五味子和芍药提取物对哮喘模型大鼠血清细胞因子水平的影响＊

陈 霞，唐 军，冯 静

（解放军三二四医院儿科，重庆 400020）

五味子和芍药是小青龙汤中主药之一，方中五味子和芍药配伍的独特性，加强了止咳平喘的效果。为探讨五味子和芍药治疗哮喘的机理，本文采用五味子和芍药提取物治疗哮喘模型大鼠，通过测定了大鼠血清细胞因子水平的变化，初步了解两味中药对哮喘模型大鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 哮喘模型大鼠的制备及实验步骤 取4周龄的SD大鼠30只，体质量40～50g。SD大鼠购自第三军医大学大坪医院动物实验所。随机分成中药治疗组（A组）及哮喘发作组（B组）、生理盐水对照组（C组），各组大鼠10只。A组和B组均给予氢氧化鋁200mg、卵蛋白1mg、生理盐水0.2mL皮下注射，每2天1次，连续3次，另间隔给予百日咳杆菌疫苗0.2 mL皮下注射，每2天1次 连续3次。致敏后给予2%卵蛋白雾化吸入激发1周，每日1次。C组用等量的生理盐水代替抗原液皮下注射。观察A组和B组大鼠出现打喷嚏、抓耳挠腮、呼吸急促，腹肌收缩，烦躁攻击，脱毛、毛发稀疏等表现。A组给予中药提取物每日2mL灌胃治疗10d。3组大鼠分别在治疗前和治疗后10d取血2mL离心静置待检。3组均在治疗后10d取气管组织行HE染色观察。

1.2 方法

1.2.1 仪器和设备 压缩雾化器：德国百瑞公司，自制雾化箱50cm×53cm×58cm，自动多功能酶标仪：科华公司 KHB ST－360，PT210型电子天平：德国 Sartorius公司，TGL－16G 高速台式离心机：中国上海安惠科学仪器厂，全自动酶标洗板机：沈阳惠氏生物工程有限公司；白介素（IL）4，IL－6、γ干扰素（IFN－γ）、IL－13、酶联免疫吸附法（ELISA，Biovalue公司）。

1.2.2 芍药和五味子提取物制备 两种药物以1∶1比例采用乙醇回流提取法，提取的中药原液置于密闭容器中密闭保存。

1.2.3 IL－4、IL－6、IFN－γ、IL－13测定 采用 ELISA 试剂盒进行。按照每孔100μL依次加入标准品和待测品，37℃孵育60 min后扣干孔内液体，依次加入底物和终止液，并在30min内使用酶标仪在450nm下读取吸光度值。

1.3 统计学处理 采用的SPSS13.0统计学软件分析，计量资料用表示。计数资料采用率表示。组间差异的显著性采用方差分析，检验水准α＝0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组大鼠气管病理形态学观察 A组大鼠气管平滑较完整，柱状上皮及刷状缘基本完整，少量淋巴细胞浸润。B组大鼠气管平滑肌层有断裂，淋巴细胞和中性粒细胞有争夺，呈重度炎症反应。C组大鼠气管组织无淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润，无纤毛受损表现。见图1。

2.2 3组大鼠外观观察 A组和B组大鼠激发后相继出现打喷嚏、抓耳挠腮、呼吸急促，腹肌收缩，烦躁攻击，脱毛、毛发稀疏等症状，而C组大鼠无明显改变。给予中药提取物灌胃治疗后，A组大鼠打喷嚏、烦躁攻击减轻，毛发恢复光润。

2.3 3组细胞因子水平的变化 IL－4，IL－6、IL－13在 A、B组较C组有明显升高（P＜0.05），而A、B组治疗前和治疗后无显著变化（P＞0.05）。IFN－γ在C组治疗前和治疗后均高于B组（P＜0.05）；A组治疗后与治疗前比较有显著升高（P＜0.05）。见表1。

图1 各组大鼠气管病理形态学（×40）

表1 3组细胞因子水平比较（pg／mL，，n＝10）

表1 3组细胞因子水平比较（pg／mL，，n＝10）

IL－4IL－6IL－13IFN－γ组别±35.22982.27±31.51 B组 144.19±19.31138.76±20.66452.11±47.64433.88±38.55259.65±31.22267.43±25.77498.67±33.87511.69±25.74 C组 82.39±15.7785.96±16.48213.55±22.56205.68±31.74152.66±18.46168.95±27.69752.63±1治疗前 治疗后A组 147.38±23.05182.94±21.19474.49±52.31402.67±36.33274.58±20.04268.31±25.33503.29治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后5.64765.95±20.11

3 讨 论

细胞因子对哮喘气道炎症反应和气道重塑的影响，近年越来越受到国内外学者的关注。早在1986年 Mosmann等［1］首次提出在气道炎症时，Th2类细胞产生的细胞因子（如IL－4，IL－13，IL－5）的水平是升高的，而 Th1类细胞产生的细胞因子（如IFN－γ）会降低，导致Th1／Th2在体内失衡。因此增强Th2细胞的免疫反应和相应细胞因子的水平都可导致哮喘和过敏反应的发生［2－3］，而且IL－4还能使IgE的产生增加。研究表明IL－4和IL－13是很关键的Th2细胞因子，都能作用气道引起气道高反应性［4］。另外树突状细胞分泌的IL－6在促进Th2限制Th1反应中起着重要作用，也诱发了哮喘的发作［5－6］。因此 Th2主导的免疫反应与Th1抑制有关［7］，即Th1／Th2比例失调是哮喘的主要病理特征和主要发病机制［8］。通过调节Th1／Th2细胞因子比例失衡已成为哮喘免疫治疗的主要靶点［9］。我国的传统中药在调节Th1／Th2细胞因子比例失衡方面的效果已引起国内外学者的关注，但是组方不同调节的细胞因子水平也不尽相同［10］。

小青龙汤是中医的十大名方之一，出自张仲景的《伤寒论》，在温化痰饮、宣肺平喘方面有奇效，而芍药和五味子的应用一直被认为是此方的经典之处。过去常认为汤中用芍药、五味子，其中芍药酸敛以护肝阴，五味子酸敛以护肾阴，敛肺止咳，起增强止咳平喘之功和制约诸药辛散温燥太过之弊。本研究通过五味子和芍药两种药物以1∶1配方研究对哮喘模型大鼠的治疗作用及血液细胞因子的变化，可以看出两种药物配方治疗10d后，哮喘模型大鼠气管平滑肌逐步修复，气管炎症细胞的浸润减少，打喷嚏、呼吸急促，烦躁攻击，毛发稀疏等症状明显减轻。血清细胞因子水平检测结果提示哮喘模型形成后，血清IL－4，IL－6、IL－13水平升高，而IFN－γ水平下降；治疗组血清IL－4，IL－6、IL－13水平治疗前和治疗后无明显变化，而IFN－γ水平治疗后10d明显高于治疗前（P＜0.05）。提示两种药物主要通过调节IFN－γ水平达到改变Th1／Th2比例失调作用，而对Th2细胞因子影响不明显。这与国内有些报道其他中药如黄芪、麻杏石甘汤对Th1／Th2两类细胞因子均有调节不一致［11－13］。至于五味子和芍药为什么以调节IFN－γ水平为主，还需要更多的实验研究进一步证实，也对我国的传统名方提供更多的科学诠释。

综上所述，五味子和芍药治疗哮喘模型大鼠疗效确切，血清细胞因子中以IFN－γ升高为主，机制尚不清楚还需要实验进一步明确。

［1］Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cell clone.I.Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins［J］.J Immunol，1986，136（7）：2348－2357.

［2］尹静，黄永富.炎性细胞因子在支气管哮喘发病机制中的作用［J］.国际检验医学杂志，2011，32（10）：1087－1089.

［3］Guo CH，Chen PC，Hsia S，et al.The relationship of plasma aluminum to oxidant－antioxidant and inflammation status in asthma patients.Envitron Toxicol Pharmacol［J］，2013，35（1），30－38.

［4］Woodruff PG，Modrek B，Choy DF，et al.T－helper type 2－driven inflammation defines major subphenotypes of asthma［J］.Am J Respir Crit Care Med，2009，180（5）：388－395.

［5］Richter C，Thieme S，Bandola J，et al.Generation of inducible immortalized dendritic cells with proper immune function in vitro and in vivo［J］.PLOS One，2013，8（4）：e62621.

［6］Rincon M，Irvin CG.Role of IL－6in asthma and other inflammatory pulmonary diseases［J］.Int J Biol Sci，2012，8（9）：1281－1290.

［7］Ngoc PL，Gold DR，Tzianabos AO，et al.Cytokines，allergy，and asthma ［J］.Curr Opin Allergy Clin Immunol，2005，5（2）：161－166.

［8］钟婕，陈胜利，许博，等.免疫状态及Th1／Th2型细胞因子在支气管哮喘患儿治疗前后的变化［J］.海南医学院学报，2012，18（12）：1695－1697.

［9］Schuijs MJ，Willart MA，Hammad H，et al.Cytokine targets in airway inflammation［J］.Curr Opin Pharmacol.2013，13（3）：351－361.

［10］袁颖，金素安，何世民.中药对Th1／Th2细胞因子平衡调节作用的研究进展［J］.上海中医药杂志，2011，45（5）：90－93.

［11］裘燕飞，王伟军.黄芪对哮喘患儿外周血Th1／Th2平衡的影响［J］.福建中医药，2012，43（1）：25－26.

［12］黎同明，朱章志，王桂香.不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1／Th2类细胞因子分泌的影响 ［J］.辽宁中医药大学学报，2011，13（8）：200－203.

［13］杨仁旭，代平，彭波，等.麻杏芎葶合剂对哮喘模型大鼠气道炎症的调控作用［J］.中医杂志，2012，53（21）：1847－1851.