质体加入米托蒽醌，再加入乙酸乙酯进行溶解，溶解后分别测定高、中、低3个浓度的回收率，算出平均值为99.32%。样品测定，精密称取米托蒽醌长循环脂质体，加入定量生理盐水溶解后，超速低温离心，分离出上清液，再同样洗涤两次后，合并两次的上清液，在λ＝610 nm处进行其吸收度的测定，根据测定结果计算出包封率，结果(表1)。

2.4 米托蒽醌长循环脂质体在荷瘤小白鼠体内的分布取colon26肿瘤细胞3次转代培养液(4×105)注入小白鼠背部的皮下组织，等待肿瘤长到直径约0.5cm左右时，即可用作组织器官分布及肿瘤靶向性的测定。采用液体闪烁记数技术测定米托蒽醌长循环脂质体在动物体内的含量[6]及组织器官分布[7]。即取3H-inulin33μL，加入到600μL磷酸盐缓冲溶液中，米托蒽醌长循环脂质体的制备过程同前。取colon26荷瘤小白鼠12只，于试验前12h内禁食，每6只分成一组，共分二组，通过颈静脉注射包封3H-inulin的米托蒽醌长循环脂质体100μL，分别在2h和6h经心脏穿刺抽血100μL(肝素抗凝)，然后断颈处死这些动物，剖取它们的组织器官，精取定量，加入Soluble组织溶解液1mL，进行研碎、超声溶解乳化后，再加入30%过氧化氢300μL进行脱色。加入Atomlight闪烁测定液10mL，充分振荡、摇匀。于JP-3305 Sintilation Counter自动计数，然后计算单位重量DPM百分率。结果(图1)。

表1 米托蒽醌长循环脂质体的包封率

图1 米托蒽醌长循环脂质体在动物体内的分布(±s，n＝6)

3 讨论

研究证明，表面含有聚乙二醇类脂衍生物(如PEG-DSPE)的第二代脂质体能够显著延长它在体循环中的驻留时间，并且能够增加在靶部位的吸收，称为长循环脂质体(long circulating liposome)。此外，它与特异性抗体结合后能在体内特异性地与靶部位相结合而发挥更好的治疗作用，从而实现体内抗体介导靶向，即所谓的主动靶向[8]。本实验采用逆相蒸发法，用DSPC、PEG-DSPE、CH制成米托蒽醌长循环脂质体，结果表明米托蒽醌长循环脂质体具有良好的包封率，在动物体内循环时间长，肝脏、肺脏分布率增高等优点，为进一步研究米托蒽醌长循环脂质体的抗癌效果奠定基础。

[1]Schder A，Huwyler J.Drug transport to brain with targeted liposomes[J].Neuro Rx，2005，2(1)：99-107.

[2]Kim NH，Park HM，Chung SY，et al.Immunoliposomes carrying plasmid DNA：preparation and characterization[J].Arch Pharm，Res，2004，27(12)：1263.

[3]Zhang Y，Calon F，Zhu C，et al.Intravenous nonviral gene therapy causes normalization ofstriataltyrosine hydroxylase and reversal of motor impairment in experimental parkinsonism[J].Hum Gene Ther，2003，14(1)：1-12.

[4]张志荣，廖工铁.米托蒽醌聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的研究[J].药学学报，1994，29(7)：544.

[5]Tsutomu Y，Kazuo M，Motoharu I，et al.Prolongation of Liposome Circulation Time by Various Drivatives of Polyethyleneglycols[J].Biol Pharm Bull，1996，19(10)：1347.

[6]Check E.Gene-therapy trials to restart following cancer risk review[J].Nature，2005，434(7030)：127.

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[8]Naoto Ok，Yoshihiro T，Chieko K，et al.Liposomal Arg-Gly-Asp analogs effectively inhibit metastic B16 melanoma colonization in murine lungs[J].Life sciences，1996，58(24)：2263.

1005-619X(2013)04-0363-02

2013-03-23)