静态顶空－气相色谱法测定太苍止泻颗粒中挥发性组分

李雪岩

（河南省宜阳县中医院，洛阳471600）

传统中药的质量控制一直是一个难点，因为植物药中组分复杂，当组成成方后组分更为复杂，如何去评价复方中药的质量尤为困难，而目前对于中成药的质量评价主要是测定其中一种或者几种指标性成分，以液相色谱为主要方法，而中药指纹图谱的建立可以更加全面的控制药材以及成药的质量[1－2]，目前关于中成药指纹图谱大多以液相色谱作为其分析手段[3－4]，但是对于成药处方药材质量中代表性药材及饮片的质量控制，尤其是成药处方中存在含挥发性组分的药材及饮片，质量控制成为突出的问题，挥发性成分与药品包装以及放置有直接的关系，随着时间的推移，中成药的挥发性组分会发生变化，成药的有效性会降低，而在单一药材中则可以对挥发油进行总量检查，而成方中挥发性组分如何评价，如何快速对中成药中挥发性组分评价尚未报道。

顶空气相色谱，尤其静态顶空气相色谱[5]，样品不需处理，可以直接测定固体样品[5]，而顶空气相技术大部分在环保以及食品工业挥发性成分测定中广泛应用，制药行业只在原料药溶剂残留中应用，在中成药质量控制中尚未见报道，与传统的挥发油提取模式比，顶空气相色谱更能通过指纹峰的变化来判断成分的迁移与降解，对于判定含有挥发性药材的成药质量及有效期有很好的作用。

太苍止泻颗粒（豫药制字Z04030114）是宜阳县中医院的经验方，长期使用，疗效显著。其方由苍术，茯苓，车前子，乌梅肉，藿香等药味组成，主要用于治疗脾胃虚弱所致的大便清泄，饮食减少，食后腹胀，倦怠懒言，以及慢性肠炎，方中苍术，藿香挥发性组分含量是其主要起效成分，据文献报道苍术中主要组分为苍术素，苍术酮以及β－桉叶醇等[6]，而藿香中主要成分为百秋里醇与藿香醇等[7]，作者采用静态顶空气相对其进行指纹判别。

1 仪器与试药

安捷伦7890A气相色谱仪，7694E静态顶空进样器，FID检测器，DB－5石英毛细管色谱柱（30×0.25mm，025μm），Chemstation化学工作站藿香酮（批号：111822－201001）购自中国药品生物制品检定所，太苍止泻颗粒由洛阳市宜阳县中医院提供，批号（20110721，20111014，20111218）。

2 方法与结果

2.1 对照品配置 取藿香酮加同样体积水作为顶空溶剂，配置成10μg·mL－1对照品溶液置顶空瓶中密封。

2.2 样品前处理 直接称取6g样品置顶空瓶中，用压盖器密封，放置于顶空装置中。

2.3 气相色谱条件 进样口温度200℃，检测器温度为250℃，载气为N2，柱流量为1.5ml·min－1，分流模式：不分流，总流量为25ml·min－1，尾吹为22ml·min－1，程序升温，初始柱温为40℃，保持3min，以5℃·min－1升温至150℃，保持5min，以10℃·min－1升温至220℃，保持10min。

2.4 顶空条件 炉温120℃，定量管温度150℃，气体传输线温度170℃，样品在顶空仓内平衡15分钟，样品内加压时间0.3min，定量环充气时间0.2min，定量环平衡时间0.02min，进样时间0.3min。

图1 顶空气相色谱典型指纹图谱

图2 藿香酮对照品色谱图

图3 样品放置时间与峰总面积关系

2.5 指纹图谱的建立 按照2.3与2.4项下的色谱与顶空条件进样，通过优化色谱及顶空条件，得到11个特征峰，见图1.藿香酮对照品峰见图2.以不同批次重复出现并且面积大于总面积1%的峰作为色谱指标峰。

2.6 精密度实验 取同一批次（20110721）太苍止泻颗粒样品进行分析，连续进样5次，11个特征峰的保留时间RSD小于0.3%，相对峰面积RSD小于1.2%，表明方法精密度良好。

2.7 稳定性试验 取压盖器密封好的样品室温放置1h，5h，12h，18h，24h，48h置顶空进样器中按照顶空条件进样，其中11个峰相对保留时间RSD小于0.3%，相对峰面积RSD小于1.0%，表明样品在顶空瓶中室温条件下稳定。

2.8 重复性实验 取同一批号的（20110721）太苍止泻颗粒样品，按照2.2项下的制备方法，制备样品5份，分别进样，记录色谱图，结果11个特征峰峰面积RSD小于2.5%，相对保留时间RSD小于1.8%，结果表明重复性良好。

3 讨论

3.1 色谱条件的优化 因为常规顶空气相色谱分析固体中痕量组分，作者采用分流以及不分流模式分别测定，不分流模式要比分流模式灵敏度显著增加，故选用不分流模式作为色谱条件。

3.2 顶空条件优化 由于未采用固相微萃取技术[8]，常规顶空气相普通实验室十分普及，但是中成药中挥发性组分属于微量甚至为痕量组分，如何能保证灵敏度，作者一方面采用不分流进样模式，另外增加顶空进样时间来增加进样量，这样才能保证挥发性组分在气相色谱上都有响应，而FID检测器在pg级别碳氢化合物都有响应，故不需固相微萃取则对样品进行分析。

3.3 样品处理 作者比较了样品加水作为溶剂，与加水与NaCl作为顶空溶剂以及固体样品直接进样，结果以固体颗粒直接放置于顶空瓶进样响应最好，故以此为进样方式。

3.4 样品放置时间与含量关系 藿香以及苍术的贮藏时间都对其挥发油的含量有影响[9]，作者考察了样品打开包装在培养皿中放置时间对其峰总面积的影响，结果表明随着时间的增加，其峰面积总量逐渐的降低，也与文献报道药材的特征相似，而封装在塑料袋之内，但是其挥发性组分已经挥发于空气，加上原药材以及制剂制粒过程成损失，则成药的质量有效期为2年，作者认为极为不合理，应该缩短其有效期。

传统中成药制剂复方成分复杂，而作为药检部门若只依据单一组分来对药品整体质量进行控制并不能保证药品质量，而按照目前中成药质量标准，大部分依靠测定其中一种或多种组分来判定成药的质量，而实际中中药组分复杂，往往一个处方有十种或以上药材组成，每种药材中指标成分分别控制或者同时控制并不现实，也增加药品检验成本，而最近关于中药指纹图谱方面的研究日益增加[1，2]，而液相色谱作为现在样品含量测定方面主流方法，被广泛应用，但是如何在不同流动相，不同色谱柱上保证保留时间以及方法的可复制性，加上样品处理繁琐，成为困扰指纹图谱发展的首要因素，而气相色谱 “流动相”为单一的气体，在保留时间重现性上比液相色谱有更佳的表现，利用保留时间锁定与顶空进样的简便性，通过测定挥发性组分的指纹峰来判定成药质量标准，成为传统中药质量控制中有益的尝试。

[1]屠鹏飞.高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的探讨[J].中成药，2000，22（7）：516－516.

[2]谢培山.色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行策略[J].中药新药与临床药理，2001，12（3）：141－151.

[3]邓文红，黄书铭，邹祥旺，等.灵芝及其制剂的 HPLC指纹图谱的研究[J].药物分析杂志，2005，25（3）：352－355.

[4]魏清芳，王嘉林.木香顺气丸甲醇提取物的HPLC指纹图谱[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（8）：110－115.

[5]王永华.顶空气相色谱分析原理与技术[J].中国环境监测，2006，22（2）：7－13.

[6]傅梅红，王金华，张颖，等.气相色谱法测定苍术中有效成分β－桉叶醇含量的方法学研究[J].中国中药杂志，2000，25（11）：680－680.

[7]张强，李章万，朱江粤.广藿香挥发油成分的分析[J].华西药学杂志，1996，11（4）：249－250.

[8]曾栋，陈波，姚守拙.顶空固相微萃取－气相色谱－质谱联用分析干柴胡药材中有机挥发物[J].分析化学，2005，4.

[9]罗集鹏，刘玉萍，冯毅凡，等.广藿香的两个化学型及产地与采收期对其挥发油成分的影响[J].药学学报，2003，38（4）：307－310.