老年性白内障患者术前C反应蛋白血浆水平与其单核苷酸多态性的相关性

陈建欢* 郑玉倩 许慈燕

汕头大学·香港中文大学联合汕头国际眼科中心，广东 汕头515000

老年性白内障患者术前C反应蛋白血浆水平与其单核苷酸多态性的相关性

陈建欢* 郑玉倩 许慈燕

汕头大学·香港中文大学联合汕头国际眼科中心，广东 汕头515000

目的 C反应蛋白（CRP），作为一种急性期蛋白，参与多种重要的炎症反应。CRP血浆水平在年龄相关性黄斑变性患者中升高，并可能受遗传因素调控，但目前在中国人群中尚未有相关研究发表。本实验希望通过研究CRP血浆水平与其单核苷酸多态性（SNP）的相关性，分析遗传因素对蛋白表达的影响。方法 我们收集了71例白内障患者术前血样，对所有样本取血浆，并提取基因组DNA。采用Taqman Assay方法对CRP基因的3个标签SNP rs1800947、rs1417938和rs1205进行基因型测定。基因型数据用Haploview 4.2版本分析Hardy-Weinberg平衡，并对得到的蛋白及基因型数据按加性模型进行线性回归分析，同时对性别和年龄进行校正。结果 本实验分析的3个标签SNP均没有偏离Hardy-Weinberg平衡。加性模型分析的结果显示，rs1800947的C等位基因与较低的血浆CRP水平显著相关。在其他2个标签SNP中未发现与血浆CRP水平存在显著相关性（P＞0.05）。结论 本研究首次在中国人群中证明了CRP血浆水平与其遗传多态性存在显著相关性，提示CRP的表达受遗传调控，为进一步研究其参与炎症反应的分子机制提供了参考。

C反应蛋白；数量性状；关联分析；单核苷酸多态性

C反应蛋白（C-reactive protein， CRP），一种急性期蛋白，是先天性免疫的重要组成部分，可能参与多种免疫相关疾病的分子发病机制[1]。在眼科疾病研究中，越来越多的证据证明炎症及免疫相关过程在年龄相关性黄斑变性（AMD）中起重要的作用。CRP能与CFH结合，是其重要的调控因子，对白人和日本人群的研究报告表明，CRP血浆水平在息肉样脉络膜血管病变（PCV）和AMD患者中升高，提示CRP可能参与PCV和AMD的发病过程[2-6]。这些都提示，CRP的表达调控可能参与AMD的发病过程。近期有研究报导，CRP血浆水平与其基因的多态性存在显著关联，提示其并可能受遗传因素的调控[7]。但到目前为止，上述这些研究都是在国外人群中进行的，而AMD在不同人群中已知存在较大的遗传差异[8]，对于中国人群CRP血浆水平与其基因的多态性是否也存在关联，尚未有相关研究报导，有待阐明。

本研究希望通过研究CRP蛋白血浆水平与其单核苷酸多态性（SNP）的相关性，分析遗传因素对蛋白表达的影响。

1 方法与材料

1.1 样本及信息采集

本研究经过汕头大学 香港中文大学联合汕头国际眼科中心伦理委员会，并遵循赫尔辛基宣言进行。对每个参加者都详细解释研究的性质并取得其书面知情同意书。

本研究入组对象为71例住院拟进行老年性白内障手术的患者，经详细的眼科检查，并排除外伤等情况，术前采集外周血，分离血浆。对所有样本取血浆，并提取基因组DNA。基因组DNA和血浆分离提取后随即存储于-80C超低温冰箱，至定量实验前才取出，以保证质量的稳定性。

1.2 测定血浆中的CRP水平

血浆中的CRP水平在Biotek Powerwave XS分光光度计上用酶联免疫吸附试验（人CRP ELISA试剂盒，西唐生物科技，上海）按生产商说明书进行测定，并用标准曲线法进行绝对定量。

1.3 基因分型

根据HapMap数据库中中国人的单核苷酸多态性（SNP）数据，在Haploview中按r2＞0.8，次要等位基因频率≥5%的参数计算选取得到CRP的标签SNP，用于代表该基因组区域内的SNP。在LightCycler 480I（Roche， 美国）型实时定量PCR仪上，采用Taqman 探针法对CRP基因的3个标签SNP rs1800947、rs1417938和rs1205进行基因型测定。

1.4 数据统计

基因型数据用Haploview 4.2版本分析Hardy-Weinberg平衡，并对得到的蛋白及基因型数据进行数量性状关联分析，分析按加性模型进行线性回归，同时对性别和年龄进行校正。

2 结 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡

本实验分析的3个标签SNP均没有偏离Hardy-Weinberg平衡（HWE P＞0.05）。

2.2 血浆CRP水平

测得的老年白内障患者术前的CRP血浆水平范围为153～8392 ng/ mL，平均值±标准差为3187± 2119 ng/mL，并且线性回归显示与年龄呈显著正相关（效应值β ± 标准误差SE = 34 ± 14 ng/mL年，P = 0.016）。

2.3 SNP与血浆CRP水平的关联分析

加性模型分析的结果显示，rs1800947的C等位基因与较低的血浆CRP水平显著相关。在其他2个标签SNP中未发现与血浆CRP水平存在显著相关性（P ＞ 0.05）。对rs1800947不同基因型的血浆CRP水平进行比较发现，带有GG基因型人的血浆CRP水平为3414 ng/mL，带CG基因型的为2420 ng/mL，带CC基因型的为1756.4 ng/mL，随C等位基因的数量增加显现递减趋势（图1）。

图1 不同rs1800947基因型中的血浆CRP水平

3 讨 论

本研究首次在中国人群中证明了CRP血浆水平与其遗传多态性存在显著相关性，提示CRP的表达受明显的遗传调控，并且加性模型能较好地解释rs1800947不同等位基因对CRP血浆水平的影响。

CRP的血浆水平与年龄密切相关。Hutchinson等对德国和苏格兰的白人成年人群的研究表明，55～74岁人群的CRP血浆水平平均为1.50-2.40mg/L，老龄人群中的CRP水平约为年青人群的2倍[9]。我们的研究对象均为老龄人，结果与Hutchinson的老龄人群的结果相比，CRP血浆水平较高，但是一样检测到了CRP与年龄的显著正相关关系。

SNP rs1800947的C等位基因在白人中有报导与与较低的血浆CRP水平相关。在我们的中国人样本中，rs1800947的C等位基因与较低的血浆CRP水平相关，这与已有的在国外人群中的报导是相一致的，提示CRP表达水平的遗传关联具有跨人群的特点。rs1800947位于CRP基因的启动子区，C等位基因可能通过改变转录因子与启动子区的结合能力从而影响CRP mRNA的转录起始效率，进而影响CRP的表达。

CRP是炎症反应的一个重要指标，与多种炎症及免疫过程和疾病相关，在心血管疾病起重要的作用[7]，在眼科疾病中特别与AMD和PCV的发生有密切关系[10]。因此，rs1800947可能通过调控CRP表达从而参与AMD和/或PCV的发生，这将有待进一步的研究。

我们的实验首次在中国人群中对CRP的血浆水平与其遗传多态性之间的关系进行了研究。结果证明CRP的血浆水平与其遗传多态性之间存在显著关联。上述发现需要进一步在更多的地区和人群中对上述结果进行验证。

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R776.1

B

1671-8194（2013）19-0094-02

国家自然科学基金资助项目（81000397），广东省科技计划资助项目（2010B031600130）

*通讯作者：