西印度瓜幼胚超微量DNA提取及甜瓜远缘杂交早期SSR鉴定

王吉明　马双武　尚建立等

摘 要： 因存在巨大的生殖障碍，甜瓜远缘杂交十分困难，因而进行甜瓜远缘杂交生殖学研究对于克服甜瓜远缘杂交障碍具有重要意义。采用Chelex-100法对西印度瓜自交授粉后3 d的幼胚进行了单胚DNA提取，结果Chelex-100法对质量低至0.3 mg的单个幼胚可有效提取DNA，SSR扩增分析表明该方法可满足SSR分析要求；对西印度瓜和甜瓜杂交后的幼胚进行了Chelex-100法DNA提取及SSR分析，结果在幼胚DNA中稳定地扩增出父本SSR特征带，表明西印度瓜和甜瓜在授粉后不久已成功地完成了杂交。研究为甜瓜远缘杂交障碍的克服提供了理论依据。

关键词： 甜瓜； 西印度瓜； 远缘杂交； DNA提取

甜瓜属（Cucumis L.）植物除常见的栽培作物甜瓜和黄瓜外，还存在30多种野生近缘植物，其中某些野生近缘植物具有栽培种所不具有的抗南方根结线虫、抗病毒病等优异性状[1]，因此自上世纪中期以来，国内外就开展了甜瓜远缘杂交研究，试图将种外抗性引入栽培种中，但由于存在较大的生殖障碍，在甜瓜属栽培作物中，仅黄瓜作物取得远缘杂交成功[2]，而甜瓜远缘杂交至今未有成功的报道[3]。对于甜瓜远缘杂交障碍形成时期，前人曾从组织解剖学角度进行了研究，发现大多数杂交组合花粉管无法到达胚珠并完成受精，表现为受精前障碍，仅少数杂交组合可完成受精，表现为受精后障碍[4]。植物远缘杂交障碍较为复杂，有的远缘杂交虽然花粉管能够到达胚珠完成受精并启动合子或胚发育，但因存假配生殖和染色体消除等异常的染色体行为[5]，导致父本DNA不能传递给后代，未完成真正意义上的杂交，因而从遗传上判断幼胚杂交真实性、明确杂交障碍形成时期对于采取适当技术措施克服受精后障碍、进而获得杂交后代具有重要参考价值。本研究利用种间亲和性较好的对甜瓜与西印度瓜进行杂交，并对杂交后的幼胚进行SSR分析以判断杂交的真实性，以期为甜瓜远缘杂交障碍的克服提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

西印度瓜（Cucumis anguria），甜瓜野生近