乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗体的研究

邹 莉（湖北省谷城县人民医院检验科 441700）

乙型肝炎（简称乙肝）是我国的常见病、多发病，急性感染后还可发展为慢性，甚至转变为肝硬化、肝癌，危害十分严重。国内外学者近年来发现乙肝病毒（HBV）感染存在各种自身免疫现象，主要表现为血清中检测出多种自身抗体，主要包括血清抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）和抗线粒体抗体（AMA）等［1－2］。自身免疫在病毒性肝炎发病机制中的作用越来越受到人们的重视，由此表明病毒感染可能与许多自身免疫性疾病的发生有十分密切的关联［3］。为进一步了解自身抗体在乙肝中的检出率及在病情转归中的作用，本文检测了376例慢性乙肝（CHB）、乙肝后肝硬化（LC）、肝癌（HCC）患者血清中的ANA水平，并进一步分析其特征，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年4月至2012年4月来本院就诊的门诊及住院HBV感染者共376例，分为3组：（1）CHB组276例，其中男214例，女62例，平均年龄（37.5±12.4）岁；（2）LC组52例，其中男37例，女15例，平均年龄（50.0±9.5）岁；（3）HCC组48例，其中男40例，女8例，平均年龄（57.90±12.35）岁。乙肝和肝硬化诊断标准均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》所规定的标准，HCC诊断主要根据甲胎蛋白（AFP）阳性和影像学检查有肝占位性病变为诊断标准。健康对照组为本院健康体检者66例，其中男38例，女28例，平均年龄（34±8）岁。

1.2 实验方法

1.2.1 标本 采集空腹静脉血，分离血清后待测。

1.2.2 HBV血清标志物检测 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清 HBV标志物，HBV表面抗原（HBsAg）、HBV表面抗体（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗体（抗－HBe）、HBV核心抗体（抗－HBc），试剂盒为北京金豪制药有限公司产品，严格按照说明书操作。

1.2.3 ANA测定 采用ELISA检测ANA，待测血清用稀释液1/10、1/100、1/320、1/1 000稀释，血清稀释大于1/100为有临床意义，即为阳性。试剂购于德国欧蒙公司，操作及结果判断严格按说明书执行。

1.2.4 ANA谱的检测 ANA谱检测试剂盒购于德国欧蒙公司，采用印迹法检测如下7种抗原的抗体：抗核糖核酸蛋白抗体（抗nRNP/Sm）、Sm抗原、抗干燥综合征抗体（抗SS－A）、抗SS－B、Jo－1抗原、Sol－70抗原、抗双链DNA抗体（抗ds－DNA）。1.2.5 生化指标检测及HBV－DNA定量测定 全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）等；HBV－DNA定量采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测，检测范围1.0×10～5.0×10copy/mL。

1.3 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件进行资料分析，各组间阳性率比较采用χ2检验。

2 结 果

2.1 376例HBV感染者血清ANA检测结果

2.1.1 ANA检测结果 376例HBV患者中ANA阳性者99例，占总人数26.3%，其中CHB组58例，占21.0%（58/276），LC组20例，占38.5%（20/52），HCC组21例，占43.7%（21/48）。66例健康对照组ANA阳性2例，占3.0%（2/66）。LC组和HCC组ANA阳性率显著高于CHB组，差异有统计学意义（P＜0.01）；3组ANA阳性率均高于健康对照组；LC组与HCC组ANA阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.1.2 其他自身抗体检测结果 在对本研究HBV患者的7种自身抗体分析中发现，有4种抗体的阳性率高达10.0%以上，其中抗nRNP抗体阳性率11.9%、抗SS－A抗体23.9%、抗SS－B抗体10.1%、抗ds－DNA 14.9%。

2.2 ANA阳性滴度分布情况 见表1。由表1可见，HBV感染者 ANA 以低滴度（1/100）为主，CHB、LC、HCC组的ANA滴度1/100组均高于滴度大于或等于1/320组ANA数量，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.3 各组ANA滴度与ALT、AST、HBV－DNA比较 见表2。CHB组ANA滴度1/100组和大于或等于1/320组的ALT及AST水平增高不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。对3组HBV－DNA定量分析发现，99例ANA阳性的HBV患者中有72例检测出 HBV－DNA，阳性率为72.7%；277例ANA阴性的HBV患者中有111例检测出HBV－DNA，阳性率为40.0%。ANA阴性组和阳性组HBV－DNA检出率差异有统计学意义（χ2＝6.23，P＜0.05），但3组患者 ANA滴度1/100组和大于或等于1/320组HBV－DNA含量差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 3组ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA结果±s）

表2 3组ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA结果±s）

组别 ANA滴度 ALT（U/L）AST（U/L）HBV－DNA（copy/mL）CHB 1/100 114.2±78.6 86.2±64.3 5.73±1.42≥1/320 154.6±84.4 115.2±72.5 5.94±1.40 LC 1/100 53.3±35.3 76.2±41.6 5.64±1.25≥1/320 65.8±31.7 63.5±37.2 5.71±1.34 HCC 1/100 52.6±37.4 60.8±39.2 5.33±1.36≥1/320 61.6±42.9 64.1±41.2 6.21±1.13

3 讨 论

在我国HBV感染是肝炎中感染率最高的一种疾病，据不完全统计HBV携带者占15%～20%，它所导致的慢性肝炎往往会转化为肝硬化、肝癌。目前有研究认为，乙肝患者的肝细胞病变并非是HBV直接对肝细胞的破坏，而是人体对HBV的免疫应答所引起的免疫损伤造成肝组织的炎性反应坏死，这种免疫应答包括自身免疫反应。文献报道及本研究均证实，在HBV感染者血清中检测出多种自身抗体，包括ANA、抗nRNP/Sm、AMA、SMA、抗肝特异性脂蛋白抗体等，但最常见的自身抗体是器官非特异性的ANA［4－7］。随着肝炎的病理改变趋向慢性化和恶性化，多种自身抗体的阳性率和水平都有提高的趋势。因此，自身免疫在乙肝发病机制、病情发展及癌变中的作用越来越受到人们的重视。

本研究选取了376例CHB、LC、HCC患者和66例健康对照者血清，用ELISA对其ANA进行了检测及分析，CHB、LC、HCC患者ANA阳性检出率分别为26.3%（58/276）、38.5%（20/52）、43.7%（21/48），均高于健康对照组3.0%（2/66）。研究结果表明，LC、HCC组ANA阳性率显著高于CHB组，差异有统计学意义（P＜0.01）；LC与HCC组阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。

本实验HCC患者的ANA检出率与以往报道的HCC中ANA检出率低有所不同［4］，其原因可能是：（1）检测自身抗体实验方法、试剂有所不同，其实验的灵敏度、特异性会有差别；（2）选取的检测人群数量有一定的差异，可能也会对结果产生一定的偏差。但与文献［5，8］报道的ANA阳性率结果基本相符。有研究认为，抗SS－A更易在自身免疫性肝脏疾病中出现［9］。本研究中抗SS－A阳性率仅次于ANA，为23.9%，表明抗SS－A可能是机体受到HBV感染而产生的特异性自身抗体。

本研究中HBV感染者ANA滴度以低滴度（1/100）为主，高滴度少见。ANA阳性组HBV－DNA含量明显高于阴性组，推测HBV感染患者血清中自身抗体的出现可能与HBV在体内的活跃复制有关。ANA可能的产生机制是：HBV复制促进HBV抗原与宿主肝细胞表面或内部的蛋白质分子相互作用，形成含有自身组织蛋白的抗原。此类抗原具有较强的免疫原性，刺激机体产生自身抗体，并引起持续的自身免疫反应。HBV感染者ANA滴度和HBV感染可引发自身免疫性反应，导致机体自身免疫紊乱。本研究发现，HBV感染引发的自身免疫反应不仅与ANA有关，而且与HBV病毒复制水平有关。

因此，对HBV感染者检测自身抗体有助于了解机体的免疫状况，对临床诊断和指导临床合理选择用药及预后评估具有重要参考价值。

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