复方西他列汀二甲双胍缓释片中主要组分的含量测定

迟云峰，张明晶

磷酸西他列汀（sitagliptin phosphate）是用于治疗2型糖尿病的二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制剂[1]。二甲双胍能抑制肠道对葡萄糖的吸收，抑制肝细胞的糖原异生，改善机体对胰岛素的敏感性。两类药物作用机制不同，具有协同作用，临床上将磷酸西他列汀与二甲双胍联合应用，增强降糖效果，改善对2型糖尿病患者血糖的控制，并减少不良反应的发生。2007￣03美国食品药品监督管理局（FDA）批准默克公司的复方西他列汀二甲双胍缓释片上市，商品名为“JANUMET XR”。临床研究表明，西他列汀和二甲双胍合用[2]，能明显降低具有临床意义的糖基化血红蛋白（HbA1c）水平。国内还没有复方西他列汀二甲双胍制剂上市。本文建立了反向高效液相色谱法测定复方西他列汀二甲双胍缓释片中磷酸西他列汀的含量，用高效液相色谱法法测定盐酸二甲双胍的含量，两种成分测定互不干扰，操作简便，结果准确，可有效控制产品质量。

1 仪器和试剂

湿法混合制粒机；PP40型全自动压片机；ZES－8G型智能溶出试验仪；Waters 515高效液相色谱仪和紫外可见分光检测器；电子分析天平；UV-254型可见分光光度计。磷酸西他列汀；盐酸二甲双胍。

2 方法与结果

2.1 磷酸西他列汀的含量测定 采用反相高效液相色谱法测定。

2.1.1 溶液制备

2.1.1.1 对照溶液 精密称取磷酸西他列汀对照品50 mg，加流动相溶解，并定容至50 ml量瓶中，制成浓度为1000 μg/ml的磷酸西他列汀对照品溶液。

2.1.1.2 供试品溶液 取本品10片，研细，精密称取适量（约相当于磷酸西他列汀50 mg），置于50 ml量瓶中，加流动相充分溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.2 色谱条件和系统适用性 色谱柱：Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%高氯酸水溶液（32∶68），流速 1.0 ml/min，检测波长 268 nm，柱温 30℃。 取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算磷酸西他列汀的含量。理论塔板数按磷酸西他列汀计算不低于6000。

2.1.3 线性关系考察 分别精密量取磷酸西他列汀对照品溶液适量，制得浓度分别为 1、2、5、10、20、50、100、200 μg/ml的标准曲线溶液。依法测定，结果磷酸西他列汀浓度在1～200 μg/ml，呈良好的线性关系（r=0.9999）。

2.1.4 回收率试验 称取磷酸西他列汀对照品溶液适量，加入处方量的空白辅料，分别配成80%、100%、120%3种不同浓度的供试品溶液各3份，依法测定，3种供试品的平均回收率分别为 99.3%、99.5%、99.1%；RSD值分别为 0.35%、0.30%、0.16%。

2.1.5 精密度试验 取磷酸西他列汀对照品溶液适量，连续进样6次，测得其峰面积，结果RSD=0.33%。

2.1.6 重复性试验 重复取样6份，精密称定，按“2.1.1.2”项下方法操作，结果RSD为1.1%（n=6），方法的重复性良好。

2.1.7 稳定性试验 取供试品溶液分别在0、1、4、8、12、24 h进样，结果RSD为0.98%，表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

2.1.8 样品含量测定 取本品3批，批号110920、110921、110922，磷酸西他列汀含量分别为99.73、101.23、99.48%。

2.2 盐酸二甲双胍的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）流动相为 0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L 高氯酸（pH3.0）∶甲醇=9∶1；流速 1.0 ml/min；检测波长为233 nm。 进样量 20 μl。

2.2.2 波长的选择 精密称取盐酸二甲双胍对照品50 mg，置100 ml量瓶中，用2%甲醇溶解稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，用2%甲醇稀释至刻度，摇匀，在200～800 nm范围内，结果在233 nm 波长处有最大吸收。

2.2.3 标准曲线 精密称取干燥至恒重盐酸二甲双胍对照品约50 mg，置于50 ml容量瓶中，加2%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成1.0 mg/ml的对照品储备液。分别精密吸取储备液 0.5、1、2、4、8、16ml置于 50ml容量瓶中， 加 2%甲醇稀释至刻度，充分摇匀，配成 10、20、40、80、160、320 μg/ml的标准溶液。依法测定。结果在10～320 μg/ml盐酸二甲双胍呈良好的线性关系（r=0.9999）。

2.2.4 稳定性试验 取供试品溶液，分别在室温放置2、4、6、8、10 h后测定其峰面积，结果供试品溶液在10 h内稳定，RSD为0.43%。

2.2.5 回收率试验 称取已知含量的盐酸二甲双胍供试品适量 （约相当于盐酸二甲双胍50 mg)，置于50 ml容量瓶中，分别精密加入对照品储备液适量（相当于盐酸二甲双胍40、50、60 mg），加 2%甲醇适量，超声 20 min 使溶解，定容，离心3000 r/min，5 min过滤，取续滤液1 ml置于10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，依法测定，结果平均加样回收率为（99.6±0.6）%，RSD 为 0.85%。

2.2.6 样品含量测定 取本品20片，研细，精密称取适量（约相当于盐酸二甲双胍500 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇适量，超声20 min使溶解，定容，离心3000 r/min离心5 min过滤，吸取续滤液1 ml置于50 ml容量瓶中，加水释至刻度，吸取20 μl进样，计算盐酸二甲双胍的含量。结果3种批号的盐酸二甲双胍含量分别为99.54、98.45、100.45%。

3 结 论

本文建立了利用HPLC测定复方西他列汀二甲双胍缓释片中磷酸西他列汀和盐酸二甲双胍含量的方法，方法学研究结果表明利用该法测定磷酸西他列汀和盐酸二甲双胍保留时间稳定，测定结果准确，方法精密度高，重现性好，回收率符合要求，是一种可靠的含量测定方法。适用于复方西他列汀二甲双胍缓释片质量控制的检测方法。

[1]Green BD，Flatt PR，Bailey CJ.Dipeptidyl peptidase IV(DPP IV)inhibitors:A newly emerging drug class for the treatment of type 2 diabetes[J].Diab Vasc Dis Res，2006，3(3):159.

[2]Raz I，Chen Y，Wu M，et al.Efficacy and safety of sitagliptin added to ongoing metformin in therapy in patients with type 2 diabetes[J].Curr Med Res Opin，2008，24(2):537.