RP-HPLC法同时测定复方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量

张咏梅（张家港市中医医院，江苏张家港 215600）

复方曲安奈德乳膏为我院自制制剂，由醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明、硝酸咪康唑等制成。本品具有抗真菌感染作用，主要用于湿疹、神经性皮炎、股癣、体癣等。由于原制剂的质量标准无“含量测定”项，为了提高该制剂的质量标准，保障用药安全有效，本文选择其中的醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑为指标，建立了反相高效液相色谱（RP-HPLC）法同时测定制剂中3种组分含量的方法。结果表明，建立的方法方便、快速、准确，可用于测定复方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量。

1 材料

e2695HPLC仪、2998二极管阵列检测器、Empower2色谱工作站（美国Waters公司）；Aux220电子分析天平（日本岛津公司）；S20K台式pH计[瑞士梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；SHB-ⅢA循环水式多用真空泵（上海豫康科教仪器设备有限公司）；HH-S21-4电热恒温水浴锅（上海恒昌仪器厂）。

醋酸曲安奈德对照品（批号：100125-201105，供含量测定用）、盐酸苯海拉明对照品（批号：100066-200807，供含量测定用）、硝酸咪康唑对照品（批号：100213-200705，供含量测定用）均来自中国食品药品检定研究院；复方曲安奈德乳膏（本院自制，批号：110330、110811、120206，规格：每盒20g；其中醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量分别为2.5、10、20mg/g）；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与色谱图

色谱柱：SunFire C18（250mm×4.6mm；5μm）；流动相：甲醇-水（每1000ml水加入三乙胺7ml，磷酸调pH为7.2）（70∶30，V/V），流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：10μl。

取“2.2”～“2.4”项下对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，进样分析，色谱见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取醋酸曲安奈德对照品4.2mg，置于25ml量瓶内，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.168mg/ml的醋酸曲安奈德对照品溶液。精密称取盐酸苯海拉明对照品24.7mg，置于25ml量瓶内，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.988mg/ml的盐酸苯海拉明对照品溶液。精密称取硝酸咪康唑对照品24.9mg，置于25ml量瓶内，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.996mg/ml的硝酸咪康唑对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

图1 高效液相色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液；1.醋酸曲安奈德；2.盐酸苯海拉明；3.硝酸咪康唑Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；C.negative control solution；1.triamcinolone acetonide；2.diphenhydramine hydrochloride；3.miconazole nitrate

取复方曲安奈德乳膏约1g，精密称定，置于锥形瓶内，加甲醇30ml，于80℃水浴中溶解，全量转移至50ml量瓶内，放冷，用甲醇定容至刻度，置于冰浴中冷却2h；过滤，取续滤液5ml置于10ml量瓶内，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，以续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备及专属性试验

按本品处方与制备工艺，制备不含醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的阴性对照品，按“2.3”项下方法制备，得阴性对照溶液。

进样测定，结果见图1C，可见阴性对照溶液在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰，表明其他成分和基质对目标成分测定无干扰，该方法专属性好。

2.5 线性关系考察

精密吸取等量（0.5、1、1.5、2、2.5、3ml）0.168mg/ml的醋酸曲安奈德对照品溶液、0.988mg/ml的盐酸苯海拉明对照品溶液和0.996mg/ml的硝酸咪康唑对照品溶液，置于10ml量瓶，加甲醇定容至刻度，得到分别含醋酸曲安奈德0.0084、0.0168、0.0252、0.0336、0.0420、0.0504mg/ml，盐酸苯海拉明0.0494、0.0988、0.1482、0.1976、0.2470、0.2964mg/ml和硝酸咪康唑0.0498、0.0996、0.1494、0.1992、0.2490、0.2988mg/ml的系列混合对照品溶液。分别精密吸取10μl进样，测定，以峰面积积分值（y）为纵坐标、进样质量浓度（x）为横坐标绘制标准曲线，得醋酸曲安奈德回归方程为y＝1232714.115x－9141.366（r＝0.9997），盐酸苯海拉明回归方程为y＝541882.012x+38862（r＝0.9997），硝酸咪康唑回归方程为y＝95876x+53086（r＝0.9998）。结果表明，醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑检测质量浓度线性范围分别为0.0084～0.0504、0.0494～0.2964、0.0498～0.2988mg/ml。

2.6 精密度试验

将3种对照品溶液混合后取10μl进样，连续进样6次，测定。结果，醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑的RSD分别为1.9%、1.5%、1.0%，表明方法精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批号（批号：110330）样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑含量的RSD分别为1.7%、1.3%、0.6%，表明方法重复性好。

2.8 稳定性试验

取同一批号（110330）供试品溶液，分别于配制后的0、2、4、8、12、24h，精密吸取10μl进样测定。结果，醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑含量的RSD分别为1.7%、1.9%、1.0%，表明供试品溶液中3种组分在24h内是稳定的。

2.9 加样回收率试验

采用加样回收试验方法，取批号为110330（醋酸曲安奈德2.60mg/g，盐酸苯海拉明10.19mg/g，硝酸咪康唑19.47mg/g）的样品0.5g，精密称定，分别按样品浓度的80%、100%、120%加入对照品，各平行3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.10 样品含量测定

按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定3批样品（批号分别为110330、110811、120206）的含量。结果3批样品中醋酸曲安奈德的含量分别为2.49、2.55、2.41mg/g，平均值为2.48mg/g；盐酸苯海拉明的含量分别为9.97、10.00、9.86mg/g，平均值为9.94mg/g；硝酸咪康唑的含量分别为18.72、19.76、19.77mg/g，平均值为19.42mg/g。醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明和硝酸咪康唑占标示量百分比平均值分别为99.2%、99.4%、97.1%。

3 讨论

（1）根据文献，有水-甲醇-四氢呋喃（60∶28∶12）[1]、甲醇-水（75∶25）[2]、甲醇-乙腈-0.15%醋酸铵（45∶35∶20）[3]、甲醇-水相（三乙胺2ml，加水至 300ml，磷酸调 pH至 7.6）（70∶30）[4]、0.5%三乙胺（用醋酸调pH至3）-甲醇（50∶50）[5]等不同组成、不同比例的流动相可用于检测曲安奈德。笔者通过比较不同流动相的分离结果，最终确定了甲醇-水（每1000ml加入三乙胺7ml，磷酸调pH为7.2）（70∶30）为流动相。结果显示，在此流动相下，阴性对照溶液对目标成分未见干扰，加样回收率符合要求；流动相中加入三乙胺以及用磷酸调节pH可以显著改善色谱图的峰形。

（2）通过全波长扫描，发现醋酸曲安奈德在240nm波长处吸光度值最大，但是盐酸苯海拉明、硝酸咪康唑在此波长下吸光度值较小；而当选择230nm波长时，三者均有较好的吸收，故选择230nm为检测波长。

（3）本试验结果表明所建立的方法方便、快速、准确。由于复方曲安奈德乳膏原有的制剂质量标准中无“含量测定”项，本试验方法的建立可提高本品的质量标准，保障临床用药安全、有效。

[1] 黄兴汉，费路华，陆春游.HPLC法测定复方醋酸曲安奈德乳膏的含量[J].中国药师，2011，14（1）：89.

[2] 陆兴义.HPLC法测定醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德的含量[J].药物分析杂志，2007，27（10）：1652.

[3] 陈文，田勇，周伟.HPLC法测定复方硝酸咪康唑乳膏中3组分的含量[J].中国药房，2009，20（4）：292.

[4] 费路华，聂小春.高效液相色谱法测定复方健疗霜中三组分含量[J].药物分析杂志，1999，19（3）：165.

[5] 刘百义.派瑞松乳膏中曲安奈德和硝酸益康唑的含量测定[J].中国药业，2009，18（7）：26.