垂丝海棠、楸子扦插生根的生理机制1)

许晓岗 丁芳芳 童丽丽

(南京林业大学，南京，210037) (金陵科技学院)

海棠是蔷薇科苹果属优良的观花及观果的园林植物，其苗木需求量逐年增加，如何快速繁殖已成为海棠苗木生产上急需解决的关键问题。多年来，人们对海棠类植物的生根特性进行了一些细胞学水平的研究，主要包括外源激素、扦插基质、扦插季节等因素对扦插生根能力的影响以及扦插生根的解剖学过程等方面。但从生理学基础上对海棠进行蛋白质组分及含量变化的研究尚未见报道。影响植物扦插生根的因子很多，除了外部环境因子以外，插穗本身的生理状况也是重要的影响因子［1］。付红祥［2］观察到海棠的遗传性状和其插穗本身的生活能力对愈伤组织和根原始体的形成至关重要。细弱枝条制成的插穗生根量少、生根率低［3］。笔者对垂丝海棠(Malus halliana)和楸子(Malus prunifolia)的预扦插试验表明，不同种类、不同插穗类型、不同扦插时间、不同芽位的插穗都会对其生根产生很大影响。本研究在此基础上，测定了2 种不同生根类型的海棠(楸子为皮部生根型，垂丝海棠为愈伤组织生根型)生根过程中的含水量、单宁、可溶性糖、可溶性蛋白质、多酚氧化酶、过氧化物酶活性含量的变化，通过分析比较各指标在生根过程中的变化揭示其对生根的影响，为揭示海棠的苗木扦插繁殖机理提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

垂丝海棠、楸子实生苗来源于南京六合马集试验基地。插穗为9 ～10年生实生苗的当年生枝条、生长枝、结果枝，其中，当年枝为一年生枝的统称，生长枝均为海棠的长枝，即:不开花结果的枝条。试验采用枝插，为观测不同时期插穗内部的生理变化，采条扦插时间分别为2010年9月3日、2011年3月23日、2011年4月15日、2011年6月3日。插穗采后迅速包装好带至插床进行处理后扦插。插穗均采用500 mg/L 的IBA+NAA 水溶液(2 种激素各占一半)处理60 min。每个处理重复3 次，每个重复插穗数量为300 ～600 枝。

1.2 试验方法

为了研究同一插穗类型的不同芽位生根率是否存在规律性，通过对2 种海棠不同芽位插穗的生理因子测定来找出其中的变化。选取当年生生长枝上自顶芽开始由上往下逐个芽截取、制成长3 ～5 cm的插穗。由于插穗相对较短，水分和养分含量相对较少。为防止水分和养分散失，除顶芽外，每个插穗顶部切口处均用石蜡封闭。考虑到扦插的需要，舍弃节间过短的插穗。其他部分扦插试验按常规操作步骤进行。

1.2.1 含水量测定

含水量采用阿贝折射仪测定。称取鲜样2 g 至1 号称量瓶中，于105 ℃烘干至恒质量，称质量。计算组织水含量;称取鲜样2 g 至2 号称量瓶中，加5 mL 65% ～70%的蔗糖溶液，称质量，放置4 ～6 h(其中轻摇数次)，用折射仪测定糖液浓度。组织水含量=(鲜质量－干质量)/鲜质量×100%。自由水含量=糖液浓度×(糖液原浓度－浸后糖液浓度)/(浸后糖液浓度×鲜质量)×100%。

1.2.2 单宁质量浓度测定

单宁采用六氰合铁(Ⅲ)酸亚铁钾吸光光度法测定。①工作曲线的绘制。吸取10.00 mg/L 的单宁标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置于50 mL 容量瓶中，加1 mL 0. 1 mol/L 的FeCl3，加1 mL 0.008 mol/L K3Fe(CN)6，用蒸馏水定容，摇均，放置30 min，于波长760 nm 处分别用XG－721 型分光光度计测定吸光度，空白试剂作参比。以单宁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。②待测试液的制备。称取剪碎的样品1.00 g 于250 mL 锥形瓶中，加蒸馏水60 mL，在90℃水浴中浸提1.5 ～2.0 h，将上清液趁热过滤入250 mL 容量瓶中，用热蒸馏水洗涤试样3 次(每次加水约30 mL)，每次洗涤液均滤入容量瓶中，冷却至室温，定容，摇匀，备用。③测定:吸取待测液1.00 mL 于50 mL 容量瓶中，加20 mL 蒸馏水，1 mL 0.1 mol/L 的FeCl3，待5 min 后，加1 mL 0.008 mol/L 的K3Fe(CN)6，用蒸馏水定容，摇匀，放置30 min后，于波长760 nm 测定吸光度。从工作曲线上查出比色液质量浓度(mg/L)，单宁质量分数=比色液单宁质量浓度× 样品质量×10－4。样品稀释倍数为1.25 ×104。

1.2.3 可溶性糖和可溶性蛋白质量分数测定

可溶性糖采用蒽酮比色法测定。①标准曲线的绘制。准确吸取0.1%标准葡萄糖液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分别放入7 个100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即成0、25、50、75、100、125、150 mg/L 系列标准液。另取7 个50 mL 容量瓶分别放入蒽酮试剂10 mL，然后小心加入1 mL 标准液，充分摇匀，放入沸水浴中加热10 min，取出后，在水中冷却20 min。在610 nm 下测定光密度。以光密度为横坐标，糖液浓度为纵坐标，绘制工作曲线。②待测试液的制备。称取鲜样0.3 g，加少量乙醚，磨至浆糊状，用40 mL 70 ℃蒸馏水洗涤转入100 mL容量瓶，70 ℃水浴中保温30 min，冷却，加1 mL 醋酸锌，1 mL 亚铁氰化钾，振荡，定容，过滤至烧杯中，得到糖液。③测定。移取糖液1.00 mL 于干燥试管中，加入5 mL 蒽酮，混匀，于沸水浴中置10 min，冷却，于620 nm 测定吸光度。可溶性糖=(0.179 9 +133.57 ×OD620)×10－4/w×100%(w 为样品质量)。

可溶性蛋白质采用考马斯亮蓝法测定。考马斯亮兰G250染色后，595 nm 测定其吸光度。取酶提液0.2 mL，加入3 mL 考马斯亮兰，于595 nm 波长测定OD 值。标准曲线制作及测定计算方法参照李合生［5］184－185。

1.2.4 多酚氧化酶及过氧化物酶活性测定

多酚氧化酶活性测定和计算方法参照蒋德安［4］。配制酶的反应体系包括3.9 mL pH =5.5 的磷酸缓冲液、1 mL 0.1 mol/L 的儿茶酚溶液和0.1 mL 酶液，以煮过失活的酶液为对照，做二组重复试验。反应体系加入酶液后，于37 ℃保温10 min，迅速放入冰浴中，立即加入2 mL 的20%三氯乙酸，分别于520、470 nm 波长下测定吸光度。

过氧化物酶测定方法参照李合生［5］164－165。在比色杯中加入3 mL 反应混合液(每28 μL 愈创木酚溶解于50 mL 0.1 mol/L pH6.0 的磷酸缓冲液，再加入19 μL 30% H2O2混合均匀)，再加入0.2 mL 粗酶液，对照以磷酸缓冲液代之，立即开启秒表，记录470 nm 下的吸光度，重复3 次。POD 活性以每克鲜质量材料每分钟内A470变化0.01 为1 个酶活力单位(U)。

1.2.5 蛋白类(粗酶液)的制备

称取1.0 g 材料放入研钵中，加8.0 mL 预冷的提取缓冲液，在0 ～4 ℃低温下研磨，匀浆液经15 000r/ min 冷冻离心20 min，上清液用于蛋白质及多酚氧化酶活性的测定。

2 结果与分析

2.1 海棠不同插穗类型生根的生理因子变化

为观测海棠不同插穗内部生理因子与生根的关系，分别于2011年3月23日，4月3日和4月15日采条进行扦插试验。结果发现，不同海棠插穗对海棠扦插生根率有极显著地影响。当年枝生根率最高，生长枝次之，结果枝最差。

2.1.1 含水量比较

由表1可知，不同插穗类型的总含水量不同，其中生长枝总含水量最高，平均为52.42%(垂丝海棠)、44.02%(楸子);其次为当年枝，含水量为51.77%(垂丝海棠)、43.11%(楸子)，结果枝含水量与当年枝接近，平均为52.35%(垂丝海棠)、43.09%(楸子)。然而，自由水含量却以当年枝最高，平均为30.05%(垂丝海棠)、25.60%(楸子);生长枝最低，平均为19.29%(垂丝海棠)、16.00%(楸子)。束缚水含量变化正好与自由水含量变化相反。2 种海棠的插穗在不同时间扦插，其含水量变化趋势不一致。当年生枝随着扦插时间的推移其含水量逐渐下降，而生长枝中为先上升后下降，结果枝中则逐渐上升。自由水含量变化与总含水量变化趋势一致，束缚水与总含水量变化相反。

表1 不同种类插穗总含水量、自由含水量和束缚水含量 %

2.1.2 可溶性糖质量分数变化

表2显示，3 种插穗中，当年枝中的可溶性糖含量最高，平均为7. 12% (垂丝海棠)、5. 97% (楸子)，其次为生长枝，平均为4.97%(垂丝海棠)、4.11%(楸子)。结果枝的可溶性糖质量分数最低，平均只有4.26%(垂丝海棠)、3.50%(楸子)。不同类型、不同时间扦插的插穗随着扦插时间的延迟可溶性糖质量分数逐渐下降，这可能是由于插穗条在扦插过程中需要大量能量消耗，而可溶性糖正是它主要的能量来源。

表2 不同种类插穗可溶性糖、单宁和生根率

2.1.3 单宁质量浓度变化

单宁一直被认为是影响扦插的主要因素。通过对单宁的测定(表2)，不同的插穗条，单宁质量浓度基本接近。当年枝单宁质量浓度为1.110(垂丝海棠)、0.939 mg·L－1(楸子)，结果枝为1.760(垂丝海棠)、1.432 mg·L－1(楸子)，生长枝为1.360(垂丝海棠)、1.145 mg·L－1(楸子)。从不同扦插时间上看，单宁质量浓度总体是增加的。

2.1.4 多酚氧化酶(PPO)活性变化

不同类型插穗以当年枝多酚氧化酶活性最高(表3)，垂丝海棠插穗中平均为0.013 0 U，楸子插穗中则为0.011 35 U;其次为结果枝平均为0.011 60 U(垂丝海棠)、0.009 53 U(楸子)，生长枝最低平均为0.008 75 U(垂丝海棠)、0.007 39 U(楸子)，从不同扦插时间来看，当年枝的多酚氧化酶活性都比较强，结果枝与生长枝的多酚氧化酶活性皆下降，其中生长枝的下降速度最快，至4月15日达到最低值。

表3 不同种类插穗多酚氧化酶活性和过氧化物酶活性

2.1.5 过氧化物酶(POD)活性变化

过氧化物酶的变化基本与多酚氧化酶相似。由表3中测得的平均值来看，结果枝的活性最高，其次为生长枝，最低为当年枝。从不同扦插时间看，过氧化物酶活性总趋势是下降的，当年枝下降不大，而生长枝与结果枝下降速度较快，至4月15日它们分别下降到0.035 7(垂丝海棠)、0.029 1 U·g－1·min－1(楸子)和0.039 7(垂丝海棠)、0.032 2 U·g－1·min－1(楸子)。

2.1.6 5 种生理生化因子与海棠扦插生根率的相关性

由表4可知，当年枝海棠扦插生根率与束缚水含量、多酚氧化酶活性达到显著负相关，相关系数分别为－0.86(垂丝海棠)、－0.85(楸子)，－0.83(垂丝海棠)、－0.80(楸子)。与总含水量、自由水含量达到显著正相关，相关系数为0.87(垂丝海棠)、0.84(楸子)，0.89(垂丝海棠)、0.85(楸子)。而与可溶性糖含量相关性不大。单宁含量与可溶性糖达到显著正相关，相关系数为0.996(垂丝海棠)、0.998(楸子);而与多酚氧化酶活性达到极显著负相关，相关系数分别为－0. 87(垂丝海棠)、－0. 84(楸子)。多酚氧化酶活性、过氧化物酶活性与可溶性糖含量达到极显著负相关，相关系数分别为－0.89(垂丝海棠)、－0. 87(楸子)、－0. 94(垂丝海棠)、－0.90(楸子)。

表5显示:结果枝扦插生根率与总含水量、自由水含量、多酚氧化酶达到极显著正相关，相关系数分别为0.97(垂丝海棠)、0.98(楸子);0.91(垂丝海棠)、0.89(楸子);0.97(垂丝海棠)、0.99(楸子)。与束缚水含量、可溶性糖、单宁含量达到极显著负相关，相关系数分别为－0.87(垂丝海棠)、－0.88(楸子);－0.93(垂丝海棠)、－0.99(楸子);－0.94(垂丝海棠)、－0.94(楸子)，而与过氧化物酶没有多大相关性。单宁含量与束缚水含量、可溶性糖极显著正相关，相关系数为0.97(垂丝海棠)、0.99(楸子);0.95(垂丝海棠)、0.94(楸子)。与过氧化物酶显著相关，相关系数为0.96(垂丝海棠)、0.84(楸子)，与多酚氧化酶极显著负相关，相关系数为－0.96(垂丝海棠)、－0.97(楸子)。

可见，无论是当年生枝还是结果枝，影响扦插最大的因子是含水量。一般说来，插穗内总含水量和自由水含量越高，插穗越容易生根，扦插也容易成活。可溶性糖是有效的碳源和能量来源，适量的碳源有利于促进植物插穗不定根的大量产生，中等浓度的蔗糖对垂丝海棠愈伤组织的诱导、增殖、生长最有利。但当年生枝的分析表明可溶性糖对扦插生根没有多大的相关性，结果枝却表明可溶性糖越高、生根率越低。这可能是由于可溶性糖在降解过程中形成大量的酚类物质对扦插产生不利影响。因此，提高插穗中自由水含量，提高插穗生理活性对增强多酚氧化酶的活性、降低细胞中单宁的质量浓度是有利于提高扦插生根率的。

表4 当年生枝若干生理生化因子与扦插生根率的相关系数

表5 结果枝若干生理生化因子与扦插生根率的相关系数

2.2 海棠生长枝插穗不同芽位的三个时间段采条的生理变化

2.2.1 含水量变化

由表6可知，顶芽和1 ～3 节侧芽的总含水量都有不同程度的下降，并表现出越幼嫩的芽失水越严重［6］。4 ～7 节侧芽则木质化程度较高，总含水量基本没有变化。不同时间采集的插穗其总含水量都是在3月23日的最低，但整个趋势变化不大，范围均在44% ～52% (表6)。而自由水含量差异显著。顶芽与1 节侧芽始终保持较高的自由水含量，而2 ～5节侧芽在3月23日下降迅速，6 ～7 节则不断上升。由于插穗中大量可用的插穗芽位是2 ～5 节侧芽，因此冬天或早春采集的插穗不利于扦插生根。3月份后，气温回暖，海棠插穗细胞新陈代谢开始加强。6月3日采集的插穗，其不同芽位的自由水含量显著高于9月3日和3月23日采集的相应插穗的自由水含量。同一插穗不同芽位由顶芽到第7 节侧芽其总含水量逐渐下降，其中9月3日采集的插穗总含水量下降了12.57%(垂丝海棠)、12.56%(楸子)。3月23日采集的插穗下降了9.84%(垂丝海棠)、9.85%(楸子)。而6月3日采集的插穗只下降了5.30%(垂丝海棠)、5.94%(楸子)(表6)。表明6月3日采集的插穗总含水量在不同芽位分布相对较均一，扦插采穗利用率较高。

2.2.2 可溶性糖质量分数变化

不同时间采集的插穗自顶芽由上而下可溶性糖含量逐渐下降，3 种不同时间采集于4 ～7 节芽位的插穗可溶性糖质量分数以3月23日采集的海棠插穗为最高，主要由于冬季插穗细胞内含有大量的淀粉质体，贮藏了大量的淀粉，随着时间推移和春季的到来，插穗新陈代谢的加强，大量的淀粉被降解为可溶性糖，给侧芽的萌动所需(表6)。

2.2.3 可溶性蛋白质质量分数变化

3 种不同时间采集的插穗可溶性蛋白质质量分数相差较大，与可溶性糖变化一致。其中以9月3日可溶性蛋白质质量分数相对较低，平均为1.638%(垂丝海棠)、1.065%(楸子)，6月3日可溶性蛋白质质量分数最高，平均为2.679%(垂丝海棠)、1.741%(楸子)。不同时间采集的插穗自顶芽由上而下可溶性蛋白质质量分数逐渐下降，表明同一时间采集的插穗及插穗不同芽位新陈代谢活性不一致［7］(表6)。

2.2.4 单宁质量浓度变化

海棠扦插生根率低，一般认为是单宁含量较高，愈伤组织难以形成［8］。由表6可知:3 种不同时间采集的插穗条中，以6月3日采集的插穗单宁质量分数最低。同一采穗条中，顶芽单宁质量分数最高，第一节侧芽至第七节侧芽变化不大。随着春季温度上升和芽的萌动［9］，海棠插穗条中单宁质量分数减少。插穗中单宁的质量分数变化范围为1. 81 ～3.03 mg·L－1，表明单宁不是影响扦插生根的主要因子。

2.2.5 多酚氧化酶活性变化

不同时间采集的插穗以顶芽多酚氧化酶活性最大，平均为0.074 9 U(垂丝海棠)和0.061 6 U(楸子)。然后下降，至第七节侧芽达到最低，平均为0.033 7 U(垂丝海棠)和0.027 5 U(楸子)。从不同采穗时间来看，6月3日采集的插穗多酚氧化酶活性比其它时间采集的插穗都强，这与蛋白质质量分数变化一致(见表6)。

表6 生长枝不同芽位的生理因子变化

2.3 两种海棠生长枝生根过程中插穗内部的生理变化

2.3.1 含水量变化

3月23日扦插的插穗其含水量，垂丝海棠在第9 天达到最低(楸子在第5 天)，此后稳步缓慢上升。(表7)这一结果与海棠扦插的解剖构造变化相一致［10］。9d 后愈伤组织形成，楸子的皮部突起增加，意味着插穗具备微弱吸水能力的开始，使得含水量逐渐上升。4月15日扦插的插穗其含水量在5d(楸子在第9 天)达到峰值，此后逐渐下降到第11 天(楸子在第30 天)达到最低，然后再逐渐上升。这可能是由于4月15日扦插的插穗由于气温已经上升，新陈代谢旺盛，水分流动性加强的原因［11］。

2.3.2 可溶性蛋白质质量分数变化

两种海棠插穗中的可溶性蛋白质质量分数，随着时间推移，显现先上升后下降的过程(见表8)。3月23日扦插的插穗其蛋白质，在2 种海棠的插穗中扦插后第15 天达到高峰。而4月15日扦插的垂丝海棠插穗可溶性质蛋白质比3月23日扦插的插穗提早近10 d(楸子提早6 d)达到峰值，有利于插穗切口愈合生根［12］。

表7 海棠生长枝生根过程中插穗内部含水量变化 %

表8 海棠生长枝生根过程中插穗内部的可溶性蛋白质质量分数 %

2.3.3 单宁质量浓度变化

插穗中的单宁质量浓度随着扦插后天数的延长呈现上升趋势(表9)，4月15日扦插的插穗条其单宁质量浓度平均值分别为4.05(垂丝海棠)、3.64 mg·L－1(楸子)，高于3月23日扦插的插穗中的含量，分别为3.75(垂丝海棠)、3.27 mg·L－1(楸子)。由于多酚氧化酶活性上升的幅度(表10)高于单宁上升的速度，表明4月15日扦插后因插穗水分充足，代谢旺盛，有利于消除单宁等酚类物质的毒害。

表9 海棠生长枝生根过程中插穗内部的单宁质量浓度 mg/L

2.3.4 多酚氧化酶活性变化

扦插后第5 天开始，插穗中的多酚氧化酶活性随着时间推移增加(表10)。4月15日扦插的插穗其多酚氧化酶活性，平均分别为0.088 95 U(垂丝海棠)和0.115 08 U(楸子);显著大于3月23日扦插的插穗，平均分别为0.052 30 U(垂丝海棠)、0.072 85 U(楸子)，4月15日扦插的插穗分别上升了1.94 倍(垂丝海棠)、1.30 倍(楸子)，而3月23日扦插的插穗中多酚氧化酶活性分别上升了1.17 倍(垂丝海棠)、2.17 倍(楸子)。看来楸子插穗中该酶活性启动得较早，这与其耐寒性的分布有关［13］。

表10 海棠生长枝生根过程中插穗内部的多酚氧化酶活性 U

3 结论与讨论

扦插繁殖从插穗选择到植株形成，包括切口愈伤组织形成、根原始体产生、贯穿插穗径向的维管束桥的形成等。在这一过程中，插穗内部发生了许多生理变化，插穗的生活能力对愈伤组织及根原始体的形成至关重要。试验表明:不仅不同插穗类型的生根率不同，同一插穗类型的不同采集时间因木质化程度的差异其扦插生根率也不同，而且同一插穗不同芽位的扦插生根率也不同。这主要由复杂的内部与外部环境所影响的［14］。在内部生理生化因子中，含水量、可溶性糖质量分数、蛋白质质量分数、单宁质量浓度、多酚氧化酶活性及激素等，都会因不同插穗类型、同一类型不同采条时间、不同扦插时间而在扦插生根过程中产生不同的影响。

当年生枝相应的生理生化因子，如自由水含量、可溶性糖质量分数等都较其它2 种类型的插穗要高，而单宁质量浓度较其它2 种类型插穗条要低，故扦插生根率高于其它2 种插穗(表2)。无论是哪一种海棠，当年生插穗的自由水含量均较高，束缚水含量较低，多酚氧化酶活性及过氧化物酶活性较高，植物体内的新陈代谢旺盛，同时自我保护能力也加强，清除酚类物质在植物体内的毒害［15］，从而有利于愈伤组织的形成，导致扦插生根率较高。因此，一般地说自由水含量对植物体扦插起到关键的作用。自由水是植物体内新陈代谢物质的运输主体，自由水含量越高，细胞渗透活动越活跃，越有利于细胞的分裂、生长和繁殖，促进不定根的形成。同时，自由水含量高可降低单宁的含量，增强多酚氧化酶等活性，可提高扦插生根率。但不同芽位的自由水含量以顶芽为最高，而生根率最低。在扦插过程中，含水量对植物的扦插生根确实十分重要。因此，可能的解释为:植物采条制穗时，插穗的木质化程度对扦插的生根十分重要，越幼嫩的部位越易失水［16］，从而影响了扦插的生根率。由此可见，对于海棠这类扦插生根较难的树种，插穗的来源选择尤为重要。仅靠外部喷雾并不能有效增加插穗内的含水量，除选择合适的枝条外，扦插季节也很重要。

有学者认为温度和湿度的适宜与否是海棠扦插生根的主要因子［17］。温度过高，湿度过低，插穗易失水干枯，温度过低，伤口愈合速度缓慢。从试验结果来看，3月23日扦插时，插穗还未完全萌动，生理活性较低，地温未上升使根系供水能力差［18］。扦插后随着温度的上升，插穗的含水量缓慢上升(表7)，而可溶性蛋白质含量(表8)、可溶性糖质量分数及多酚氧化酶活性(表10)等都还较低［19］。这时，插穗缺乏水分的供应，代谢较弱，又因外界环境干燥，新发出的芽易失水，故自由水含量较低。扦插后初期的7 d 内在切口附近的各种生活的薄壁细胞还未脱分化形成愈伤组织。此时扦插的插穗最易因外界环境的不适而死亡，因此必须加强养护管理。7 d后，插穗切口形成的愈伤组织细胞，具备了保护和防止水分散失的功能，并且代替了根的部分吸水功能。这样可以缓慢而不断地向插穗输送少量水分，插穗中的含水量逐渐升高(表7)，可溶性蛋白质(表8)、可溶性糖含量及多酚氧化酶活性(表10)等缓慢上升。而4月15日扦插时插穗已经完全萌动，新陈代谢旺盛，水分、可溶性蛋白质、可溶性糖及多酚氧化酶等都处于较高的代谢水平，导致扦插后出现含水量，及其它生理生化因子的下降。插穗由于扦插后温度较高，代谢加快，因此，扦插后5 d，插穗的含水量、蛋白质含量、可溶性糖含量等就显著升高。而后，由于插穗得不到切口基部的水分供应，自由水含量不断下降，营养物质如蛋白质等也因消耗下降。到第11 天，插穗切口开始略有保水和吸水能力后，水分和养分的运输和代谢由此开始了。插穗中的含水量、可溶性蛋白质含量、可溶性糖含量及多酚氧化酶等又逐渐升高。而扦插后，单宁质量浓度增加(表9)，与多酚氧化酶活性增加同步进行，单宁对植物扦插是有影响的，但海棠插穗中单宁平均仅为1.81 ～3.03 mg·L－1，对细胞活动影响不大。因此，可能不是影响扦插生根的主要因子。

［1］ 江锡兵，宋跃朋，马开峰，等.低温胁迫下美洲黑杨与大青杨杂种无性系若干生理指标变化研究［J］. 北京林业大学学报，2012，34(1):58 －63.

［2］ 付红祥.海棠的繁殖技术研究［D］.南京:南京林业大学，2004.

［3］ 徐丽萍，上官新晨，喻方圆.秤锤树嫩枝扦插过程中营养物质含量的变化［J］.江西农业大学学报，2012，34(1):50 －53.

［4］ 蒋德安.植物生理学［M］.2 版.北京:高等教育出版社，2011.

［5］ 李合生.植物生理生化实验原理和技术［M］. 北京:高等教育出版社，2006.

［6］ Rajasekaran L R，Blake T J. New plant growth regulators protect photosynthesis and enhance growth under drought of jack pine seedlings［J］. J Plant Growth Regul，1999，18(4):175 －181.

［7］ 李宏，程平，郑朝晖，等.低温贮藏对俄罗斯杨种条生理指标及扦插成活率的影响［J］.东北林业大学学报，2011，39(3):12－14.

［8］ 韩伟，王鹏，冯忠良，等.扦插生根过程中贴梗海棠插穗生理生化指标的变化［J］.山东农业科学，2009(3):28 －30.

［9］ Sloan J L，Jacobs D F. Leaf physiology and sugar concentrations of transplanted Quercus rubra seedlings in relation to nutrient and water availability［J］. New Forests，2012，43:779 －790.

［10］ Meijón M，Cañal M J，Fernández H，et al. Hormonal profile in vegetative and floral buds of azalea:levels of polyamines，gibberellins，and cytokinins［J］. J of Plant Growth Regul，2011，30(1):74 －82.

［11］ 王玲，杨丽鹏，张秀珍，等. 东北百里香组培再生体系的建立［J］.园艺学报，2011，38(6):1185 －1190.

［12］ 黄宇，王倩，毕旸，等.外源ABA 对低温下雷公藤幼苗的生理响应［J］.福建林学院学报，2011，31(3):198 －202.

［13］ 郑科，郎南军，曹福亮，等.麻疯树扦插过程插条IAAO 与CAT酶活性变化研究［J］. 南方农业学报，2011，42(11):1332 －1336.

［14］ 刘霞，刘菲.蓝萼香茶菜种子人工老化过程中生理生化特性的研究［J］.种子，2012，31(4):27 －30.

［15］ Quideau S，Deffieux D，Douat-Casassus C，et al. Plant polyphenols:chemical properties，biological activities，and synthesis［J］. Angewandte Chemie International Edition，2011，50(3):586 －621.

［16］ Heidari M，Jamshidi P. Effects of salinity and potassium application on antioxidant enzyme activities and physiological parameters in Pearl Millet［J］. Agricultural Sciences in China，2011，10(2):228 －237.

［17］ 周艳，李朝蝉，周洪英，等.大白杜鹃扦插繁殖技术研究［J］.种子，2012，31(4):123 －126.

［18］ Paul S，Kundu A，Pal A. Identification and validation of conserved microRNAs along with their differential expression in roots of Vigna unguiculata grown under salt stress［J］. Plant Cell Tiss Organ Cult，2011，105(2):233 －242.

［19］ Anjum S A，Xie Xiaoyu，Wang Longchang，et al. Morphological，physiological and biochemical responses of plants to drought stress［J］. African Journal of Agricultural Research，2011，6(9):2026 －2032.