末稍血静置时间对血小板检测结果的影响

孙家祥 李艳

末稍血静置时间对血小板检测结果的影响

孙家祥 李艳

目的 探讨末稍血采集后静置时间对血小板检测结果的影响。 方法 随机选取60例健康体检者采集末稍血加入EDTA-K2抗凝管混匀后分别在0 min、5 min、10 min、15 min、30 min上机进行血细胞分析, 观察血小板变化。同时取末稍用草酸胺血小板稀释液行显微镜人工计数, 并以此作为血小板计数的参考。结果 ①60例中有41例各时间段血小板结果差异无统计学意义(P＞0.05)；有18例0 min与5 min血小板计数结果明显减少(P＜0.01), 10 min以后才趋稳定；有1例在15 min以后才趋稳定。②与手工计数结果比较, 0 min与5 min血小板计数结果明显降低, 差异非常显著(P＜0.01)；10 min以后血小板计数结果趋于稳定, 10 min、15 min、30 min计数结果差异无统计学意义(P＞0.05), 分别与手工计数结果比较差异也无统计学意义(P＞0.05)。结论 末稍血采取后至少应放置10 min方能进行血小板计数, 放置15 min以后则更稳定。

末稍血；静置时间；血小板计数；准确性

血细胞分析是目前临床应用最重要的常规检测项目之一, 国内实验室普遍使用EDTA-K2抗凝静脉血分析。但对于部分静脉抽取有困难的特殊病人有时仍会采集末稍血进行检测, 在门急诊检验中更为普遍。实际工作中, 末稍血采取后在不同时间检测血小板结果有时会有差异, 甚至会造成严重误差, 因此检测时间的规范尤为重要。但目前国内文献道不一, 也暂无相关标准出台。作者随机选择了60例健康体检者采集末稍血后在不同时间进行血细胞分析, 以观察血小板结果变化, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取来本院健康体检需行血细胞分析的60例个体采集末稍血, 均排出心、脑、肝、肾、肺等脏器的器质性及免疫性疾病。其中男35例,女25例, 年龄16~62岁,平均(32.5±13.3)岁。

1.2 仪器与材料 Sysmex-800i血细胞分析仪及配套试剂；Olympus双目显微镜；EDTA-K2抗凝管；牛鲍氏血小板计数池；微型混匀振荡器；草酸胺血小板稀释液［1］；瑞一姬染色液。

1.3 检测与分析 由临床经验丰富的高年资检验技师用BD一次性无痛采血针采集无名指末稍血约350 μl加入EDTA-K2抗凝管, 立即用微型混匀振荡器混均。采集过程中尽可能避免过度挤压造成组织液的混入。血液混匀后在0 min(即刻)、5 min、10 min、15 min、30 min上机进行血细胞检测分析。同时取血20 μl加入0.38 ml草酸胺血小板稀释液,按操作规程行显微镜人工计数, 并以此作为血小板计数的参考。

各时间段分别涂血片一张经瑞-姬染色观察血小板分布情况。

1.4 统计学方法 所有数据取两次平行计数均值。采用SPSS 11.0软件包进行数据统计。数据以均数±标准差( x-±s)表示, 组间比较采用配对t检验进行数据分析, 以α=0.05为检验水准, P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同时间血小板检测结果 与手工计数结果比较, 0 min与5 min血小板计数结果明显减少, 差异有统计学意义(P＜0.01)；10 min以后血小板计数结果趋于稳定, 10 min、15 min、30 min计数结果差异无统计学意义(P＞0.05), 分别与手工计数结果比较差异无统计学意义(P＞0.05), 见表1。

表1 60例末稍血静置不同时间及人工计数血小板检测结果( x-±s, ×109/L)

2.2 不同时间血小板检测结果差异所占比例 60例个体中, 有41例各时间段血小板结果差异无统计学意义(P＞0.05),占68.3%；有18例0 min与5 min血小板计数结果明显降低(P＜0.01), 10 min以后才趋稳定, 占30%；有1例在15 min以后才趋稳定占1.7%。

2.3 血涂片血小板分布情况 经瑞-姬染色观察,凡血小板计数结果偏低者,血涂片均显示有血小板聚集或卫星现象；结果越低,聚集越明显, 10 min以后这种聚集或卫星现象基本消失。

3 讨论

发挥止血与凝血重要功能的血小板及其相关参数越来越受到广泛关注,目前已有报道血小板参数与多种疾病相关,因此血小板在机体的作用已大大超出了传统概念。但血小板参数的分析首先是建立在血小板计数的准确性之上, 保证计数的准确是其他参数的关键。一直以来, 检验工作者基本达成共识, 末稍血采取以后必须放置一段时间才能进行血小板计数, 但放置多长时间文献报道不一。有认为放置5 min者,有认为放置15~30 min者, 还有认为测定最佳时间为采血后30~60 min［2-5］。而作者的研究结果表明, 并不是每个患者在采血后立即检测都会造成血小板降低, 这种发生率为30%左右, 有98.3%的人在采血后10 min测定血小板即可获得准确结果, 这与孙良宏的报道基本一致［6］, 15 min后检测则更为稳定。在门急诊工作中, 由于一般末稍血采取后, 均能在30 min内出具报告, 所以作者只研究了30 min内血小板变化情况。实际上, 血液采集后, 标本也不能放置太长, 否则会造成血小板变形自溶或产生构型改变, 导致仪器不正常识别,再次造成血小板计数假性降低。

在采血后立即检测会造成血小板假性降低,多数学者认为血小板膜内附着许多微丝, 其主要成分为肌动蛋白和肌凝蛋白, 与微管环周束共同支持伪足的形成。当采集末梢全血时, 标本中或多或少混入少量组织液, 加之EDTA抗凝剂的存在, 促使血小板的形态立即发生变化, 这时血小板外膜形成的微小管游离端向外伸展与膜内的微丝共同作用,在血小板周围形成丝状伪足, 数个这样的血小板伪足相互缠绕形成血小板假性聚集体, 在应用血液分析仪进行检测时, 仪器误认为是小红细胞或小白细胞而不纳入血小板计数范围, 造成血小板计数假性降低。随着时间延长, EDTA能使血小板由盘状变为球状, 血小板伪足回缩到胞质内, 相互缠绕的血小板解散, 再次回到自然姿态［7］, 从而血小板计数恢复正常。

因此,在门急诊检验进行血细胞分析时,我们不能盲目求快,仅强调检验报告的及时性,而忽略报告本身带来的误差。建议末稍血采集后至少应放置10 min才能进行血小板计数, 这样方能获得准确结果, 放置15 min以后检测则更稳定。

［1］ 叶应妩, 王毓三, 申子瑜．全国临床检验操作规程．第3版．南京：东南大学出版社, 2006:136．

［2］ 马雨东.血细胞分析仪测定血小板时抗凝剂等影响因素分析.检验医学与临床, 2010,7(11):1078-1080.

［3］ 申蕙芸, 崔静.血液分析仪计数血小板假性异常的影响因素分析.实用医技杂志, 2008,15(28):3863-3864.

［4］ 邓宗奎.血液分析仪血小板计数的影响因素与全程质量控制.检验医学与临床, 2009,6(19):1688.

［5］ 程晖,刘更夫,袁桂荣.血小板计数偏低误差实验探讨及对策.现代检验医学杂志, 2006,21(5):91-92.

［6］ 孙良宏.末梢全血待测时间对白细胞及血小板计数的影响.中国现代药物应用, 2010,4(3):59-60.

［7］ 汪玄文.血液分析仪血小板计数影响因素的探讨.工企医刊, 2010, 23(1):75-76.

Influence of standing time of peripheral blood to the results of platelets count

SUN Jia-xiang, LI Yan.
Department of clinical laboratory,The People's Hospital of Deyang City, Deyang 618000, China

Objective To explore the influence of standing time of peripheral blood after taking to the results of platelets count .Methods Randomly selected 60 cases of healthy check-up people and taken the peripheral blood to anticoagulant EDTA-K2 tube,which was detected at 0 minute, 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes and 30 minutes after blending by automatic hematology analyzer.Observed changes in platelets .At the same time, the peripheral blood platelets diluented with oxalic acid amine diluent were counted through microscope by artificial,which platelets count as reference.Results ①of the 60 cases, 41 cases each time period showed no significant difference in platelets count (P＞ 0.05); 18 cases at 0 minute and 5 minute platelets significantly reduced (P<0.01), 10 minutes later it stabilized; there was one case platelets stabilized only after 15 minutes.②Comparison of results with the manual counting, platelets significantly reduced at 0 minutes and 5 minutes, the difference was significant (P<0.01); 10 minutes later the platelets count result tended to be stable, 10 minutes, 15 minutes, 30 minutes count results were not significantly different (P＞0.05), respectively, compared with manual counting results had no statistical significance (P>0.05).Conclusions Peripheral blood after taking should be placed at least 10 minutes for platelets count, after 15 minutes platelets are more stable.

Peripheral blood; Standing time; Platelets count; Accuracy

618000 四川德阳市人民医院检验科