乙酰肝素酶在贲门癌中的表达及与临床病理的关系

刘亚红

（河南省洛阳市洛阳军分区卫生所，河南 洛阳 471000）

乙酰肝素酶在贲门癌中的表达及与临床病理的关系

刘亚红

（河南省洛阳市洛阳军分区卫生所，河南 洛阳 471000）

目的 检测乙酰肝素酶和低氧诱导因子 1α 在贲门癌中的表达，分析其与临床病理的关系并探讨低氧诱导因子 1α 对调节乙酰肝素酶的可能机制。方法 用免疫组化分别检测 48 例贲门癌和 26 例癌旁组织中乙酰肝素酶（SP 法）及低氧诱导因子 1α 蛋白（SABC 法）的表达，并分析它们与临床病理因素之间的关系。结果 乙酰肝素酶和低氧诱导因子 1α 在 48 例贲门癌中的阳性表达率分别为 62.5% 和 45.9%，明显高于相应癌旁组织。乙酰肝素酶阳性表达与淋巴结转移、TNM 分期密切相关；低氧诱导因子 1α 与远处转移、淋巴结转移密切相关。乙酰肝素酶与低氧诱导因子 1α 有明显的阳性共表达率 (P=0.020)。结论 乙酰肝素酶在贲门癌中表达增高，低氧诱导因子 1α 可能参与上调乙酰肝素酶的表达水平，促进乙酰肝素酶介导的贲门癌浸润及转移。

乙酰肝素酶；贲门癌；临床病理因素

浸润和转移是影响恶性肿瘤治愈率的主要因素，恶性肿瘤细胞侵出基底膜(BM)进入细胞外间质(ECM)是转移过程中关键而必须的步骤。研究证实，乙酰肝素酶可破坏BM和ECM的完整性，从而有利于肿瘤细胞穿越ECM和血管内皮，促进侵袭和转移的发生[1,2]。虽然目前对乙酰肝素酶在肿瘤浸润转移中的作用有较多了解，但是对于其贲门癌中的表达以及与临床病理的关系研究甚少。同时低氧诱导因子1α在肿瘤的演进中扮演重要角色，与浸润、转移关系密切，包括加速肿瘤细胞的侵袭和转移、促进肿瘤血管生成。研究发现通过抑制低氧诱导因子1α的活化可以促进乙酰肝素酶的表达[3]。但是在贲门癌中低氧诱导因子1α和乙酰肝素酶的关系仍然需要探讨。我们检测了乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α蛋白在贲门癌中的表达，分析其与临床病理因素之间的关系，初步探讨低氧诱导因子1α对乙酰肝素酶调节的可能机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象

河南省洛阳市三甲医院于2007至2011年接受手术治疗的贲门癌患者48例，其中女18例、男30例，年龄32～71岁，中位年龄(56±8)岁，所有标本术后经病理证实均为腺癌。

1.2 试剂及结果评估

羊抗兔低氧诱导因子1α抗体和免疫组化试剂盒购于北京中山公司；兔抗山羊乙酰肝素酶多克隆抗体购于GIBCO公司。以正常山羊或者兔血清作为一抗行阴性对照，以已知表达阳性的乳腺癌、子宫癌组织分别作为低氧诱导因子1α和乙酰肝素酶阳性对照。显微镜下观察阳性细胞并计数，根据所占比例分为：(-)阳性细胞数＜10%；(+)介于10%～50%之间；(++) 阳性细胞数＞50%。

1.3 统计学处理

所用软件包为SPSS13.0，统计学方法采用χ2检验和Fisher’S精确概率法，单因素分析用秩和检验。P＜0.05为差异有显著性。

2 结 果

2.1 乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α在贲门癌中的表达

乙酰肝素酶定位于贲门癌细胞的胞浆，主要表达于癌组织的边缘。位于肿瘤边缘的癌旁组织也有乙酰肝素酶表达而正常的贲门上皮无乙酰肝素酶表达。低氧诱导因子1α主要表达于细胞浆，而正常的贲门组织内无低氧诱导因子1α表达。实验显示，在贲门癌组织中，乙酰肝素酶表达率为62.5%(30/48)，癌旁组织为23.0%(6/26)，P＜0.05。低氧诱导因子1α在癌组织中表达率为45.9%(22/48)，在癌旁组织为19.2%(5/26)，P＜0.05。

2.2 乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α表达与临床病理的关系

表1总结了贲门癌中乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α蛋白表达与临床病理之间的关系。乙酰肝素酶表达与淋巴结转移(P=0.003)以及TNM分期密切相关(P=0.032)。而低氧诱导因子1α表达与远处转移(P=0.032)以及淋巴结转移密切相关(P=0.018)。二者的表达均与患者年龄及组织学分级无显著性相关。

表1 乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α蛋白的表达与临床病理因素之间的关系

2.3 乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α表达之间的关系

乙酰肝素酶表达阳性的患者其低氧诱导因子1α的表达也高，两者具有相关性(P=0.020，表2)。

表2 乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α表达之间的关系

3 讨 论

因缺乏特异性早期症状且贲门在解剖方面的特殊位置，贲门癌早期误诊率很高，病死率与发病率呈逐年上升的趋势。其中转移和浸润是贲门癌患者预后不良的主要因素。乙酰肝素酶通过降解硫酸乙酰肝素参与血管生成、浸润及转移等重要过程，而该酶是哺乳动物唯一的能够降解硫酸乙酰肝素的内切糖苷酶，因此，乙酰肝素酶已经成为抑制肿瘤浸润、转移理想的靶点。目前只有关于乙酰肝素酶与贲门癌关系的零星研究，且这些研究局限于乙酰肝素酶单个因素，对乙酰肝素酶与贲门癌其他临床病理因素之间的关系却尚无研究。本实验表明：乙酰肝素酶在正常的贲门组织中没有表达，而在48例癌组织中表达率高达62.5%，且表达主要见于肿瘤组织的边缘，表明乙酰肝素酶对降解基底膜具有重要作用。虽然贲门癌在各个时期均可转移，但是TNM分期越晚，患者的肿瘤就越具有侵袭性，并且乙酰肝素酶的表达率也增高。因此，高表达的乙酰肝素酶是胃贲门癌生长、侵袭、转移能力增强的重要因素[4]。

与乙酰肝素酶不同，本资料显示低氧诱导因子1α与肿瘤的淋巴结转移、远处转移密切相关，且与乙酰肝素酶表达正相关。那么低氧诱导因子1α是否能调节乙酰肝素酶的表达呢？肿瘤微环境，主要是肿瘤组织处于低氧情况下，可以持续刺激低氧诱导因子1α的活化，引起低氧诱导因子1α下游相关基因的表达减弱或增强[5]。如前所述，阻断低氧诱导因子1α信号传导通路可以抑制乙酰肝素酶的表达增强。在体外研究中，我们曾用低氧诱导因子1α的特异性抑制剂对培养的贲门癌细胞预先处理，也可以抑制由缺氧诱导的乙酰肝素酶表达升高，上述结果表明：在体外，低氧诱导因子1α可以调节乙酰肝素酶的表达。目前虽无直接证据表明在体内乙酰肝素酶的表达就是受低氧诱导因子1α的调控，但是根据我们的体外实验结果和文献报道[6]，表明低氧诱导因子1α对肿瘤组织中乙酰肝素酶的表达，至少在部分程度上发挥重要的调控作用。因此，乙酰肝素酶在贲门癌组织中表达增高，并与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期密切相关，表明乙酰肝素酶可以作为预测贲门癌恶劣的生物学行为的一个指标。而乙酰肝素酶和低氧诱导因子1α在贲门癌中的共表达，初步提示在实体肿瘤，活化的低氧诱导因子1α可能上调乙酰肝素酶的表达，二者共同促进贲门癌的侵袭和转移。

[1]Vlodavsky I,Elkin M,Abboud-Jarrous G,et al.Heparanase: one molecule with multiple functions in cancer progression[J].Connect Tissue Res,2008,49(3):207-210.

[2]Li JP.Heparin,heparan sulfate and heparanase in cancer: remedy for metastasis?[J].Anticancer Agents Med Chem,2008,8(1):64-76.

[3]Hoffmann AC,Mori R,Vallbohmer D,et al.High expression of heparanase is significantly associated with dedifferentiation and lymph node metastasis in patients with pancreatic ductal adenocarcinomas and correlated to PDGFA and via HIF1a to HBEGF and Bfgf[J].J Gastrointest Surg,2008,12(10):1674-1682.

[4]Khan SA,Thomas HC,Davidson BR,et al.Cholangiocarcinoma[J].Lancet,2005,366(9493):1303-1314.

[5]Kizaka-Kondoh S,Inoue M,Harada H,et al.Tumor hypoxia: a target for selective cancer therapy[J].Cancer Sci,2003,94(12):1021-1028. [6]Wu W,Pan C,Yu H,et al.Heparanase expression in gallbladder carcinoma and its correlation to prognosis[J].J Gastroenterol Hepatol,2008,23(3):491-497.

R735.2

：B

：1671-8194（2013）03-0162-03