乳腺浸润性导管癌中拓扑异构酶Ⅱ等相关因素表达与腋窝淋巴结转移的关系研究

王 蒙，张程达，李 真，刘秀玮，刘东升，孟 新，张卫东

目前乳腺癌已成为女性最常见的恶性肿瘤之一，且其发病率逐年升高、发病年龄也趋于年轻化[1]。我国乳腺癌发病率也呈迅猛上升的趋势，预计截至2021年，55～69岁的女性乳腺癌发病率将会达到100/10万[2]。有研究表明，远处转移是影响乳腺癌患者治疗效果及预后情况的重要因素和主要致死原因，而淋巴道播散即为一种乳腺癌最重要的转移途径[3-5]。本研究采用免疫组织化学-SP法测定了101例乳腺浸润性导管癌患者病理组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erbB-2基因、拓扑异构酶Ⅱ(TopoisomeraseⅡ)及nm23基因等的表达，其中TopoisomeraseⅡ在国内外相关研究中多侧重于其在化疗方案方面的意义，对其与腋窝淋巴结转移关联性的研究相对较少。本研究就以上指标结合相关临床因素，重点探讨其与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的相关性，力求为患者的预后及诊疗方案提供科学的数据支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年6月—2011年6月于河南省人民医院就诊并接受乳腺癌改良根治术的乳腺癌患者的病历记录及病理诊断资料。筛选标准：(1)病理类型为乳腺浸润性导管癌；(2)病理诊断项目及临床相关资料完整。共101例患者进入统计分析，均为女性。

1.2 试验试剂 即用型鼠抗人ER、PR、Ki-67、nm23基因、TopoisomeraseⅡ单克隆抗体，均购自北京巾杉金桥生物技术有限公司；碱性磷酸酶标记羊抗兔或鼠IgG聚合物(二抗)等，购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 研究方法 101例患者标本均为手术切除的乳腺癌组织。采用免疫组织化学-SP法对手术标本进行免疫组化染色,严格按照试剂盒说明书进行实验操作:首先用10%的甲醛溶液固定标本，接下来组织脱水、组织透明、组织浸蜡及切片染色。然后经一抗、二抗孵育，3，3-二氨基联苯胺(DAB)显色后封片。

1.4 结果判定 病理组织学的分级标准采用改良Bloom-Richardson分级；ER、PR 阳性细胞的判断标准，TopoisomeraseⅡ、nm23基因及C-erbB-2基因蛋白表达的结果判定遵照相关文献中Hercep Test等评分标准[6-8]。染色评分标准：如果出现显色不清或者显色不均匀则判定为0分；染色为浅黄色则判定为1分；染色为棕黄色则判定为2分；出现深褐色染色则判定为3分。综合的评分标准为：0～1分评为阴性(-)；2～3分评为弱阳性(+)；4～5分评为中度阳性(++)；>5分评为强阳性(+++)[9]。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件对相关数据进行分析。对病理检测采用列联表χ2检验进行因素分析，检验水准为α=0.05。定义乳腺癌腋窝淋巴结转移与否为因变量，其他单因素筛选有意义的影响因素为自变量，进行多因素非条件Logistic 回归分析，计算其OR值及95%CI、相应P值等。

2 结果

2.1 基本情况 101例女性乳腺浸润性导管癌患者均经术后病理检查确诊，其中淋巴结转移患者68例，无淋巴结转移患者33例，转移发生率为67%。全组发病年龄为28～85岁，平均(50.3±8.9)岁。

2.2 相关激素受体的表达与腋窝淋巴结转移的关系分析 不同ER、PR的表达梯度患者腋窝淋巴结转移发生率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。不同C-erbB-2基因的表达梯度患者腋窝淋巴结转移发生率比较，差异有统计学意义(P<0.05)；C-erbB-2(+++)组的转移发生率最高，为81.5%；C-erbB-2(-)组的转移发生率最低，为18.2%(见表1)。

2.3 TopoisomeraseⅡ、nm23基因的表达与腋窝淋巴结转移的关系分析 TopoisomeraseⅡ(-)患者腋窝淋巴结转移发生率与TopoisomeraseⅡ(+)比较，差异有统计学意义(P<0.05)。nm23基因(-)患者腋窝淋巴结转移发生率与nm23基因(+)比较，差异亦有统计学意义(P<0.05，见表2)。

2.4 多因素Logistic回归分析 对上述单因素筛选出的具有统计学意义的相关因素进行多因素非条件Logistic 回归分析，采用筛选变量方法(即Forward Wald法)，进入变量α=0.05。分析结果显示，TopoisomeraseⅡ是淋巴结转移的危险因素，而且是乳腺浸润性导管癌腋窝淋巴结转移的强危险因素(OR>3)；C-erbB-2(OR=1.848，P=0.041)高表达与腋窝淋巴结转移有关；而nm23基因(OR=0.151，P=0.008)的回归系数β为负值，且OR<1，即为保护因素(见表3)。

表1 相关激素受体的表达与腋窝淋巴结转移的关系
Table1 The relationship between relevant hormone receptor expressions and axillary lymph node metastasis

转移情况(例)有转移 无转移转移发生率(%)χ2值P值ER1 6580 646 -171160 7 +261072 2 ++13861 9 +++12475 0PR4 5270 210 -261563 4 +341372 3 ++7277 8 +++1325 0C-erbB-214 7180 002 -2918 2 +231069 7 ++21970 0 +++22581 5

注：ER=雌激素受体，PR=孕激素受体

表2 TopoisomeraseⅡ、nm23基因的表达与腋窝淋巴结转移的关系
Table2 The relationship between TopoisomeraseⅡ，nm23 gene expression and axillary lymph node metastasis

转移情况(例)有转移 无转移转移发生率(%)χ2值P值TopoisomeraseⅡ9 9900 002 -141745 2 +541677 1nm23基因9 4040 002 -34685 0 +342755 7

注：Topoisomerase Ⅱ=拓扑异构酶Ⅱ

表3 乳腺癌淋巴结转移的危险因素多因素Logistic 回归分析
Table3 Logistic regression analysis of the risk factors of lymph node metastasis of breast cancer

因素βSEWaldχ2P值OR值95%CInm23基因-1 8920 709 7 132 0 0080 151(0 038，0 604)TopoisomeraseⅡ 2 1830 66010 9510 0018 870(2 435，32 310)C-erbB-2 0 6140 301 4 164 0 0411 848(1 025，3 335)

3 讨论

本研究结果支持C-erbB-2基因的阳性表达与腋窝淋巴结转移之间有关。原癌基因C-erbB-2，又名HER-2或者HER-2/neu，属于人类表皮生长因子受体 (EGFR)家族的第二个成员，位于染色体17q21上，在细胞的信号传导中发挥着重要的作用，也是细胞增殖、分化、转移、存活和死亡的重要调节因子[10]。曾有相关研究提出：C-erbB-2基因的表达情况不仅与淋巴结的转移显著相关，而且与淋巴结转移的数目有相关关系[11-12]。这均提示C-erbB-2基因的准确检测可以更好地预测患者是否会出现腋窝淋巴结转移、指导评估乳腺癌患者的预后，有助于患者及时、准确地选择针对性治疗方案。

本研究中多因素Logistic分析结果亦纳入了TopoisomeraseⅡ和nm23基因，且统计分析显示Topoisomerase Ⅱ是淋巴结转移的危险因素，而且是乳腺浸润性导管癌腋窝淋巴结转移的强危险因素。而nm23基因低表达是腋窝淋巴结转移的危险因素。这两项指标在国内外关于乳腺浸润性导管癌腋窝淋巴结转移方面的研究尚且较少，但有国外相关文献支持上述结果[13-14]。

乳腺癌的发生、发展是一个极为复杂且多因素、多步骤、多进程和多基因改变的过程，同许多生物学的指标均有密切的相关性[15-16]。这就要求在不断的探索研究中，综合考虑多种因素，应用多因素分析的方法，结合各个研究方法之长，才有可能探知这一复杂的机制及控制方法。患者腋窝淋巴结的转移状态也可作为指导乳腺癌患者治疗方法、手术术式、生存预后的重要指标之一，但是nm23基因及C-erb-2基因等生物学指标也可是其独立的影响因素。正确的检测分析及应用这些指标对乳腺癌患者的早诊断、早治疗有很大的指导意义[17]。

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