高效液相色谱法测定复方柴黄软胶囊中黄芩苷含量

刘自平，戴一

（安徽新华学院药学院，安徽合肥230088）

高效液相色谱法测定复方柴黄软胶囊中黄芩苷含量

刘自平，戴一

（安徽新华学院药学院，安徽合肥230088）

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)测定清热丸中黄芩苷的含量.方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（50:50:0.2）；检测波长：280nm；流速为1.0ml/min；柱温为40℃.结果：黄芩苷线性范围为0.4-2.0μg，r=0.9998，平均回收率=98.90%，黄芩苷RSD=1.3%(n=6).结论：方法简便、准确、重现性好，可作为该制剂的含量测定方法.

柴黄软胶囊；黄芩苷含量测定；高效液相色谱法

复方柴黄软胶囊由柴胡、黄芩提取物组成，是在国家药品标准中药成方制剂第十册收载品种“柴黄冲剂”的基础上研制出来的新剂型，该剂型能够提高药物的稳定性、生物利用度、使药物形态具有可调性、顺应性好等优点，具有清热解毒、消炎的功效，用于上呼吸道感染,感冒发烧等症状.本处方中黄芩为君药，为有效控制本品的质量，本文对黄芩苷含量进行了测定.

1 仪器与试剂

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪（岛津，Kyoto，日本）；ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；Datajet数据处理机；CQ-250超声波仪(上海超声波仪器厂)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号0715200010，)；供试品(自制)；其他试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水-磷酸（50:50:0.2）；流速为1.0ml/min；检测波长：280nm；进样量20μ1，柱温：30℃；理论板数按黄芩苷峰计算应不低2500.

2.2 溶液的制备

取本品装量差异下的内容物，混匀，取0.2g，精密称定，加石油醚（60-90℃）10ml，置100ml具塞锥形瓶中，,超声提取10min，滤过，弃去石油醚提取液，滤纸滤渣挥去溶剂，一并移入同一具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定质量，超声提取30min，放冷，再称定质量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液.按处方组成制备不含黄芩提取物的其他药材，同法制备阴性样品溶液.精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每lml含70μg的溶液，即得对照品溶液.

2.3 标准曲线的建立

精密称取在60℃减压干燥6小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每lml分别含20μg、40μg、60μg、80μg、100μg的溶液，20μL注入液相色谱仪，测定，建立回归方程，Y=19835x+11537，r=0.9998，结果显示：黄芩苷在0.4–20μg进样量范围内线性关系良好.见表1及图1、图2、图3.

表1 线性关系考察表

图1 标准曲线图

图2 黄芩苷对照品HPLC图谱

图3 柴黄软胶囊样品HPLC图谱

2.4 精密度试验

精密吸取黄芩苷对照品溶液,浓度为60μg/ml，每次进样量为20μL，重复进样5次，测定峰面积，计算相对标准偏差RSD为1.0%，说明精密度良好.

2.5 稳定性试验

取同一份供试品溶液,分别于0、1、2、3、6h进样20μl，测定峰面积，计算相对标准偏差RSD为1.46%，结果显示供试品溶液6h内稳定，结果见表2.

表2 稳定性试验结果表

2.6 重现性试验

取同一批号的柴黄软胶囊，按供试品溶液制备方法制备，依法重复测定5次，计算相对标准偏差RSD为1.8%，重现性良好.

2.7 回收率试验

取已知含量的同一批号样品，精密加入一定量的对照品，按供试品溶液的制备方法制备，进样20μl，黄芩苷RSD=1.3%，平均回收率=98.9%.结果见表3.

表3 加样回收率试验结果表（n=6）

结果表明，本法具有良好的回收率.

2.8 空白试验

取黄芩缺味阴性对照样品，依法操作，进行HPLC分析，结果表明其他成分对黄芩苷的测定无干扰.

2.9 样品含量测定

精密称取三批软胶囊，制备成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中，测峰面积值，计算黄芩苷含量，结果见表4.

表4 样品黄芩苷测定结果表

3 讨论

本品中黄芩为君药，主要成分为黄芩苷，黄芩苷的含量测定，已报道的文献有紫外分光光度法，高效液相色谱法等.本文在参照中国药典2010年版一部黄芩药材项下含量测定的基础上，采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，建立了一种灵敏、专属可靠测定制剂中黄芩苷含量的高效液相色谱法，方法简单，准确度高，专属性强，重现性好，可作为质量标准控制的依据.

〔1〕王丽娜,李云涛，党长萍.HPLC法测定加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量[J].中国实验方剂学杂志，2008,14(1):11-12.

〔2〕王慧玉.反相高效液相色谱法测定安乐片中柴胡皂苷a含量[J].现代中西医结合杂志，2008,17(33):5177-5178.

〔3〕赵白云,朱臻宇,王彬，等.HPLC-DAD-TOF/MS法测定小柴胡汤中柴胡皂普a黄芩苷和甘草酸的含量[J].第二军医大学，2007,28(5):527-530.

R286.0

A

1673-260X（2013）03-0120-02