Toll样受体2和Toll样受体4对结核性胸腔积液的诊断价值

黄陆颖，巫艳彬，冯挺眉，韦彩周，王 武

（1.广西壮族自治区人民医院呼吸内科，广西南宁530021；2.广西医科大学第一附属医院呼吸疾病研究所，广西南宁530021）

·论 著·

Toll样受体2和Toll样受体4对结核性胸腔积液的诊断价值

黄陆颖1，巫艳彬2，冯挺眉2，韦彩周1，王 武1

（1.广西壮族自治区人民医院呼吸内科，广西南宁530021；2.广西医科大学第一附属医院呼吸疾病研究所，广西南宁530021）

目的探讨联合测定胸腔积液中Toll样受体2（Toll-like receptor 2，TLR2）和TOLL样受体4（Toll-liker receptor 4，TLR4）的水平对结核性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法结核性胸腔积液组31例，恶性胸腔积液组22例。应用酶联免疫吸附测定法测定胸腔积液上清液和血清TLR2、TLR4的浓度，并对结果进行分析。结果2组胸腔积液TLR2和TLR4均比其在相应血清中的水平高。结核组胸腔积液TLR2水平高于恶性组。受试者工作特征曲线结果显示，TLR2的曲线下面积为0.696（95％可区信区间为0.501～0.849），TLR2浓度截断值取20.9μg/L，灵敏度为66.67％，特异度为80.00％。TLR4的曲线下面积为0.529（95％可区信区间为0.339～0.713），TLR4浓度截断值取37.9μg/L，灵敏度为33.33％，特异度为93.33％。结论联合测定TLR2和TLR4有助于诊断结核性胸腔积液。

胸腔积液；Toll样受体；诊断

Toll蛋白是果蝇早期胚胎发育过程中的一种必需成分蛋白，Toll蛋白信号途径的活化，可促使果蝇分泌各种抗微生物感染的多肽［1］。Toll样蛋白受体家族（Toll-like receptors，TLRs）是与果蝇Toll蛋白结构同源的蛋白受体家族，介导先天免疫和病原体配体的免疫应答［2］。结核病目前依然是全球范围患者主要死亡原因，而结核病中约8％患者合并有胸腔积液［3］。TLR2和TLR4与细菌感染关系密切［4］，但是TLR2和TLR4与结核性胸膜炎的关系如何尚未明确，我们对此进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料：2009年12月—2010年7月在广西壮族自治区人民医院呼吸内科和广西医科大学第一附属医院呼吸内科住院的住院患者。严格按照观察对象的纳入标准和剔除标准选择研究对象。入院前3个月曾接受侵入性胸腔检查或胸部创伤、手术者，或目前接受糖皮质醇激素、免疫抑制剂者，或抗肿瘤治疗者除外。

结核性胸腔积液组31例，男性24例，女性7例，年龄21～77岁，平均（42.7±21.4）岁。结核性胸腔积液的诊断标准至少符合下列条件之一者。①胸腔积液中直接找到抗酸杆菌；②胸膜组织活检发现抗酸杆菌；③胸膜活检典型的肉芽肿，并排除其他肉芽肿性疾病；④胸腔积液抗结核治疗有效。恶性胸腔积液组22例，男性10例，女性12例，年龄35～75岁，平均（51.3±14.9）岁。诊断标准为胸腔积液细胞学检查找到癌细胞，或胸膜组织活检符合恶性病理改变。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集和处理：患者入院后，应用标准胸腔穿刺术抽取胸腔积液，每例研究对象同步采集外周血。外周血用EDT管收集抗凝，胸腔积液用肝素抗凝，分别用离心机1 200r/min离心，分离血清和胸水上清液，标记，置于-70℃冰箱保存待测。

1.2.2 TLR2和TLR4的检测：采用eBioscience公司生产的酶联免疫吸附测定试剂盒进行胸水上清液和血清水平的检测。用MULTISKAN MK 3型自动酶标仪比色分析获取样本的光密度值（optical density，OD），根据标准曲线将测试样本的OD值转化为浓度值。操作过程严格按照试剂说明书进行。

1.3 统计学方法：应用SPSS13.0软件进行统计分析。计量资料以±s表示，采用t检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线鉴别诊断结核与非结核性胸腔积液的最佳阈值，以及相应灵敏度与特异度。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TLR2和TLR4水平比较：结核性胸腔积液TLR2水平为（22.4±12.5）μg/L，TLR4为（28.0± 25.6）μg/L。恶性胸腔积液TLR2水平为（12.7± 10.4）μg/L，TLR4为（23.8±13.8）μg/L。2组胸腔积液TLR2和TLR4水平均高于相应的血清TLR2［（1.5±1.3）μg/L，（0.8±1.1）μg/L］和TLR4［（0.8±1.1）μg/L，（0.2±0.1）μg/L］水平（P＜0.01）。结核性胸腔积液TLR2水平高于恶性胸腔积液（P＜0.05），而2组胸腔积液TLR4水平差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 TLR2与TLR4的诊断价值：TLR2和TLR4的ROC曲线分析显示，TLR2的ROC曲线下面积（area under the ROC curve，AUC）为0.696（95％可信区间为0.501～0.849），TLR2浓度截断值取20.9μg/L，灵敏度为66.67％，特异度为80.00％。TLR4的AUC为0.529（95％可信区间为0.339～0.713），TLR4浓度截断值取37.9μg/L，灵敏度为33.33％，特异度为93.33％。

3 讨 论

胸腔积液临床很常见，但是胸腔积液的病因诊断，特别是结核性胸腔积液，由于缺乏特异性的临床表现、影像表现和实验室检查，很难作出诊断。胸腔积液涂片找抗酸杆菌、胸腔积液结核杆菌培养，因阳性率低或耗时过长而使其临床应用受到限制。胸腔镜技术的开展使胸腔积液确诊率明显提高［5］，但是，胸腔镜检查具有创伤性，且花费大，仍有相当一部分患者不能通过胸腔镜来诊断。胸腔积液腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）和淋巴细胞的比例也是常用的诊断结核性胸腔积液临床指标。但是，ADA和淋巴细胞在某些免疫相关性疾病和慢性疾病的胸腔积液中浓度是增高的［6-7］，ADA和淋巴细胞作为结核性胸腔积液的鉴别诊断指标具有局限性。因此，研究新的特异度和灵敏度高的指标，以期提高的诊断水平目前仍是个临床难题。

胸膜腔炎症发展的过程中会导致淋巴细胞的局部募集和局部细胞因子、趋化因子的生成［8-9］。通过测定并研究这些免疫因子，进一步探讨结核性胸腔积液的发病机制，以寻求诊断结核性胸腔积液的简便快捷准确的方法。TLR家族可识别病原菌，参与机体抗感染的固有免疫并成为联系获得性免疫系统的纽带。研究［10-11］表明，TLR2表达于肺泡巨噬细胞及呼吸道上皮细胞，肺炎球菌感染后TLR2和TLR4 mRNA表达水平显著增高。老鼠结核感染模型研究［12-13］发现TLR2可以诱导细胞因子产生，上调细胞因子的水平，增强老鼠抗结核能力。

本研究结果显示，2组胸腔积液中TLR2和TLR4水平均高于血清中的水平，并且结核性胸腔积液组TLR2浓度高于恶性胸腔积液组，但是TLR4的水平在结核性胸腔积液组和恶性胸腔积液组没有明显差别。说明TLR2对结核性胸腔积液有一定的鉴别意义。进一步的ROC曲线分析结果也表明，结核性胸腔积液TLR2的AUC为0.696，TLR2浓度截断值取20.9μg/L时，灵敏度为66.67％，特异度为80％，对诊断结核性胸膜疾病有较高的参考价值。同时，我们也注意到，尽管TLR4的AUC为0.529，灵敏度比较低（33.33％），但特异度比较高（93.33％）。因此，如果联合检测TLR-2和TLR4对结核性胸腔积液的诊断更有意义。

本研究结果表明检测胸水中TLR2和TLR4，可提高临床医师将结核性胸腔积液患者与其他原因胸腔积液患者区分开的能力，对于那些临床诊断并不明确的患者，这种鉴别诊断能力显得特别重要。并且，联合测定胸腔积液TLR-2和TLR4更能提高结核性胸腔积液的诊断效能。

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［3］ 张青竹，袁巨平，张文君.结核性胸膜炎介入治疗疗效观察［J］.河北医科大学学报，2007，28（2）：141-142.

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（本文编辑：刘斯静）

DIAGNOSTIC ACCURACY OF COMBINING TOLL-LIKE RECEPTOR 2 AND TOLL-LIKE RECEPTOR 4 FOR TUBERCULOUS PLEURAL EFFUSION

HUANG Luying1，WU Yanbin2，FENG Tingmei2，WEICaizhou1，WANGWu1
（1.Department of Respiratory Diseases，People’s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，
Nanning 530021，China；2.Institute of Respiratory Diseases，the First Affiliated Hospital，Guangxi Medical University，Guangxi，Nanning 530021，China）

ObjectiveThe study was to compare the diagnostic accuracy of Toll-like receptor 2（TLR2）and Toll-like receptor 4（TLR4）in tuberculous pleural effusion.MethodsThe concentrations of soluble TLR2（sTLR2）and soluble TLR4（sTLR4）in pleural effusion and serum samples were determined by enzyme linked immunosorbent assay in 31 patients with tuberculous，22 patients with malignant pleural effusion .ResultsThe concentrations of sTLR2 and sTLR4 in pleural effusions of both groups were significantly higher than those of their respective peripheral blood.The level of sTLR2 in tuberculous pleural effusion was significantly higher than that in malignant pleural effusion.The receiver operating characteristi（c ROC）curve analysis was performed for TLR2 and TLR4.The levels of TLR2 generated an area under the ROC curve 0.696（95％confidence interval 0.501-0.849），at the cut-off value 20.9μg/L，the sensitivity 66.67％，the specificity 80.00％.And TLR4 generated an area under the ROC curve 0.529（95％confidence interval 0.339-0.713），at the cut-off value 37.9μg/L，thesensitivity of 33.33％，the specificity 93.33％.ConclusionThe combination of determining TLR2 and TLR4 in pleural effusion may be helpful for the differential diagnosis of tuberculous pleural effusion and the other pleural effusions.

pleural effusion；Toll-like receptor；diagnosis

R561.3

A

1007-3205（2013）08-0896-03

2013-05-20；

2013-07-15

广西科技厅自然科学基金课题（桂科自0728081）；广西卫生厅自筹经费科研课题（桂卫Z2013394）

黄陆颖（1968-），女，壮族，广西宁明人，广西壮族自治区人民医院副主任医师，医学硕士，从事呼吸内科疾病和慢性阻塞性肺疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.08.010