Plk1、Ki67和Survivin在肝癌中的表达及相关性研究

刘起胜 刘怀 彭微

·实验研究·

Plk1、Ki67和Survivin在肝癌中的表达及相关性研究

刘起胜 刘怀 彭微

目的 探讨Plk1、Ki67和Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其临床意义。 方法 采用免疫组织化学SP法检测60例肝癌组织和20例正常肝组织、肝硬化组织、癌旁组织中Plk1、Ki67和Survivin的表达水平。 结果 60例肝癌组织中Plk1、Ki67和Survivin的阳性表达率分别为83.3% (50/60)、76.7%(46/60)、78.3%(47/60), 20例正常肝组织、癌旁组织、肝硬化组织中均未见表达。Plk1、Ki67、Survivin 在 HCC 中的表达均与包膜侵犯、癌栓形成及肿瘤转移有关(P＜0.05), 而与年龄、性别无关。Plk1与Ki67、Survivin与Ki67、Plk1与Survivin的表达相关(P＜0.05)。 结论 plk1、Ki67、Survivin三者联合检测可为肝癌的诊断和治疗提供新的依据。

肝细胞癌； plk1；Ki67；Survivin；免疫组织化学

肝细胞癌组织中Plk1、Ki-67和Survivin的表达及相关性的研究, Polo-Like 激酶 1( Plk1) 是一种参与调控有丝分裂并与细胞增殖密切相关的重要因子。Plk1 在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。细胞核增殖抗原( Ki67) 、凋亡抑制蛋白( Survivin) 的异常表达也与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关, 本研究采用免疫组织化学SP法检测Plk1与Ki67、Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)和正常肝组织、癌旁组织、肝硬化组织中的表达,探讨Plk1与Ki67、Survivin的表达与病理参数之间的关系及三者表达之间的相关性, 并为肝癌的靶向治疗、预后判断提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：收集湖南中医药高等专科学校附属医院2001年1月至今手术切除经病理证实的肝癌组织60例, 其中男37例, 女23例, 年龄23~70岁, 平均(46.43±11.78)岁,所有患者术前均未行化疗、放疗或免疫治疗。全部病例均有完整的临床病理资料。

1.2 试剂与方法

常规S-P免疫组化试剂盒、二硝基联苯胺(DAB)显色液及鼠抗人Plk1、Ki67和 Survivin抗原等。每例均行 SP法染色, 取已知阳性肝癌标本作阳性对照, 以0.01 mol/L PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断

Plk1染色以在细胞质着棕色颗粒为阳性。本实验采用传统的人工计数方法。免疫组织化学结果根据染色细胞阳性数和染色强度乘积评分。阳性细胞数：连续5个高倍视野, 细胞阴性为0.l%~25%为1, 26%~50%为2, 50%~75%为3,≥75%为4；染色强度：无色为0, 淡黄为l, 棕黄为2, 棕褐色为3。细胞阳性数和染色强度两者乘积≥3为(+), 两者乘积≥6为(++)。所有乘积≥3的结果视为阳性。

Survivin 和 Ki67 以细胞浆和细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。参照 Parenti 等［1］的标准, 每张切片均随机观察5 个具有代表性的高倍视野, 着色细胞占计数细胞百分率<5 %为(-),5 % ~25 %为(+), 25 % ~50 %为(++), >50 %为(+++)。

1.4 统计学方法

采用SPSSl5.0 统计软件包进行分析, 采用χ2检验、spearman等级相关分析, (P＜0.05)为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Plk1、Ki67和Survivin的表达特点及其与HCC临床病理参数的关系见表1。

2.2 Plk1、Ki67和Survivin表达的相关性 相关分析显示：

HCC 组织中 Ki67 与 Survivin 表达呈正相关( r =0.566, P <0.05)；HCC组织中Ki67与Plk1表达呈正相关(r=0.570, P＜0.05)；HCC组织中, Plk1与Survivin表达呈正相关(r=0.631, P＜0.05)。

3 讨论

Plk1是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶。Plk1在细胞有丝分裂的不同时期都起到十分重要的作用。 在分裂活跃的组织器官或肿瘤细胞中Plk1 活性较高［2,3］。研究结果显示, 肿瘤组Plk1阳性率明显高于正常肝组织组、癌旁组织组和肝硬化组织组, Plk1的阳性表达与癌栓形成、包膜侵犯、肿瘤转移等不良预后因素呈明显相关。这三个病理参数代表肝癌侵袭和转移程度和时效, 研究结果说明Plk1阳性表达可能与肝癌的侵袭和转移相关, 所以Plk1与肿瘤的密切关系可能有助于Plk1成为新的肿瘤生物学行为判断指标。 兰斌等［4］认为Plk1 的表达状态与患者的预后有关, 高表达者预后差。这也许能为我们提供一个判断患者预后的新的分子标志物。

Ki67是反映细胞增殖的核抗原, 是目前已知的增殖抗原中最具增殖能力代表性、应用最广泛的增殖细胞标记之一。Ki67的检测已被广泛用于反映肿瘤细胞增殖速度和预测肿瘤预后［5-6］。本研究发现Ki67不仅在HCC组织中高表达, 而且其阳性表达与包膜侵犯、癌栓形成及肿瘤转移均呈正相关(P＜0.05)。提示Ki67是肝癌诊断与判定预后的一项重要指标。

Survivin 蛋白是迄今发现最强的凋亡抑制因子, Survivin蛋白的表达与多种肿瘤的生物学( 或) 疾病分期有关［7］, 本研究中肿瘤组 Survivin 阳性率为78.33%, 明显高于正常肝组织、癌旁组织和肝硬化组织组, 本研究显示, Survivin 在HCC中的表达与癌栓形成及肿瘤转移、包膜侵犯相关。提示survivin可能参与 HCC 的发生、发展, 可使肝癌生物学行为恶变, 从而影响肝癌患者的预后。

表1 Ki67、Plk1、Survivin表达水平与HCC病理参数的关系

本实验肝癌Plk1、Ki67和Survivin的阳性表达较高,三者均与包膜侵犯、癌栓形成及肿瘤转移有关, 而且 Plk1、Ki67和Survivin三者之间存在相关性, 因此作者认为Plk1、Ki67和Survivin三者作为均与细胞增殖相关的蛋白, 在肝癌细胞增殖过程中均发挥了重要作用, 在肝癌的治疗中有望采取从Plk1、Ki67和Survivin 三个治疗靶点联合治疗的方法。

［1］ Parenti A, Leo G, Porzionato A, et al. Expression of survivin, p53, and caspase3 in Barrett's esophagus carcinogenesis. Hum Pathol,2009,175(6):2625-2636.

［2］ Strebhardt K,Ullrich A.Targeting Polo-like kinase1 for cancer therapy.Nat Rev Cancer,2006,6(4):321-330.

［3］ Kishi K,van Vugt MA,Okamoto K, et al.Functional dynamica of Polo-like kinase1 at the centrosome. Mol Cell Biol,2009,29(11): 3134-3150.

［4］ 兰斌, 刘炳亚, 陈雪华, 等.保罗样激酶1 表达对胃癌的生物学行为及预后判定的意义.中华胃肠外科杂志, 2007,10(1): 70-72.

［5］ 张景丽,张红英,步 宏,等. 乳腺癌Ki267及PCNA表达的比较研究. 临床与实验病理学杂志, 2003, 19(1):70- 72.

［6］ Potemski P, Pluciennik E, BednarekAK, et al. Ki-67 expression in operable breast cancer: a comparative study of immunostaining and a real-time RT-PCR assay. Pathol Res Pract, 2006, 202(7):491-495.

［7］ Li F. Role of Survivin and its splice variants in tumorigenesis.Br J Cancer, 2005, 92( 2) : 212-216.

湖南省教育厅科学研究项目(项目编号：11C0974)

412012 湖南中医药高等专科学校基础医学部病理组