新甲型H1N1流感轻症患者血清免疫学特征分析及临床意义研究

林存智，孙 勇，王 军，蒋捍东

2009年4月北美地区出现新甲型H1N1流感患者，短短几个月播及全球200多个国家和地区，造成全球大流行。我国疫情形势由初期的输入性为主逐渐变为境内感染为主，由散发患者向聚集性疫情发展，由城市逐渐向农村蔓延，流行后期重症患者急剧增加。我国采取了防、控、治并举的措施，有效遏制了疫情的进一步蔓延。2010—2011年冬春季不断出现散发患者，2012年春季同样存在散发的新甲型H1N1患者，中华人民共和国卫生部官方网站公布传染病消息显示2012年4月份国内确诊新甲型H1N1流感患者111例，无死亡患者。因此，为正确理解和治疗新甲型H1N1流感轻症患者，现将新甲型H1N1流感轻症患者的免疫学特征报道如下，并与普通感冒患者进行对照研究。

1　资料与方法

1.1一般资料

1.1.1患者选择选取新甲型H1N1流感轻症患者26例，男19例，女7例；年龄19～22岁，平均年龄为(20.6±1.5)岁。选取普通感冒患者32例，男23例，女9例；年龄为17～25岁，平均年龄为(22.5±2.2)岁。两组患者年龄、性别间具有均衡性，且均无其他基础疾病。

1.1.2诊断标准新甲型H1N1流感诊断标准为中华人民共和国卫生部2009年颁布的第三版诊疗方案[1]；普通感冒诊断根据蔡柏蔷等[2]主编的《协和呼吸病学》诊断标准进行诊断。

1.2研究方法

1.2.1血清细胞因子检测方法取确诊的新甲型H1N1流感轻症患者外周血2 ml，2 000 r/min离心,离心半径14 cm，10 min，留取血清，冷存-20 ℃冰箱备用；用同样的方法留取32例普通感冒患者血清2 ml，离心，冷藏备用。

1.2.2实验试剂单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)试剂盒由欣博盛生物科技有限公司提供，白介素6 (IL-6)，白介素8(IL-8)，白介素10(IL-10)试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。实验操作均按照试剂盒提供的实验操作说明进行。

2　结果

两组患者外周血清免疫学特征比较，IL-8水平两组间差异有统计学意义(P<0.05)，其余细胞因子表达差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。

Table 1　The expression of cytokines in the two groups

注：MCP-1=单核细胞趋化蛋白-1，IL-6=白介素6，IL-8=白介素8，IL-10=白介素10

3　讨论

新甲型H1N1流感是由变异后的甲型H1N1流感病毒株所引起的急性呼吸道传染病，有以下流行病学特点及临床特征：(1)通过飞沫、气溶胶、直接接触或间接接触传播，患者在发病前一天就具有传染性[3]；(2)人群普遍易感；(3)隐性感染：无症状感染者，也具有传染性[1]；(4)临床表现与普通流感相似[4]。普通感冒是一种轻度、能自限的上呼吸道感染。常见病原菌有鼻病毒、冠状病毒、流感病毒和副流感病毒，其中以鼻病毒和冠状病毒最常见。在寒冷季节多发，发病机制为：病毒进入鼻孔，随后感染上呼吸道的上皮细胞，48 h内病毒复制高峰，持续3周。但这两种由不同病毒引起的疾病却存在一定程度的免疫机制相似性。

流感病毒侵入机体后，刺激机体产生一定的免疫反应，从而对机体的细胞因子分泌产生一定影响。IL-6由淋巴样和某些非淋巴样细胞产生，其生物学活性刺激细胞生长和促进多种细胞的增殖，促进细胞分化，如B细胞分化和Ig的分泌、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分化，协同白介素2(IL-2)增强CTL中穿孔素基因的表达，并增加T细胞IL-2的产生和IL-2受体的表达，诱导巨噬细胞、神经细胞和NK细胞分化。IL-8是由单核细胞或巨噬细胞产生，是一种具有趋化活性的细胞因子，能够诱导中性粒细胞定向迁移，增加炎性反应。

单核细胞趋化蛋白属趋化因子CC亚家族，分子量多为8～10 kD的蛋白组成。包括MCP-1～3，可由炎性递质刺激的单核/巨噬细胞、成纤维细胞、B细胞、内皮细胞和平滑肌细胞等分泌，对单核/巨噬细胞有趋化和激活作用。MCP-1也可介导嗜碱性粒细胞趋化和激活。MCP-1是β亚家族的代表，可趋化单核细胞。主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。

IL-10由活化胸腺细胞、巨噬细胞、角朊细胞和正常B细胞、活化单核细胞、外周血T细胞产生。IL-10是一种重要的抗炎细胞因子。病毒感染早期，IL-10的产生是机体控制和限制病毒感染所致炎性反应的重要机制之一[5]。IL-10主要抑制白介素12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)分泌，从而促进Th2型细胞分化，而且它是B细胞终分化因子。在B细胞对抗流感病毒抗原时，IL-10起关键作用，有助于在感染中和感染后产生保护性抗体。本研究结果与某些国外研究报道相似，如Nakajima等[6]对2009甲型H1N1流感死亡患者尸检发现，与正常人比较其血清肺组织中IL-10、IL-6、MCP-1水平均升高。

新甲型H1N1流感与普通感冒虽然由不同的病原体感染所致，但临床症状具有一定的相似性。本研究表明机体对病毒的免疫反应同样存在一定的相似，外周血清中IL-10、IL-6和MCP-1表达水平无差异性，而IL-8表达具有一定的差异性，临床治疗的方案基本一致。普通感冒一般应用抗病毒的中成药和对症治疗即可康复，而新甲型H1N1流感轻症患者，同样也可以对症治疗，应用中成药或中成药汤剂治疗，与抗病毒治疗的疗效相似[7]。

毛会军等[8]研究报道，感染新甲型HINl病毒后，外周血清中IL-10、IL-8与正常人比较均升高，而单核/巨噬细胞产生的IL-8却显著升高，与本研究的结果相似。但是否与单核/巨噬细胞吞噬病毒有关，值得以后进一步研究。

志谢：感谢青岛市疾病预防控制中心实验室汪照国主任提供新甲型H1N1流感患者血清标本，感谢青岛市胸科医院检验科江国峰主任协助进行实验标本检测。

1中华人民共和国卫生部.甲型H1N1流感诊疗方案(2009年试行版第三版)[J].中华临床感染病杂志，2009，3(2):257-259.

2蔡柏蔷，李龙芸.协和呼吸病学[M].北京：中国协和医科大学出版社，2011：815-816.

3王星，杜钟珍，李莉，等.甲型H1N1流感的临床特点研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20(4)：603.

4程文，章隆辉，汪克文.新型甲型H1N1流感危重症临床分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20(11)：1792.

5Graham MB，Dalton DK，Oiitinan D，et al.Response to influenza infection in mice with a targeted disruption of the interferon-γ gene[J].J Exp Med，1993，178(5)：1725 -1732.

6Nakajima N，Ham S，Sato Y，et al.The first autopsy case of pandemic influenza(A/H1N1 rxlm) virus infection in Japan：Detection of a high copy number of the virus in type Ⅱalveolar epithelia cells by pathological and virological examination [J].Jim J Infect Dis，2010，63(1)：67-71.

7林存智，王军，邹少木，等.甲型H1N1流感病例临床特征分析[J].中华传染病杂志，2010，28(2)：117-118.

8毛会军，陈良，沈芳.2009流行性感冒患者血清细胞因子的变化特点[J].感染与微生物，2011，6(1)：18-22.