高效液相色谱法测定复方白芷乳膏中欧前胡素和异欧前胡素含量

何荣芬

(安徽省淮北市人民医院，安徽 淮北 235000)

复方白芷乳膏是淮北市人民医院的自制制剂，主要成分为白芷、维生素E。白芷具有美白除斑、润肤、控油、延缓皮肤衰老的作用。白芷维生素E乳膏经临床验证，疗效好、使用方便、无刺激性、无不良反应[1]。维生素E是自由基清除剂，使细胞的脂质免受自由基氧化的损害，从而延缓衰老。笔者采用高效液相色谱法测定复方白芷乳膏中欧前胡素和异欧前胡素的含量，方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高，适用于制剂的质量控制。

1 仪器与试药

Waters e2695 HPLC色谱系统;Empower Waters工作站;Waters 2489 UV/visible Detector检测器;超声波处理器(济宁奥波超声电气有限公司，批号为JAC-300);Mettler AE-240电子分析天平(0．1 mg，0．01 mg)。欧前胡素对照品(批号为 110826-200511，中国药品生物制品检定所，供含量测定用，置五氧化二磷减压干燥12 h以上使用);异欧前胡素对照品(批号为110827-201008，中国药品生物制品检定所，供含量测定用，含量以99．4%计，置五氧化二磷减压干燥12 h以上使用);复方白芷乳膏(淮北市人民医院制剂，批号分别为 20120928，20121025，20121030);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -水(62 ∶38);流速:1．0 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL;检测波长:254 nm[2]。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

分别精密称取欧前胡素对照品6．37 mg(置五氧化二磷减压干燥14 h)，异欧前胡素对照品6．73 mg(置五氧化二磷减压干燥14 h)，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液[3]。取本品2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，80℃水浴中放置10 min使其完全破乳，再置超声仪中超声10 min，放冷至室温，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷却1 h，取出后迅速过滤，取续滤液放冷至室温，用0．45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液[4]。取处方中不含白芷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:分别精密量取对照品贮备液 1．0，2．0，4．0，6．0，10．0，20．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图(图1A)，以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标(μg/mL)进行线性回归分析，得回归方程。欧前胡素 Y=78 855．639 8X＋1 167．223 7(r=0．99999)，进样质量浓度在 1．274 ～25．48 μg/mL 范围内与峰面积具有良好的线性关系;异欧前胡素 Y=74 122．810 8 X-5229．1326(r=0．99999)，进样质量浓度在 1．338 ～ 26．76 μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样6次。结果欧前胡素峰面积为 405 800，406 400，408 900，409 600，410 900，413 800，RSD=0．72%;异欧前胡素峰面积为 394 500，395 100，395 800，398 700，399 800，401 800，RSD=0．74%。表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取样品测定项下的同一供试品溶液(批号为20121025)在 0，2，4，6，8，10，12 h 时分别进样测试，记录色谱图。结果欧前胡素峰面积的 RSD为1．76%，异欧前胡素峰面积的RSD为0．90%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批号的样品(批号为20121025)6份，各测定2次，照样品测定项下方法测定，计算含量。结果欧前胡素的平均含量为标示量的0．092%，RSD为0．79%;异欧前胡素的平均含量为标示量的0．047%，RSD为1．28%。结果表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20121025)9份，分别置10 mL容量瓶中，分成3组，每组分别精密加入 5．096 μg/mL 的对照品贮备液 2．0，2．4，3．0 mL，照供试品溶液制备方法，精密量取20 μL注入液相色谱仪，按拟订的色谱条件测定。结果见表1和表2。

表1 欧前胡素加样回收率试验结果

2．4 样品含量测定

取本品3批，各取2份，精密称取适量，置50 mL容量瓶中，按供试品制备方法得供试品溶液。精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图(图1B)，用回归方程计算含量。结果见表3和表4。

3 讨论

有文献报道[5-7]，欧前胡素和异欧前胡素的测定波长选择300 nm和254 nm。取同一对照品溶液，分别在300 nm和254 nm波长处测定，结果在254 nm波长处测定时欧前胡素和异欧前胡素的峰面积及峰高值均大于在300 nm测定值。故选择254 nm为测定波长。

表2 异欧前胡素加样回收试验结果

表3 样品欧前胡素含量测定结果

表4 样品异欧前胡素含量测定结果

在供试品溶液色谱图中，欧前胡素和异欧前胡素色谱峰之间还有别的组分峰，通过调节甲醇-水的比例，可以将欧前胡素和异欧前胡素与其他相邻的色谱峰达到完全分离。本研究中采用甲醇 -水(62∶38)为流动相，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm)，得到了满意的效果。

[1]梓 萱．白芷美容称上品[J]．中国保健营养，2010(9):40-42．

[2]张 慧，海广泛，尹志奎，等．高效液相色谱法测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素含量[J]．新乡医学院学报，2009，26(2):138-140．

[3]肖永庆，李 丽，游小淋，等．白芷质量标准研究[J]．中国中药杂志，2004，29(7):467-468．

[4]蒋 剑，田立江，赵 新．复方白芷乳膏中欧前胡素的高效液相色谱法测定[J]．新疆中医药，2005，23(3):9．

[5]郑立红，李卫敏，陈志峰，等．不同产地白芷中欧前胡素的含量测定[J]．世界中医药，2012，7(1):79-80．

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[7]胡华杰，楼招欢，吕圭源，等．HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J]．浙江中医药大学学报，2010，34(3):418-420．