化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物检测的方法学验证

侯吉鹏

摘要：目的：建立化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物检测的方法学验证资料。方法：采用C18色谱柱250mm×4.6mm，5μm色谱柱，检测波长为280nm，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，流动相：A相为甲醇B相为水进行梯度洗脱，检测器为紫外检测器、二极管阵列检测器。结果：在选定色谱条件下，杂质峰与各主药峰完全分离，在一定范围内线性关系良好，邻苯二甲酸酯类化合物平均回收率高。结论：本法简便、准确，专属性好，可用于化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物的含量测定。

关键词：邻苯二甲酸酯类化合物方法学验证

《化妆品卫生规范》（2007年版）中对化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物的使用要求，具体如下：邻苯二甲酸二甲酯，原料标准见于《国际化妆品原料标准中文名称目录》3345号；邻苯二甲酸二乙酯，原料标准见于《国际化妆品原料标准中文名称目录》3084号；邻苯二甲酸二正丁酯，规定化妆品禁用组分见于《化妆品卫生规范》（2007年版）表2（1）411号，原料标准见于《国际化妆品原料标准中文名称目录》2985号；邻苯二甲酸二正戊酯，规定化妆品禁用组分见于《化妆品卫生规范》（2007年版）表2（1）15号；邻苯二甲酸丁基苄酯，规定化妆品禁用组分见于《化妆品卫生规范》（2007年版）表2（1）281号，原料标准见于《国际化妆品原料标准中文名称目录》1265号；邻苯二甲酸双（2-乙基己基）酯，规定化妆品禁用组分见于《化妆品卫生规范》（2007年版）表2（1）289号，原料标准见于《国际化妆品原料标准中文名称目录》3076号。本试验采用高效液相色谱法对化妆品中去屑剂的含量进行方法学验证。

1 仪器材料

LC-2010AHT高效液相色谱仪、Waterse2695高效液相色谱仪；超声波清洗器；高速离心机；天平：BS210S电子天平为BT25S电子天平；对照品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP），邻苯二甲酸二乙酯(DEP)，邻苯二甲酸二正丁酯(DBP），邻苯二甲酸二正戊酯(DAP），邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP），邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)，邻苯二甲酸双（2-乙基己基）酯(DEHP)，均来自德国Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈为色谱纯。

2 色谱条件

检测器：紫外检测器、二极管阵列检测器；检测波长：280nm。色谱柱：C18色谱柱250mm×4.6mm，5μm。流速：1.0 ml/min。柱温：25℃。流动相：A相：甲醇；B相：水梯度洗脱，洗脱程序见下表1。

■

3 方法学验证内容

3.1 混合标准溶液的制备 分别准确称取邻苯二甲酸二甲酯0.0949g 、邻苯二甲酸二乙酯0.1029g、邻苯二甲酸二正丁酯0.0959、邻苯二甲酸二正戊酯0.0959、邻苯二甲酸丁基苄酯0.0996 、邻苯二甲酸二环己酯0.1029、邻苯二甲酸双二异辛酯0.1010、邻苯二甲酸二正辛酯0.1072 ，至100ml容量瓶中，加甲醇，振摇，溶解，使完全溶解后定容至刻度。

3.2 系统适用性试验 取标准曲线中浓度为0.1mg/ml的溶液，按上述色谱条件进行测定，理论塔板数如表2。结果各组分峰形良好，分离度均符合要求。

■

3.3 线性关系考察 精密量取混合标准溶液0ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml，分别置于10ml具塞比色管中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，分别取5μl注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，并绘制标准曲线。

4 供试品溶液的制备及检测

4.1 取样 刮去表面层后，取出所需样品，立即封闭容器。

4.2 溶液的配制 准确称取样品0.5g于50ml具塞比色管中，加入乙腈：甲醇=95：5的混合溶液至刻度，振摇，常温超声提取40min，离心，取上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液备用。

4.3 溶液的检测 精密量取上述溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法以峰面积计算，即得。

由结果得，样品中未检测出去屑剂。

5 回收率试验

准确称取样品0.5g六份，分别置于50ml具塞比色管中，精密加入混合标准溶液10ml、10ml、20ml、20ml、50ml、50ml，加入乙腈：甲醇=95：5的混合溶液至刻度，振摇，常温超声提取40min，离心，取上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液备用。精密量取上述溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法以峰面积计算，即得。结果表明该方法回收率良好。

■

■

■

■

■

■

■

■

6 精密度试验

取上述回收率中含DEP为716.7μg/ml的溶液连续进样6次，记录峰面积。结果显示DMP的RSD为0.8%，DEP的RSD为0.9%，BBP的RSD为1.9%，DAP的RSD为0.8%，DBP的RSD为1.6%，DCHP的RSD为1.9%，DEHP的RSD为1.1%，DOP的RSD为0.6%。结果表明该方法精密度良好。

7 溶液稳定性试验

取上述回收率中含DEP716.7μg/ml的溶液，在室温下放置12h，在0h、2h、4h、8h、12h按照测定方法分别测定，结果如下表，结果表明溶液在12小时内稳定。

8 定量限和检出限试验

取上述回收率中含DEP102.4μg/ml的溶液，逐级稀释，照上述方法测定，当色谱峰高是基线的三倍时，可得DMP检出限为：0.5ng，检出浓度为1μg/g，DEP检出限为：0.5ng，检出浓度为1μg/g，BBP检出限为：3ng，检出浓度为5μg/g，DBP检出限为：3ng，检出浓度为5μg/g， DAP检出限为：38ng，检出浓度为76μg/g，DCHP检出限为：40ng，检出浓度为80μg/g，DEHP检出限为：5ng，检出浓度为10μg/g，DOP检出限为：5ng，检出浓度为10μg/g，由此可得DMP定量限为：2ng，最低浓度为4μg/g，DEP定量限为：2ng，最低浓度为4μg/g，BBP定量限为：10ng，最低浓度为20μg/g，DBP定量限为：10ng，最低浓度为20μg/g，DAP定量限为：127ng，最低浓度为245μg/g，DCHP定量限为：133ng，最低浓度为267μg/g，DEH定量限为：17ng，最低浓度为33μg/g，DOPMPD定量限为：17ng，最低浓度为33μg/g。

参考文献：

[1]赵雅辉，王小逸，林兴桃，客慧明，赵靖强，任海荣.邻苯二甲酸酯类化合物的体内代谢及毒性研究进展[J].环境与健康杂志，2010(02).

[2]陈珠灵，黄瑜奎，王桂美，陈飞.化妆品中邻苯二甲酸酯类环境激素检测方法研究[J].环境科学与技术，2007(04).

[3]刘振华，丁卓平，杨勇，杨小燕，金小兵.PVC玩具中邻苯二甲酸酯类增塑剂分析方法初探[J].现代科学仪器，2007(04).