回阳玉龙膏对乳腺增生大鼠的治疗作用

彭成浩， 刘国文， 杨俊省

乳腺增生症是最常见的乳腺疾病之一，常见不同程度的乳房疼痛以及肿块，其发病率占育龄妇女的80% ～90%，占全部乳房疾病的75%，癌变率2% ～4%，其高发人群为30～45岁的女性［1］。目前乳腺增生症的治疗手段主要分三大类:西药、中药和物理治疗。西药多选用激素或受体阻断剂，虽有疗效，但往往使激素代谢更加紊乱［2］。物理治疗多采用磁疗，取得了较可靠的疗效，但起效相对较慢，且理疗的实施需患者在医院才能进行［3］，因此其推广受到了一定限制。中药治疗乳腺增生症有其独到之处，且疗效确切，为目前治疗的主要手段［4-5］。本研究从明代陈实功所著的《外科正宗》中选取处方，将草乌、干姜、赤芍、白芷、南星、肉桂温阳药研制成回阳玉龙膏，考察其对乳腺增生大鼠的治疗作用，为其临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雌性大鼠19只，清洁级，体重(210±10)g，75～85日龄。购于南华大学实验动物部(动物合格证号:SCXK湘2004-0010)。实验鼠体重和周龄统计学上无差异，按标准饮食，分笼饲养于相同的环境中。

1.2 药物及试剂 回阳玉龙膏药物组成:草乌、干姜各30 g，赤芍、白芷、南星各10 g，肉桂5 g。雌二醇注射液以及雌二醇、孕酮、泌乳素放免试剂盒均购自天津金耀氨基酸制药有限公司，黄体酮注射液购自浙江仙琚制药股份有限公司。

1.3 实验方法 (1)乳腺增生症模型的建立:19只SD雌性大鼠后肢内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg，1次/天，连续25天;后肌肉注射黄体酮5 mg/kg，1次/天，连续5 天［6］。随机处死 5 只大鼠，检验造模成功率。(2)治疗方法:将剩余14只大鼠按干预方法不同采取盲法随机分为对照组(A组)及中药组(B组)。参考正常SD雌性大鼠胸围、腹围平均值，设计治疗胸带。胸带呈长方形，自然长度16 cm，宽6 cm，拉紧后最短可达8 cm，由内袋、外袋、扣带处三部分组成。扣带区位于两端，由两层棉布组成，内缝有3条长约3 cm的贴片。A组:仅用空白胸带包裹，未做其他处理。B组根据人体体表面积计算法及许文生公式计算得出实验大鼠的中药用量:草乌、干姜各 0.6 g;赤芍、白芷、南星各0.2 g，肉桂0.1 g，研细末混匀黄酒调匀放入治疗胸带内侧，包裹给药，每天定时换药，连续给药30天。(3)指标测定:于第31天测量两组大鼠第2对乳头的高度及直径，随后将动物经3%水合氯醛300 mg/kg腹腔麻醉，后切取第2对完整的乳房待病理检测用。随即处死动物，从心脏中抽取5 mL血液作雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)及肝肾功能检查。切取大鼠心脏，将其与上述切除的第2对乳房分别用10%的福尔马林液固定，石蜡包埋切片，HE染色，在光镜下观察，做病理切片分析。(4)乳房大体形态判定标准为:改变不明显者为(－)，单纯肿大者为(+)，红肿大者为(++)。乳头形态学判定标准为:无变化，光镜下基本恢复到正常乳腺结构为(－);乳头大，光镜下可见结缔组织增生为(+);乳头肿大，光镜下可见结缔组织及腺导管增生为(++);乳头红、肿、大，光镜下可见结缔组织成纤维细胞增生，腺导管增生可见数目增加，管腔扩大，腺导管上皮增生为(+++)。乳腺增生病理程度分为4级:乳腺小叶不增生，腺体数量极少，腺泡不扩张，处于静止状态(－);乳腺小叶无明显增生，个别腺泡有轻度增生，无扩张(+);乳腺小叶大部分增生，部分腺泡明显扩张(++);乳腺小叶明显增生，腺泡处于极度扩张状态，腺上皮细胞呈扁平状，腺泡内及导管内有大量的分泌物(+++)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析处理。计量资料数据均以±s描述数据的集中和离散趋势，组间比较采用t检验;计数资料采用χ2检验。检验水准:以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 造模结果 造模后随机处死5只大鼠，病理检测，确定造模均获成功。观察其余大鼠乳房大体及乳头形态，确定本组造模成功率为100%。

2.2 乳房形态对比 肉眼观察A组大鼠乳头突出皮毛，脱毛后，可见乳头增大、充血竖起，颜色暗红，触之较硬;B组可见大鼠乳头较前缩小，成米粒状，稍隆起，颜色稍红润，触之较软。两组大鼠第2对乳头的直径和高度见表1，结果显示A组的乳头直径和高度明显大于B组，两者相比差异有统计学意义(均P＜0.05)。乳房大体形态比较:A组(－)6只，(+)1只，(++)0只;B组(－)0只，(+)2只，(++)5只;两组相比B组乳房大体形态可见明显好转。乳头形态学比较:A组(－)0只，(+)0只，(++)2只，(+++)5只;B组(－)3只，(+)4只，(++)0只，(+++)0只。与B组比较，A组大鼠乳腺导管上皮细胞增生明显，管腔明显扩张有分泌物，小叶明显增多，腺泡增生明显;B、C、D、E组大鼠小叶增大不明显，腺泡腔和腺导管腔少数扩张，分泌物减少。形态学上B组可见明显好转。

表1 各组大鼠乳头高度以及直径比较 ± s，n=7)

表1 各组大鼠乳头高度以及直径比较 ± s，n=7)

组别 乳头高度(mm) 乳头直径(mm)A组2.35 ±0.18 1.86 ±0.05 B 组 2.08 ±0.11 1.52 ±0.06 t值 2.44 3.67 P值0.03 0.02

2.3 乳腺增生病理对比 病理切片示，A组大鼠乳腺导管上皮细胞增生明显，管腔明显扩张，有分泌物，小叶明显增多，腺泡增生明显(图1);B组大鼠小叶增大不明显，腺泡腔和腺导管腔少数扩张，分泌物减少(图2)。两组的小叶数、腺泡数、腺泡扩张程度及上皮增生情况相比，均有好转，具体见表2。

2.4 两组生殖激素对比 结果见表3。B组与A组比较，血中E2、PRL水平下降，P水平升高，差异有统计学意义(均P＜0.05)。

2.5 两组肝肾及心肌毒性对比 肝肾毒性比较结果见表4。结果表明，两组的血清肌酐(BUN)、尿素氮(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及总胆红素(TBIL)水平差异无统计学意义(均 P＞0.05)。心肌细胞病理切片(图3、4)显示，两组心肌纤维均排列整齐，无心肌纤维破坏，细胞质丰富均匀，细胞间隙正常，未见水肿。

表2 两组乳腺病理组织学比较

表3 两组生殖激素的比较±s，n=7)

表3 两组生殖激素的比较±s，n=7)

组别 E2(pg/mL) P(ng/mL) PRL(ng/mL)A 组 19.97 ±1.22 16.65 ±0.77 6.59 ±0.99 B 组 13.69 ±0.79 27.80 ±1.02 5.44 ±0.93 t值 5.38 7.75 2.13 P 值 0.00 0.00 0.03

表4 肝、肾毒性的比较±s，n=7)

表4 肝、肾毒性的比较±s，n=7)

组别 BUN(mmol/L)TBIL(μmol/L)A 组 5.38 ±0.48 34.6 ±3.1 46.00 ±11.63 162.55 ±25.05 3.969 ±1.33 B 组 5.29 ±0.53 34.8 ±3.9 47.54 ±10.17 161.84 ±23.85 3.859 ±1.66 t值 1.29 1.08 1.22 1.05 1.16 P 值 0.73 0.91 0.79 0.96 0.89 Cr(μmol/L)ALT(U/L)ALT(U/L)

3 讨论

乳腺增生是乳房常见良性增生性疾病，以乳房疼痛和肿块为主要表现，且随月经周期或情绪波动呈现周期性变化。疼痛一般以胀痛为主，亦有刺痛、牵拉痛或隐痛，可累及一侧或双侧乳房。疼痛常呈周期性，即月经前加重，月经后减轻或消失。肿块边界不甚清楚，质地中等或韧硬不坚，且常有触痛。乳腺增生症属于中医“乳癖”的范畴，中医药治疗以活血化瘀、化痰散结为本。然而单纯口服中药复方汤剂疗效缓慢，服药量大，一般患者难以坚持。回阳玉龙膏出自明代陈实功所著外科专著《外科正宗》，有温阳解凝、活血化痰之功;主治阳虚寒凝之局部肿硬。将其制备成膏剂，局部给药可避免服用中药的缺点，因此，本研究构建大鼠乳腺增生的模型，考察模型大鼠局部应用回阳玉龙膏的疗效。

乳腺组织是性腺激素的靶器官，乳腺的生理、病理改变与激素的调节关系十分密切。从发生发育，增殖与复旧的交替，到最终腺体退化，这一系列复杂的变化，都是在下丘脑－垂体－卵巢轴及其他内分泌激素的综合作用下发生的。现代医学认为，乳腺增生病与机体雌激素水平过高而黄体酮拮抗不足有着密切的关系。雌激素的过度刺激可使乳腺上皮细胞及间质细胞增生，使结缔组织水、钠储留增加，进而导致小叶间水肿，雌孕激素平衡失调，使雌激素长期刺激乳腺组织，而无孕激素的节制和保护作用是导致乳腺增生的重要原因［2，6］。

本研究模拟人类乳腺增生症的发病机制，使用苯甲酸雌二醇和黄体酮干预，成功构建了大鼠乳腺增生模型。模型大鼠的乳头高度、乳房直径及乳腺组织形态均发生变化。经过回阳玉龙膏干预后结果显示，与对照组比较，干预组大鼠乳头高度以及直径明显缩小，且差异具有统计学意义，此结果可证明，回阳玉龙膏可以使大鼠乳腺增生程度好转，对乳腺增生症具有较好的治疗作用。此外，通过对两组大鼠的雌激素水平检测发现:与对照组比较，回阳玉龙膏能够使雌二醇 (E2)，泌乳素(PRL)均明显降低，而孕酮(P)明显升高，差异具有统计学意义，这说明回阳玉龙膏可以影响乳腺增生大鼠的雌激素水平，此可能是回阳玉龙膏治疗乳腺增生的机制之一。与此同时，本研究又对大鼠的肝、肾功能和心肌细胞进行了生化及病理检测，结果显示使用回阳玉龙膏后，模型大鼠的肝、肾功能无明显变化，无心肌纤维的破坏，细胞间隙正常，未见水肿。由此可见，回阳玉龙膏对于乳腺增生的大鼠不仅具治疗作用，且较为安全，但能否用于临床治疗乳腺增生，尚需进一步的临床研究。

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［5］Liu XY，Fang H，Yang ZG.Matrine inhibits invasiveness and metastasis of human malignant melanoma cell line A375 in vitro［J］.Int J Der matol，2008，47(5):448-456.

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