绿豆癀对肝GSH含量及GSH-Re活性的影响

林文泉刘向国陈学习李杰芬

绿豆癀对肝GSH含量及GSH-Re活性的影响

林文泉1刘向国2陈学习3李杰芬4

目的观察绿豆癀对正常及泼尼松龙（PSL）所致肝损伤小鼠还原型谷胱甘肽（GSH）含量及谷胱甘肽还原酶（GSH-Re）活性的影响。方法将小鼠随机分为正常对照组、泼尼松龙组、绿豆癀高、中、低剂量组和绿豆粉组。绿豆癀和绿豆粉干预15d，除正常对照组外，其余各组从干预第8天开始皮下注射PSL 15mg/kg，连续5d。测定GSH含量及SH-Re活性。结果与正常对照组相比，泼尼松龙组GSH含量明显降低（P＜0.01）；与泼尼松龙组相比，绿豆癀各剂量组和绿豆粉组GSH含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01）；绿豆癀各剂量组与绿豆粉组比较有明显差异（P＜0.05或P＜0.01）；绿豆癀高剂量组的GSH-Re活性明显增加。结论绿豆癀对肝GSH含量GSH-Re活性具有调节作用。

绿豆癀；泼尼松龙；谷胱甘肽；谷胱甘肽还原酶

绿豆癀主要产于台湾中南部山区，主要是将绿豆按照流传于民间的药方制成，具有较广泛的药理学特性。本实验研究绿豆癀对正常及泼尼松龙所致肝损伤小鼠GSH含量以及SH-Re活性的影响，以期了解绿豆癀在药物代谢酶方面的作用，为进一步开发应用绿豆癀提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物由福建医科大学实验动物中心提供60只雄性、体重在（20±2）g的清洁级、昆明种健康小鼠。

1.1.2 药品与试剂绿豆癀（批号200620）、绿豆粉（为无基因改良绿豆粉，批号2006101）均由台湾泰鹤生医科技有限公司提供；选取由湖北制药联合有限公司生产的PSL注射液；选择由南京建成生物工程研究所提供的GSH及GSH-Re测定试剂盒。

1.1.3 仪器选择由北京鑫科奥商贸有限公司生产的型号为CP124S的电子天平；由SIGMA公司生产的型号为3K18的低温高速离心机；由上海精密仪器仪表有限公司生产的紫外-可见分光光度计。

1.2 方法

1.2.1 药物及试剂配制绿豆粉用双蒸水配制成浓度为0.375g/ml绿豆粉溶液。绿豆癀用双蒸水配制成浓度分别为0.1500g/ml、0.0750g/ml、0.0375g/ml的高、中、低三个剂量的溶液。

1.2.2 动物分组及给药方法将60只小鼠随机分为正常对照组、泼尼松龙组、绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。正常对照组和泼尼松龙组每天用0.5ml饮用水灌胃；绿豆粉组每天用0.5ml绿豆粉液灌胃；绿豆癀高、中、低剂量三组每天用相应浓度绿豆癀液0.5ml灌胃。连续15d，除正常对照组外，其余各组从灌胃第8天开始每天皮下注射PSL 15mg/kg，连续5d。

1.2.3 观测指标与方法小鼠在末次给药后断头处死，取肝脏用Tris-HCl 50mmol/L（PH 7.4）制成25%肝匀浆，差速离心法制备微粒体及线粒体，测定GSH含量及GSH-Re活性。

1.3 统计学分析采用SPSS 19.0 for Windows软件处理。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与正常对照组相比，泼尼松龙组GSH含量明显降低（P＜0.01）；与泼尼松龙组相比，绿豆粉组和绿豆癀各剂量组GSH含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01）；绿豆癀各剂量组与绿豆粉组比较有明显差异（P＜0.05或P＜0.01）；绿豆癀高剂量组的GSH-Re活性明显增加。绿豆癀呈一定的剂量效应依赖关系，见表1。

3 讨论

临床已知，地塞米松、泼尼松龙等糖皮质激素类药物是肝药酶诱导剂，以往研究表明，超生理剂量糖皮质激素能导致大量超氧阴离子产生，且当其所生成的多种氧自由基超过机体超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胧甘肽过氧化物酶等抗氧化措施的清除能力时，可引起膜脂质过氧化损伤[1]。

还原型GSH是广泛存在于细胞内的小分子三肽化合物，具有维持细胞蛋白质结构和功能、抑制细胞凋亡等方面发挥着重要作用[2]，缺乏或耗竭GSH会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用，GSH是一种低分子抗氧化剂，可清除机体的氧自由基，主要包括超氧阴离子（•O2-）、羟自由基（•OH）和过氧化氢（H2O2）等，因此，GSH含量多少是衡量机体抗氧化能力的重要因素。谷胱甘肽还原酶（GSH-Re）是机体内清除自由基的重要抗氧化酶之一[3]。随年龄的增长，抗氧化酶清除自由基的能力逐渐下降，从而引起氧自由基及脂质过氧化物日益增多，导致机体衰老和老年性疾病的发生[4-5]。

本实验结果显示，大剂量泼尼松龙会耗竭肝线粒体GSH而使GSH下降，绿豆癀可对PSL所至小鼠肝线粒体GSH和活性改变具有一定的恢复作用，提示绿豆癀具有明显的抗氧化活性，能有效清除自由基，保护细胞膜结构与功能的完整，保护机体不受氧化因素损伤，这可能是绿豆癀护肝解毒的作用机制之一。

表1 绿豆癀对PSL诱导的小鼠肝线粒体的GSH、GSH-Re的影响(±s)

表1 绿豆癀对PSL诱导的小鼠肝线粒体的GSH、GSH-Re的影响(±s)

注：与正常组相比，**P＜0.01；与泼尼松龙组相比，△△P＜0.01；与绿豆粉组相比，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05

组别nGSH(μmol/g) GSH-Re(nmol/min·mg)正常对照组 102.96±0.11 2.41±0.06 4.83±0.07绿豆癀高剂量组102.74±0.06泼尼松龙组 101.46±0.06**4.81±0.06**绿豆粉组 101.75±0.08▲▲3.62±0.07▲▲4.58±0.09绿豆癀低剂量组101.84±0.07绿豆癀中剂量组102.19±0.114.78±0.06

[1]吴东方,彭仁诱,汪晖.阿魏酸钠部分减轻氢化泼尼松引起的小鼠肝脏毒性[J].药学学报,1995,30(11)：801.

[2]Richie JPJr, Skowronski L, Abraham P, et al.Blood glutathioneeconcentrations in a large2scale human study[J].Clin Chem, 1996, 42：64-70.

[3]陈勤.抗衰老研究实验方法[M].北京：中国医药科技出版社, 1996：436.

[4]崔艳秋,罗鼎真,王晓民.褐藻多糖硫酸酯的抗炎与抗氧化活性研究进展[J].药学学报,2008,43(92)：1186.

[5]先宏,陈国安,丛建波,等.褐藻硫酸多糖铁配合物的稳定性及其清除自由基作用[J].营养学报,2008,30(5)：491.

R285.5

A

1673-5846(2013)08-0037-02

1台湾中医药学会，台湾 60054

2安徽中医学院，安徽合肥 230038

3福建中医药大学，福建福州 350108

4广州中医药大学，广东广州 510405

刘向国（1967-），男，博士，副教授，硕士研究生导师，研究方向：中西医结合基础研究。