三叶青提取物解热作用及对大白鼠下丘脑5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺含量的影响

杨雄志，王翰华

(浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100)

三叶青(TetrastigmaeRadix)为葡萄科植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemseyanumDielsetGld)的干燥块根，分布于我国浙江、江西、福建、湖北、广东、广西等地[1]。有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，临床用于治疗高热惊厥、腹痛、肺炎、哮喘、肝炎等症[1-2]。近10年来，三叶青作为浙江特产药材及濒危的植物资源，由于其在抗肿瘤、抗病毒、治高热等临床应用中具有显著的疗效，现倍受医药工作者的广泛关注。为了进一步探讨三叶青提取物解热作用及其机理，现研究其对酵母致大鼠发热和下丘脑组织中5-HT、NE、DA含量的影响，为今后临床应用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 试验药物 三叶青采于宁波市东钱湖郊区，经本校中药鉴定教研室鉴定为葡萄科植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemseyanumDielsetGld)的干燥块根。三叶青提取物(Extract of Tetrastigmae Radix，ETR)的制备：将1 000 g药材常规加工粉碎后过20目筛，用水回流提取2次，用旋转蒸发仪浓缩至相当于含生药2 g/mL,置冰箱备用。实验用剂型为注射液。

1.2 动物 Wiser大鼠雄性，体质量(200±20) g，由浙江医科院动物中心提供，实验前置动物于实验室内适应环境1周，5只/笼。光照节律12L:12D(6:00～18:00)，室温(22±2)℃，保持动物室安静。相对湿度保持30%～40%，喂常规颗粒饲料及饮用水。

1.3 试剂 干酵母(梅山马利有限公司，批号:100518)；阿司匹林肠溶片(上海信谊药厂有限公司，批号：100925)；邻苯二甲醛(上海金穗生物科技有限公司，批号100628)；L-半胱氨酸(中国科学院微生物研究所产品，批号：100508)；5-羟色胺(5-HT:Sismg公司产品)；NE、DA(Fluda公司产品)；(5-HT、NE、DA标准液：按游离胺计算，用0.l mol/L的HCI配成1 mg/mL)贮备液，冰冻保存，临时用0.1 mol/L的HCL稀释成1 μg/mL)[4]。酸性正丁醇，碱式亚硫酸钠，磷酸等试剂均为市售分析纯。

1.4 仪器 RF-5301PC型荧光分光光度计：日本岛津公司；便携式数字测温仪：上海医用仪表厂产品；电子天平：瑞士产品。

2 方法与结果

2.1 三叶青提取物(ETR)对大白鼠酵母发热的影响[3]选取雌雄大白鼠若干，预测体温3 d，3次/d。实验当日测定大白鼠基础肛温，取均值为正常体温者(2次体温波动>0.3剔除)作为实验用大白鼠。用20%酵母混悬液以10 mL/kg量注入大白鼠背部皮下，6 h后测量其肛温，凡直肠温度上升不到0.8 ℃的大白鼠剔除不用。取合格大白鼠100只分为10组，空白对照组(NS)、ETR按高中低剂量组(6.0、4.0、2.0 g/kg)分为3组、阳性药组(阿司匹林100 mg/kg)，均注射给药。给药后，每隔1 h测量肛温1次，连续测量5次。结果见表1。另外5组(由模型对照组替换阳性药组，其他不变)在注射给药后，1 h后测肛温，并将动物快速断头，以灰结节及视交叉之间的中心点为中心确定下丘脑的位置，称取一定量的下丘脑组织，立即放入灌氮罐内，速冻于-80 ℃冰箱保存,备用以留做5-HT、NE、DA含量的提取和测定[4]。

表1 三叶青提取物(ETR)对大白鼠酵母发热的影响(±s,n=10) h

2.2 三叶青提取物(ETR)对大白鼠下丘脑组织5-HT、NE、DA含量的影响[5]取一定量冰冻的下丘脑组织，放入预先冰冷的玻璃匀浆器中，每100 mg脑组织加预冷酸性正丁醇(1∶30)制成匀浆，离心。1)取正丁醇上清液，加正庚烷2.5 mL，加0.1 mol/L HCIl mL振荡，离心。取水相，加入L半胱氨酸与OPT反应,用荧光分光光度计在480 nm/365 nm处测定5-HT荧光强度。2)取正丁醇上清液，加磷酸缓冲液2.1 rnL,加0.01 mol/HCI 0.2 mL，内标管加入NE、DA标准液0.l mL，离心。取水相，在碱性条件下与碘试剂反应，生成具有荧光性的化合物。用荧光分光光度计在480 nm/385 nm测定NE荧光强度。在375 nm/325 nm处测定DA荧光强度。大白鼠下丘脑5-HT、NE，DA的含量以ng/mg鲜脑组织的湿重数表示。结果见表2。

3 小结

三叶青是浙江省一味具有地方特色、分布甚广、蕴藏量大、优势发展、效果显著的中药材。十多年来，许多学者借助《中药大辞典》等著作以及古人对三叶青临床应用的宝贵经验，对其抗肿瘤、抗病毒等方面的现代研究取得了一定的成效。本实验结果均表明三叶青提取物具有较强的解热降温作用。这与现已证实的体温调节的单胺学说(中枢单胺类神经递质参与体温调节活动，并且是温度敏感神经元活动的神经化学基础;5-HT、NE、DA含量的动态平衡可保持体温的恒定，单胺参与体温调节及致热原通过释放单胺引起发热)基本一致。

表2 三叶青提取物(ETR)对大白鼠下丘脑组织5-HT、NE、DA含量的影响(±s,n=10) ng/mg

三叶青提取物对酵母致发热大白鼠体温升高有显著的降低作用。尽管三叶青提取物高中低3个剂量效果有一定的差异，但高剂量尤为突出。其主要表现在大白鼠给药后1 h体温显著下降，体温变化值与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；下丘脑组织中5-HT、NE、DA含量亦明显降低，与正常对照组比较也有统计学意义(P<0.01)。所以,三叶青提取物的解热作用，影响体温调节中枢发热介质5-HT、NE、DA代谢，降低下丘脑组织中5-HT、NE、DA含量，使体温调定点下移可能是三叶青提取物降热作用机理之一。

[1]中国医学科学院药物研究所.中药志(第2册)[M].北京:人民卫生出版社,1984:2198.

[2]江苏新医学院.中药大词典(下册)[M].上海:上海科学技术出版社,1977:2123.

[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1996:298-300.

[4]李仪奎.中药药理研究方法学[M].上海:上海科学技术出版社,1992:182.

[5]杜旭,江志君,刘晓谦,等.白桦提取物的解热作用及对下丘脑组织中5-HT,NE,DA含量影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志,2001,7(9):29.