端粒酶活性、PCNA在乳腺癌中的表达及其临床意义

丁敏等

摘 要 目的：探讨端粒酶活性和增殖细胞核抗原在乳腺癌中的表达关系及联合检测对乳腺癌早期诊断及预后评估的临床意义。方法：采用TRAP-PCR-ELISA与S-P法检测乳腺癌组织81例，乳腺癌癌旁组织37例，乳腺良性病变组织11例的端粒酶活性和增殖细胞核抗原的表达。结果：81例乳腺癌组织、37例乳腺癌癌旁组织中端粒酶表达阳性率分别为74.1%和10.8%，P<0.05差异有统计学意义，11例良性病变组织中未测出端粒酶活性；腋窝淋巴结转移、组织学分型与端粒酶阳性表达率，P>0.05差异无统计学意义。81例乳腺癌组织PCNA的表达率71.6%。淋巴結转移组PCNA阳性表达率较无淋巴结转移组增高（P<0.05），且呈正相关；端粒酶活性与PCNA表达的一致率92.24%，呈正相关。结论：端粒酶活性与PCNA联合检测，在乳腺癌早期诊断及预后评估方面有重要的临床意义。

关键词 端粒酶 增殖细胞核抗原 乳腺癌

目前在妇女的恶性肿瘤中，乳腺癌的发病率已高居第1位[1]。随着分子生物学技术的发展，端粒酶做为新的肿瘤标志物和抗癌靶点，逐渐成为乳腺癌研究的新热点，增殖细胞核抗原（PCNA）用于肺癌的研究较多，近年也用于乳腺癌的研究，但两者联合研究的文章较少，本文对81例乳腺癌组织，37例乳腺癌癌旁组织及11例乳腺良性病变组织的端粒酶活性及与增殖细胞核抗原表达的关系通过检测后进行探讨，现报告如下。

资料与方法

2010年1月～2011年6月手术切除标本129例，乳腺癌及良性病变组织均经病理确诊，均为女性，年龄30～72岁，其中，乳腺良性病变组织11例，乳腺癌旁（离肿瘤距离>2cm）组织37例，乳腺癌81例，术前均未做放化疗。

方法：端粒酶活性检测：检测试剂盒为端粒酶活性检测试剂盒。方法如下：取细胞105～106加裂解液20μl混匀后冰浴30分钟，1600r/分4℃离心20分钟，取上清175μl置-80℃冰箱备用。提取液1～2μl内依次加入TRAP PCR扩增液25μl；无菌DEPC补足至50μl混匀；再按以下条件进行PCR扩增反应：预变性94℃ 5分钟，变性95℃ 30秒，退火55℃ 30秒，延伸72℃ 90秒，循环30次最后延伸72℃ 10分钟。取5μl PCR产物加20μl变性试剂混匀放置10分钟后加入225μl杂交液混匀再取出100μl移入包被于抗地高辛的酶标板内室温下作用2小时，加入抗地高辛过氧化物酶，与底物作用30分钟终止反应，用酶标仪测定波长450nm的吸光度值。

PCNA检测：采用免疫组织化学S-P法染色。操作方法照试剂盒说明书：经10%福尔马林固定并石蜡包埋。4μm连续切片。二甲苯脱蜡、梯度酒精至水化后进行5～8分钟热处理，过氧化物酶阻断血清封闭，分别加Ⅰ抗60分钟及Ⅱ抗Ⅲ抗15分钟，均PBS液洗2分钟/3次；DAB显色5～10分钟，苏木素复染5～10秒后脱水。透明胶封片。

结果判定：端粒酶以吸收度>0.20即为阳性。PCNA以细胞核内出现清晰的棕色或棕黄色颗粒即为阳性，每例切片最少观察5个高倍视野。

统计学处理：本次研究所得数据均由SPSS13.0软件统计包进行统计学处理，两组计数资料或疗效比较采用X2检验，组间对比采用t检验，以P<0.05有统计学意义。

结 果

端粒酶阳性表达率与乳腺癌组织分型及淋巴结转移之间的关系，见表1。

PCNA阳性表达率与乳腺癌组织分型及淋巴结转移之间的关系，见表2。

讨 论

端粒酶是细胞中负责端粒延长的一种酶，它可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂克隆的次数增加。其在正常人体组织中被抑制，在肿瘤中被重新激活，使癌症得以发展恶性转化[2]。

本研究结果显示，乳腺癌组织中端粒酶阳性表达率较乳腺癌癌旁组织及良性病变组织中显著增高，P<0.05差异有统计意义。而乳腺良性病变组织中无端粒酶活性的表达。端粒酶阳性表达与腋窝淋巴结转移及组织类型无关系，与俞乔报道的基本一致[3]，与高金波[4]。