湖州地区蝉花中小极性组分的气质联用分析

欧晓阳，许闪闪，袁 强

(1.浙江中医药大学药学院，杭州 310053；2.浙江中医药大学附属第二医院，杭州 310005)

蝉花[1]为麦角菌科大蝉草(CordycepscicadaeShing)的无性型蝉拟青霉(PaecilamycescicadaeMiqueSamson)寄生在蝉科昆虫山蝉(CicadaflammataDist)若虫上的子座及若虫尸体形成的虫菌复合体，主产于浙江、四川、安徽、福建、广东、云南、江苏等地。蝉花是菌虫复合体药材，主要药用部位为子座及寄主昆虫的尸体(菌核)。宋代唐慎微所著的《经史证类备急本草》中记述：“蝉花，味甘，寒，无毒。主小儿天吊，惊痫螈，夜啼心悸。”现代研究证明蝉花具有免疫调节[2]，滋补强壮[3]，抑制肿瘤[4-5]等作用。本文对采集自浙江湖州地区的蝉花进行化学成分研究，根据相似相容原理，选定石油醚为其小极性溶剂，乙酸乙酯为其中等极性溶剂，报道其中石油醚部位和乙酸乙酯部位17个化合物的定性分析结果。

1 仪器与材料

1.1 仪器 SHIMADZU GC/MS-QP 2010气相色谱-质谱联用仪，配备电子轰击源(EI)、SIL-10Advp自动进样器；Sartorius-BS110S型分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)；FA2004AN型电子分析天平(上海恒平科学仪器有限公司)；KQ5200超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);R-204型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)；HH-S型水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)。

1.2 药材与试剂 蝉花药材收购自湖州地区，经浙江中医药大学药学院宋捷民教授鉴定，蝉花为麦角菌科真菌蝉拟青霉(Paecilomycescicadae(Miq.)Samson)寄生于蝉蛹体上的干燥复合体。乙醇、石油醚、乙酸乙酯均为分析纯。

2 样品的提取分离与分析方法

2.1 蝉花样品的制备[6-7]取蝉花粉末(过三号筛)50 g,加10倍量95%乙醇加热回流提取3次，每次3 h，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，得干浸膏。将此浸膏分散于1 000 mL去离子水中，超声制成水混悬液。依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，分别得到石油醚萃取部位(A)和乙酸乙酯萃取部位(B)。

A：回收溶剂，得到石油醚部位浸膏，浸膏用适量丙酮溶解后，作为供试品溶液。

B：回收溶剂，得到乙酸乙酯部位浸膏，浸膏用适量丙酮溶解后，作为供试品溶液。

2.2 GC-MS色谱条件[8-9]GC分析条件：Rtx-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷伦公司)；载气：He(纯度99.999%)；柱流速控制；恒压：67.2 Mpa；载气总流速:30 mL/min；柱流速：1.19 mL/min。不分流进样：1 μL；柱温箱程序升温：初温50 ℃，以10 ℃/min数率升至100 ℃,然后从100 ℃以6 ℃/min数率升至280 ℃(保持15 min)。

EI/MS分析条件:气相色谱-质谱接口温度：230 ℃；离子源真空度：0.1 MPa；离子源温度:200 ℃；电子能量：70 eV；灯丝电流：60 μA；检测器电压：0.78 kV；四极杆温度：150 ℃；溶剂延迟时间4.0 min；调谐方式：自动调谐；质量扫描范围：60-450 amu；SIM扫描方式间隔：0.2 s。

3 结果

吸取各供试品溶液1 μL,进样，按照2.2项下的实验条件进行GC-MS分析，得到GC-MS总离子流图。通过气相质谱分析工作站NIST质谱标准图库进行检索，按各色谱峰的质谱裂解碎片图与文献核对，对基峰质荷比和相对峰度等进行比较，并参照有关文献进行鉴定确认，从而鉴定出蝉花醇提物石油醚部位和乙酸乙酯部位化合物，共17种。

蝉花石油醚部位的化合物经定性分析，主要成分为正十三烷、甘菊蓝、正十六烷、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸乙酯、十五酸乙酯、二十五烷酸、棕榈酸乙酯、硬脂酸、反式角鲨烯、麦角甾醇，见表1，总离子流图见图1。

表1 蝉花石油醚部位的化合物定性分析结果

蝉花乙酸乙酯部位的化合物经定性分析，主要成分为肉豆蔻酸乙酯、吡咯烷乙酸乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、酚酞二丁酯、十八酸乙酯、胆甾醇、月桂酸，见表2，总离子流图见图2。

表2 蝉花乙酸乙酯部位的化合物定性分析结果

图1 蝉花石油醚部位总离子流图(TIC)色谱图

图2 蝉花乙酸乙酯部位总离子流图(TIC)色谱图

4 讨论

蝉花为浙江省特色中药资源，长期以来的临床应用及科学研究表明蝉花具有类似冬虫夏草的功效，而价格只占到冬虫夏草的百分之一，是理想的冬虫夏草的代用品。

本实验对蝉花进行乙醇提取，对石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行了研究，将分离得到的成分统一进行了定性鉴别。采用气质联用共鉴定出17种化学成分，其中麦角甾醇、胆甾醇、甘菊蓝、硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸等为蝉花、冬虫夏草共有成分[10-12]。

此外，王琪等[13]指出麦角甾醇为蝉花的活性成分之一，具有抗氧化能力，其作用部分等同于维生素D2[14]，能维持及调节血浆钙、磷正常浓，对防治儿童佝偻病、老年骨质疏松有重要作用[15]。有研究[16]初步表明麦角甾醇可以抑制对人肝癌细胞HepG2增殖。甘菊蓝对伤口具有抗菌消炎作用。角鲨烯对人体和动物体有解毒作用，能治疗皮炎和溃疡等，并且具有较好的抗肿瘤作用[17]。以上均是对人体有益的生理活性物质。挥发油成分如肉豆蔻酸、十五酸乙酯、十八酸乙酯、月桂酸等，是蝉花的致香成分，应用于多种食用香精配方，使蝉花虫体具有香味。

本研究能更全面、真实地反映出蝉花药材中的化学组分，为蝉花替代冬虫夏草提供了实验数据，并为蝉花的进一步开发提供了物质基础，也对浙江湖州产地的蝉花鉴别提供了一定的依据。

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