胃黏膜活检组织中幽门螺杆菌检测方法的改进

陈琼霞，李 艳，陈 莹，高友晶，刘丽江*

（1.江汉大学 医学院，病理学与病理生理学教研室，湖北 武汉 430056；2.江大病理诊断所，湖北 武汉 430056）

胃黏膜活检组织中幽门螺杆菌检测方法的改进

陈琼霞1，李 艳2，陈 莹1，高友晶1，刘丽江2*

（1.江汉大学 医学院，病理学与病理生理学教研室，湖北 武汉 430056；2.江大病理诊断所，湖北 武汉 430056）

目的：探索可用于临床的简单易行的幽门螺杆菌染色方法。方法：采用改良的亚甲蓝染色方法，通过对胃黏膜活检组织的染色，明确幽门螺杆菌的感染。结果：亚甲蓝染色可将幽门螺杆菌着色，形态结构清晰且无背景干扰。结论：经过改良的亚甲蓝染色检查HP的技术方法，可在临床推广应用。

幽门螺杆菌；亚甲基蓝染色；胃黏膜活检

幽门螺杆菌（H.pylori，HP）是迄今为止人类发现的胃内最重要的细菌。大量临床资料提示，HP可增加胃癌发生的危险性，特别是与肠型胃癌以及胃的B细胞性淋巴瘤的发生有关。在十二指肠溃疡、胃癌和慢性胃炎中HP的阳性率可能存在显著差异。来自实验研究的数据显示，HP可诱发动物的胃癌形成，动物感染HP后，出现严重的活动性慢性胃炎、溃疡及肠上皮化生等病变，并发现腺癌与肠上皮化生区密切相关［1］。因此，对于临床胃镜活检样本进行HP的检测，不仅有助于观察HP与胃疾病的关系，同时也是临床治疗以及根除HP感染的客观指标，现已经纳入了中国慢性胃炎临床治疗指南［2］。

胃黏膜HP感染的诊断标准原则上要求可靠、简单，以便于实施和推广。在胃黏膜活检中进行HP检测是目前明确HP感染的金标准之一［2］。染色法是最常用的经典的方法，主要有两大类，即特殊染色法和免疫组化染色法，其中特殊染色法包括：硝酸银染色、中性红染色、革兰氏染色、瑞氏染色以及姬姆萨染色等等［3］。

经过多年的探索，笔者运用亚甲蓝快速染色法鉴定胃黏膜活检组织中的HP，其染色方法简单、容易掌握，同时具有经济和快速的优势，适合推广，经过总结介绍如下。

1 亚甲蓝快速染色法鉴定胃黏膜法检组织中的HP

1.1 亚甲蓝染色液的配制

试剂：硼酸0.5 g，亚甲蓝1 g，蒸馏水100 mL。配制方法：①将硼酸加入蒸馏水中充分溶解，配制成0.5%的硼酸液备用；②将1 g亚甲蓝加入0.5%的硼酸液中搅拌，静置后再搅拌使之充分溶解，配制成1%的亚甲蓝硼酸液备用。

1.2 染色步骤

胃镜活检标本经常规制片后，脱蜡水化后进行HP染色。①将切片放入0.5%的硼酸液中媒染1 min（该步骤有助于后续亚甲蓝的着色）；②取出切片直接放入1%亚甲蓝硼酸染液中染色1 min；③流水冲洗（洗去粘附在玻片上多余的染液）；④蒸馏水洗；⑤自然干片后常规封片。上述染色过程应在室温下（20～24℃）进行。

1.3 观察

感染的HP多位于胃黏膜表层细胞与黏液之间，在黏液层下方靠近黏膜细胞的表面容易找到。HP形态为短梭形、短S形（图1、图2）。经过抗HP治疗后的胃黏膜活检组织，其HP的形态可发生变化，变为小圆球形，但是经过仔细认真的观察，仍旧可以找到残存的具有典型形态的HP。

图1 胃黏膜活检组织，在黏膜上皮和黏液层之间可见幽门螺杆菌，呈短梭形及S形，HE染色（400×）

图2 胃黏膜活检组织，在黏膜上皮和黏液层之间可见大量幽门螺杆菌，形态结构清楚，容易辨认（上述2张切片来自同一个病例），亚甲蓝染色（400×）

2 讨论

诊断幽门螺杆菌感染的方法有多种，可用于临床的实验室诊断方法包括：HP直接培养、尿素酶依赖性试验（RUT，13C或14C-UBT）、血清学试验（ELISA或免疫印迹试验等）、特异性的PCR检测以及形态学观察等。由于幽门螺杆菌对生长环境要求高，对氧气的需要比较特殊，HP直接培养法不适宜用于常规的临床检验。尿素酶依赖性试验，操作简单，检验速度快，是确认幽门螺杆菌感染的常规检验方法之一，但该试验不可避免地存在一定程度的假阳性和假阴性，尤其是尿素酶阴性的幽门螺杆菌感染时，该实验就很难检出。血清学检查HP感染，由于不能直接定位，还存在着一定问题，也不是临床应用的主要方案。特异性的HP-PCR检查，比血清学检查具有更高的灵敏度和更好的特异性，但是对于技术条件和操作人员有比较高的要求，同样也面临着假阳性的问题，不易推广应用。形态学观察检测HP是最客观简便的方法之一，有经验的临床病理医师在一张制作良好的常规HE染色的切片上，就能判断有无HP的存在。笔者应用改良的亚甲蓝染色，在胃镜活检样本上对有无HP的感染做出判断，技术方法非常简单，操作简单快捷，染色的试剂成本很低，而且可以提高常规HE染色的检查敏感度。因此，经过改良的亚甲蓝快速染色检查HP的技术方法，不失为可在临床推广应用的良好的方法之一。

［1］ 陈清波，王洪波，徐明壶，等.慢性胃病伴肠上皮化生、胃癌与幽门螺杆菌感染的关系［J］.实用癌症杂志，2010，25（2）：169-171.

［2］ 中华医学会消化病学分会.中国慢性胃炎共识意见（全国第二届慢性胃炎共识会议2006年）［J］.胃肠病学，2006，11（11）：674-684.

［3］ 凌亚伟，崔英，陈英杰.姬姆萨染色改良法在胃幽门螺杆菌检查中的应用及其价值［J］.昆明医学院学报，2007（2）：125.

Improved Detecting Methods of Helicobacter Pylori in Gastric Mucosal Biopsy

CHEN Qiong-xia1，LI Yan2，CHEN Ying1，GAO You-jing1，LIU Li-jiang2
（1.School of Medicine，Jianghan University，Wuhan 430056，Hubei，China；2.Jiangda Institute of Pathology，Wuhan 430056，Hubei，China）

Objective：Expoles simple staining method for helicobacter pylori which can be used in clinic.Methods：Adopts improved methylene blue staining method，through the staining to gastric mucosal biopsy tissue，makes clear the infection of helicobacter pylori.Results：The methy⁃lene blue can stain the helicobacter pylori，the structure is clear without background interference. Conclusion：The improved methylene blue staining method for detecting helicobacter pylori can be used in clinical practice.

helicobacter pylori；methylene blue staining；gastric mucosal biopsy

R361.2-33

：A

：1673-0143（2013）01-0091-02

（责任编辑：范建凤）

2012－12－24

陈琼霞（1967—），女，实验师，研究方向：临床病理诊断技术。

*通信作者：刘丽江（1955—），女，教授，博士，研究方向：胃肠道肿瘤病理。E-mail：liulijiang@163.com