探讨TNF-α和CD44在恶性脑瘤患者体内表达的意义

梁绍栋 李洪哲 庄亚严

探讨TNF-α和CD44在恶性脑瘤患者体内表达的意义

梁绍栋 李洪哲 庄亚严

目的探讨TNF-α和CD44 mRNA在恶性脑瘤组织中的表达及其意义。方法采用酶联免疫吸附试验法和逆转录聚合酶链反应法，对恶性脑瘤中恶性胶质瘤组织标本各30例内TNF-α和CD44 mRNA含量进行半定量检测。结果随着脑肿瘤恶性程度的增高，TNF-α和CD44在瘤组织的表达含量亦有升高态势，其中以胚胎性肿瘤最高，混合性胶质瘤次之。结论恶性脑瘤组织内TNF-α和CD44mRNA表达失衡，两者的含量均有大幅上升趋势，有望此项研究可以作为临床确诊良、恶性脑瘤的重要理论依据。

TNF-α；恶性脑瘤；CD44

恶性脑肿瘤是脑外科常见的肿瘤性疾病，近年来随着饮食、环境、电离辐射等诸多因素的影响，患恶性脑肿瘤的人数有明显升高的态势，但往往由于诊断及时而耽误了最佳的治疗时期，从而提高了该疾病的死亡率。TNF-α亦称为肿瘤坏死因子-α，其可以通过某种生物学途径杀死肿瘤细胞[1]，是目前发现生物因子中对肿瘤细胞的作用最明显。有资料报道，在恶性脑瘤发生的同时，体内不同组织包括血液、体液中其含量有明显升高趋势。CD44能够促进肿瘤细胞粘附、转移和播散。更有许多文献报道，其在恶性脑肿瘤中表达率很高[2]。因此，鉴于在诊断和鉴别诊断方面的缺点，我院研究人员及时准确地搜寻了临床病例，针对不同肿瘤特点进行综合检测和分析，以找到一种最简单准确的确诊方法。

1 材料与方法

1.1 标本取材均由牡丹江市红旗医院脑外科提供，取恶性脑瘤中恶性胶质瘤组织标本各30例，在手术中分别获取相应的组织标本，于液氮中速冻10 min后置于-70℃冰箱保存待测。

1.2 试剂TNF-αELISA试剂盒和CD44逆转录试剂盒均由Fermentas公司提供。

1.3 TNF-α测定严格按照ELISA试剂盒说明进行操作。

1.4 按照实验室常规方法提取CD44总RNA。采用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分离RNA，溴化乙锭(EB)染色；采用紫外分光光度法定量。

1.5 进行cDNA合成反应，采用PCR反应体系，之后取PCR反应液进行电泳分离，然后凝胶成像。Imagetool 3.5软件计算CD44mRNA//β-actin mRNA。

1.6 统计学方法实验结果用SPSS 18.0软件处理，各组数据由样本比较采用方差比较。以P＜0.01为有显著差异性，具有统计学意义。

2 结果

TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常组织和恶性肿瘤中的表达量，见表1、图1、图2。

表1 TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常组织和恶性肿瘤中的表达量(±s)

表1 TNF-α和CD44/β-actin mRNA在正常组织和恶性肿瘤中的表达量(±s)

注：*与其余的胶质瘤相比较，P＜0.01有显著差异性

标本来源 例数 TNF-α(μg/ml) CD44/β-actin混合性胶质瘤 30 2.78±0.23*7.88±0.42*胚胎性肿瘤 30 3.65±0.56*8.79±0.16*星形细胞性肿瘤 30 2.45±0.35 6.35±0.32少枝胶质性肿瘤 30 1.56±0.12 5.22±0.65

图1 CD44 RT-PCR电泳图

图2 β-actin RT-PCR电泳图

注：1混合性胶质瘤，2胚胎性肿瘤，3星形细胞性肿瘤，4少枝胶质性肿瘤

3 讨论

本实验应用两种不同的实验方法，分别测得TNF-α含量和CD44mRNA的相对表达量，在两种常见的恶性脑肿瘤中均有大幅升高态势，TNF-α其杀伤肿瘤细胞的机制各种资料介绍不够详尽说，但其却有阻止肿瘤生长和迁移的功能。其中CD44蛋白在生物体内具有多种重要的生物学功能，它即参与器官发育，也参与多种免疫功能以及造血功能；一旦CD44如果出现基因突变，就会使机体出现相应的病理特征和表现。CD44分子参与细胞和细胞之间及基质间的相互作用。另外，在调控肿瘤细胞生长方面，以及生存、分化和迁移中，CD44都发挥着十分重要作用[3]。本研究结果表明，在恶性脑瘤患者中，TNF-α和CD44mRNA含量都有升高态势，其与肿瘤的恶性程度呈正相关。进一步提示了TNF-α和CD44高表达和脑肿瘤的恶性程度有很大关系，其具体机制还有待进一步探究，希望本研究能够为临床提供有利的诊断依据。

[1] Donaghue KC, Chiarelli F, Trotta D, et al. Microvascular and macrovascular complications associated with diabetes in children and adolescents[J]. Pediatr Diabetes,2009,10(12)：195-203.

[2] Orian-Rousseau V. CD44, a therapeutic target for metastasising tumours[J]. European J Cancer, 2010,46(7)：1271-1277.

[3] Kerbel RS. Tumor angiogenesis： past, present and thenear future[J]. Carcinogenesis, 2000,21(4)：505-515.

R739.41

A

1673-5846(2013)04-0282-02

黑龙江牡丹江医学院红旗医院，黑龙江牡丹江 157011

梁绍栋（1978-），男，毕业于哈尔滨医科大学第一附属医院，主治医师，医学硕士，讲师，现工作于牡丹江医学院附属红旗医院。