EMA 和Ki67 在不同分期及分型胸腺瘤中的表达及意义

全利国，姜学东，王 琼，吴延波，张其刚

胸腺瘤的良恶性等生物学特性与其他肿瘤相比有一定特殊性，其临床分期和病理分型方法随年代发展不断变化，不同病理分型依据不同，对临床指导意义也不相同。1999 年WHO 提出的胸腺瘤病理分型标准为临床和病理诊断提供了新的基础。本研究应用免疫组化方法检测上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)和Ki67 在不同病理分型和临床分期中的表达状况，探讨胸腺瘤的生物学特性及在诊断治疗中的应用。

1 对象与方法

1.1 对象 收集中国医科大学附属第一医院胸外科和武警辽宁总队医院胸外科2000－01 至2012－12 间手术切除的胸腺瘤患者共109 例，其中，男64例(58.7%)，女45 例(41.3%)，年龄22 ～72 岁，平均(55.62 ±5.47)岁。全部病例均行手术治疗，肿瘤完整切除87 例(79. 8%)，部分切除20 例(18.4%)，单纯探查2 例(l.8%)。

1.2 分组 按Masaoka 等［1］提出的标准，临床分期Ⅰ期32 例(29.4%)，Ⅱa 期26 例(23.9%)，Ⅱb 期23 例(21.1%)，Ⅲ期23 例(21. 1%)，Ⅳa 期5 例(4.5%)，Ⅳb 期0 例(0%)。按WHO 病理分型［2］，A 型22 例(20.2%)，AB 型11 例(10.1%)，B1型20 例(18.3%)，B2型29 例(26.6%)，B3型19 例(17.5%)，C 型8 例(7 .3%)。所有手术切除标本均常规固定，石蜡包埋，4 μm 连续切片备染。

1.3 方法 鼠抗人抗EMA 和Ki67 单克隆抗体购自DAKO 公司，SP 试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，按说明书进行免疫组化染色，DAB 染色，苏木精复染，PBS 做阴性对照，已知阳性组织片做阳性对照。结果判断，EMA 表达于细胞膜呈黄褐色，随机观察5 个高倍视野，根据细胞阳性着色程度，淡黄色颗粒为弱阳性(+)，1 分;棕黄色颗粒为中等阳性(+ +)，2 分;褐黄色为强阳性(+ + +)，3 分。计数视野内100 个细胞中，阳性细胞所占比例，分为25%以下，25% ～49%和50%以上。采用积分综合计量，公式为:(+)% ×1 +(+ +)% ×2 +(+ ++)% ×3，总数值＜1.0 为(+);1.0 ～1.5 为(++);＞1.5 为(+ + +)。Ki67 表达于细胞核呈棕黑色，随机观察5 个高倍视野，计数1000 个细胞中阳性细胞数值，以百分数表示，Ⅰ级，＜25%;Ⅱ级，25% ～＜50%;Ⅲ级，50% ～＜75%;Ⅳ级，≥75%。

1.4 统计学处理 所得数据应用SPSS10.0 统计软件，计数资料采用χ2分析，计量资料采用成组t 检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床分期 不同分期胸腺瘤EMA 阳性表达率基本相同，随着分期升高，表达强度增加，Ⅰ期和Ⅱ期间比较差异无统计学意义，但分别与Ⅲ期和Ⅳ期相比，有统计学差异(P ＜0.01)。同样，随着分期升高，胸腺瘤Ki67 指数分级逐渐升高，Ⅰ期和Ⅱ期间比较差异无统计学意义，但分别与Ⅲ期和Ⅳ期相比，差异有统计学意义(P ＜0.01)。见表1。

表1 EMA 及Ki67 在不同Masaoka临床分期胸腺瘤中的表达状况

2.2 病理分型 WHO 病理分型不同的胸腺瘤，EMA 阳性表达率无统计学差异，但从A 到C 型，表达强度逐渐增强，A、AB 和B1间无差异，但分别与B2、B3和C 型相比，后三型表达更强，差异有极显著意义(P ＜0.01)。Ki67 指数，从A 到C 型逐渐升高，B2、B3和C 型升高更明显，与A、AB 和B1型相比，差异有极显著意义(P ＜0.01)。见表2。

表2 EMA 及Ki67 在不同WHO 病理分型胸腺瘤中的表达状况

3 讨论

胸腺瘤是起源于胸腺上皮的肿瘤，由于其含有不同分化程度的淋巴细胞，胸腺组织的解剖特点，其良恶性判定需结合术者肉眼所见和病理结果。近年来，Masaoka 临床分期和WHO 病理分型相结合已广泛应用于判定胸腺瘤良恶性和预后的临床实践中。本研究应用了EMA 和Ki67 两种单克隆抗体，对不同临床分期和病理分型的胸腺瘤标本进行免疫组化染色，探讨EMA 蛋白和Ki67 抗原的表达程度与胸腺瘤生物学特性和预后的相关性，为术后辅助治疗手段提供依据。

EMA 为上皮膜抗原，是指从人乳脂小球膜上分离的糖蛋白总称，主要定位在细胞膜上，分布于各类型正常上皮组织细胞，当上皮细胞发生肿瘤时其含量及表达增加，并与肿瘤分化程度相关，目前已作为上皮性肿瘤分化的可靠标记物［3，4］。Ki67 抗原是肿瘤细胞中增殖基因表达的一种核蛋白，存在于增殖期的细胞中，从G1中晚期开始表达，M 期达到高峰，有丝分裂后迅速降解，而在G0期不表达，由于其半衰期较短，已成为目前最为可靠反应肿瘤细胞增殖活性的重要指标之一。Ki67 抗原的染色指数与某些恶性肿瘤分级、分化和预后相关，染色指数越高，肿瘤的恶性程度越高，分化和预后越差。有研究报道Ki67 抗原过量表达与胆管癌、胃癌、大肠癌、涎腺癌等恶性肿瘤的恶性生物学行为和预后密切相关［5，6］。

本研究结果显示，在Masaoka 临床分期方面，Ⅰ期和Ⅱ期之间EMA 和Ki67 两种抗体的表达无统计学差异，但分别与Ⅲ期和Ⅳ期相比，两种抗体的表达均有明显差异，后者两抗体表达均明显增强。在WHO 病理分型方面，A、AB 和B1 三型之间，EMA和Ki67 两种抗体表达程度无统计学差异，但分别与B2、B3和C 三型相比，均有明显差异，后三者中两种抗体表达均明显增强。B2和B3两型之间表达无差异，但分别与C 型相比，差异均有统计学意义，C 型两抗体表达更强。本实验结果提示，Masaoka 临床分期从Ⅱb，或Ⅲ期开始的胸腺瘤可能更早具有侵袭性或恶性倾向。WHO 病理分型B2型胸腺瘤开始可能更具有侵袭性或恶性倾向，与文献［7，8］研究结果相一致。笔者认为，对于Ⅰ期和Ⅱ期，A、AB 和B1型胸腺瘤，术中完整切除，术后是否做放疗或化疗值得商榷，但对于Ⅱb 期以上和B1型以上的胸腺瘤，术中应尽量做到适当扩大切除，而且考虑到具有恶性增殖的可能，无论术中胸腺瘤病灶是否完整切除，术后都应补充进行放疗或化疗。

［1］ Masaoka A，Monden Y，Nakahara K，et al.Follow－up study of thymomas with special reference to their clinical stage［J］.Cancer，1981，48(11):2485－2492.

［2］ Travis W D，Brambilla E，Mtiller Hermelink H K，et al.World Health Organization classification of tumors:pathology and genetics of tumors of the lung，pleura，thymus and heart［J］. Lyon IARC，2004，152－166.

［3］ 藏益秀，孙善平，王 晓，等. 乳腺癌患者外周血EMA和EGP－2mRNA 的表达及其临床意义［J］.中国普通外科杂志，2008，17(5):449－453.

［4］ Cui F，He J，Liu J，et al. Protein expression status of p53 and epidermal growth factor receptor in thymoma［J］.Oncol Lett，2011，2(3):459－463.

［5］ 符良斌，廖天安，刘 正，等.Survivin、Ki－67 核抗原在涎腺基底细胞腺瘤、癌中的意义［J］.中国实验诊断学杂志，2010，14(12):1945－1947.

［6］ 谭 林，王铁栓，赵 松，等.p53 和Ki－67 在胸腺瘤中的表达与其临床意义［J］. 中国老年学杂志，2011，31(2):207－208.

［7］ 吴开良，将国梁.胸腺瘤的治疗现状与争议［J］. 中华肿瘤杂志，2012，34(5):321－324.

［8］ Forquer J A，Rong N，Fakiris A J，et al. Postoperative radiotherapy after surgical resection of thymoma:differing roles in localized and regional disease［J］. Int J Radiat Oncol Biol Phy，2010，76(6):440－445.