HPLC法对康复新液中肌苷的含量测定

刘向芳 刘 幸 王 璐 刘安惠

云南省昆明市第三人民医院药剂科，云南 昆明 650041

HPLC法对康复新液中肌苷的含量测定

刘向芳 刘 幸 王 璐 刘安惠

云南省昆明市第三人民医院药剂科，云南 昆明 650041

目的：建立康复新液中肌苷含量测定的HPLC测定法。方法：采用VP－ODS色谱柱，以甲醇－水（5∶95）为流动相；检测波长：248nm。结果：肌苷在4～16g·m l－1浓度范围线性关系良好，平均回收率（n＝9）为97.43%，RSD＝1.70%。结论：测定方法简便、结果准确，可作为提高康复新液质量标准的检测项目。

康复新液；肌苷；含量测定；高效液相色谱法

康复新液是用美洲大蠊提取物制成的液体制剂，具有通利血脉，养阴生肌之功效，主要含氨基酸、嘧啶碱类等物质，其中肌苷是康复新液中已知的主要成分之一。原标准［1］只收载康复新液中总氨基酸含量测定项，本文采用高效液相色谱法对其肌苷进行定量检测，对提高本品质量标准进行了探讨，测定方法简便、结果准确，可作为提高康复新液质量标准的检测项目。

1 仪器与试药

岛津LC－2010A高效液相色谱仪：LC－10ATvp紫外检测器：Class－vp色谱工作站；

肌苷对照品（含量：99.2%，中国药品生物制品检定所），批号：140669－200401；

康复新液（规格：100m l／瓶昆明赛诺制药有限公司研究所制备），批号：12091207；

甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：VP－ODS柱（4.6mm×150mm，5um）；甲醇－水（5：95）为流动相；流速：0.8 m l／min；检测波长为248nm；进样量10μl；柱温：30℃。

2.2 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取肌苷对照品适量，精密称定，加水制成每1m l含0.01mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取本品20m l，加三氯甲烷12m l，精密加入1mol／l盐酸3.4m l，搅拌至析出晶体完全溶解，置分液漏斗中，弃去三氯甲烷，再分别用三氯甲烷8ml重复洗涤二次，弃去三氯甲烷，精密量取2ml，置10m l量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3 方法学考察

3.1 专属性试验 按处方量称取不含美洲大蠊提取物的各种原辅料，制备空白溶液，按供试品溶液的制备方法制备空白对照溶液。取对照品溶液、空白样品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果显示对照品、供试品溶液图谱的肌苷峰，保留时间约7.50，空白对照溶液图谱在相应位置没有吸收峰（见色谱图1），表明专属性良好。

3.2 线性关系考察 分别精密量取对照品储备液（浓度：0.1008mg／m l）0.4、0.7、1、1.3、1.6m l置10m l量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，分别吸取10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，以峰面积为纵坐标，以进样量（μg／m l）为横坐标，作线性回归，回归方程为：Y＝31838X－1195.3（r＝0.9995），结果显示肌苷进样量在4～16μg／m l范围呈良好的线性关系。

3.3 精密度试验 取同一肌苷对照品溶液（0.1008mg／m l），连续进样测定6次，以肌苷的峰面积计算，RSD＝0.24%。

3.4 重复性试验 取同一批号样品20 m l，按供试品溶液制备方法制备6批供试品溶液，分别测定含量，以测得样品含量计算，RSD＝0.59%（n＝6），表明本方法重复性好。

3.5 溶液稳定性试验 取同一份供试品溶液样品，按上述检测方法，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h进样测定。结果12小时内测得峰面积的RSD值为1.96%（n＝6），表明供试品溶液中肌苷在室温条件下放置12小时稳定。

3.6 加样回收率试验 精密量取已知含量为0.05215 m m l的样品10m l共9份，分为三组，每组分别精密加入含量为0.1008mg／m l的对照品贮备液4.5 m l、6.0 m l、7.5m l，加1mol／L的盐酸1.7m l，照供试品溶液的制备方法制备样品，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

3.7 样品含量测定 取10个批次的样品，按“2.1.2”项下方法制备溶液，精密吸取对照品溶液和样品溶液各10μl分别注入高效液相色谱仪，样品含量结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝10）

4 讨论

4.1 色谱条件的确定 选择248nm为检测波长，以甲醇－水（10：90）为流动相，流速1.0m l／m in，对照品的保留时间仅3.592；流动相比例调整为甲醇－水（5：95），流速0.8 m l／min，对照品保留时间7.733，理论塔板数6770，符合检测要求。

4.2 供试品溶液制备 康复新液中含防腐剂苯甲酸钠，如果样品不经处理，对肌苷含量测定会带来很大干扰，关键点在于除去溶液中的苯甲酸钠。苯甲酸可溶于三氯甲烷，苯甲酸钠在酸性条件下可转化为苯甲酸；而肌苷不溶于三氯甲烷，易溶于稀盐酸中［2］，根据这些特性，加入适量盐酸，就可把康复新液中的苯甲酸钠转化成苯甲酸溶于三氯甲烷中而分离出来。通过多次考察试验，康复新液20m l，加1mol／L的盐酸3.4ml，分别用三氯甲烷12ml、8ml、8ml萃取洗涤三次即可。

4.3 方法学考察 该方法具有精密度高，回收率、专属性好，符合《中国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法的各项要求，可作为提高康复新液质量标准的检测项目。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂第十九册［M］.北京：化学工业出版社，1998：176.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：277.

HPLC method for the determ ination of inosine of kangfuxin Liquid

LIU Xiang-fang，LIU Xing，WANG Lu，LIU An-hui Third people's hospital of Kunming，Kunmin 650041

Objective：to establish the determination of inosine content of Kangfuxin Liquid in the determination of HPLC. M ethods：using VP－ODScolumn，methanolwater（5：95）asmobile phase，the detection wavelength：248 nm.Resu lts：inosine in 416g·m l－1concenentration range good linear relationship，the average rate of recovery was 97.43%，RSD＝1.70%（n＝9）.Conclusion：themethod is simp le，accurate，can be used to improve the detection of project quality standard Kangfuxin liquid.

Kangfuxin Liquid；Inosine；Content determination；HPLC

R927.2

A

1007－8517（2013）21－0009－02

2013.09.27）