如何避免ELISA法测HBSAg弱阳性漏检

贾晓伟

吉林省通榆县第一医院检验科，吉林 通榆 137200

如何避免ELISA法测HBSAg弱阳性漏检

贾晓伟

吉林省通榆县第一医院检验科，吉林 通榆 137200

本方法对乙肝表面抗原检测结果处于灰带区（高值阴性），酶标仪判读吸光度CD值0.095－0.11之间20例结果进行分析。其中50%为乙肝表面抗原阳性及弱阳性。15%三个月后复检转为阳性。35%为乙肝表面抗原阴性。因此，认为ELISA方法应严格操作，防止阳性漏检。

乙肝表面抗原，弱阳性结果，防止漏检

在用ELISA方法检测乙肝表面抗原（HBSAg）时，发现有些检测结果处于灰带区。目测判定为阴性，若用酶标仪判读，测定值等于或接近Cut－off值，为探讨“高值阴性”的确切意义，本室观察了测定值在0.095－0.11标本20例，对其结果进行了分析。

1 材料和方法

1.1 标本来源 检测门诊及住院患者HBsAg，记录其检测结果，收集测定值在0.095－0.11之间标本20例。

1.2 试剂 上海科华有限公司HBsAg试剂盒。

1.3 方法 ELISA法。

2 结果

测定结果见下表

三次测定平均结果

20例中有10例经反复检测，HBsAg测定值＞Cut－off值（0.105）为阳性。7例转为低值阴性，仍有3例介于Cut－off附近。经跟踪复检测定值＞Cut－off值转为阳性。

3 讨论

笔者认为，人体感染HBV后，HBsAg为较先出现的病毒标志物，从感染到血中出现HBsAg间隔时间与感染的途径和数量有关，一般在感染后29～43天或18～84天出现，如数量大则间隔时间短，约2－3周。如数量小则间隔时间长，可达3～4个月，甚至半年。因此，HBsAg在感染后达到可检出水平，有一个高值阴性、弱阳性、强阳性的过程，“高值阴性”者中包含一部分阳性结果，应反复检测，有条件应跟踪复检连续观察半年。

ELISA方法测HBsAg的滴度（浓度）高低与肝炎病情轻重成反比。经临床观察，在急性肝炎中暴发性肝炎滴度最低，慢性肝炎中慢性活动性肝炎滴度最低，肝脏损坏与机体对抗原的免疫反应，而不是感染病毒的数量。一般讲免疫反应低，则肝细胞损伤轻，HBsAg呈高滴度，反之则呈低滴度。因此，HBsAg可以时高时低，时阴时阳。在此时，弱阳性标本检测显得尤为重要，“高值阴性”也应引起高度重视。初检时，“高值阴性”者中很有可能是一些临床症状较重的暴发性及活动性肝炎患者。此种情况单项HB-sAg很难判定，应结合HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBcAg－ IgM综合判定，如果其它几项呈阳性，对此时灰色区域的HBsAg应慎重报告。

ELISA方法测HBsAg影响因素很多，应用国产试剂盒ELISA阳性漏检率为3%，其中窗口期占90%，血液中浓度纸、HBV株的变异、非典型血清转阳和人为差错共占10%。在实际工作中如何排除ELISA影响因素，提高检测的灵敏度。我们认为，影响测定，首先考虑到的就是浓度漏检HOOK现象，以前用国产试剂盒检测HBsAg多为“一步法”，即将待测物与酶标记物同时加入包被好的反应孔中，温育、洗涤、显色。而现在 “两步法”是先将待测物加入包被好的反应孔内，经温育、抗体牢固结合。洗涤掉游离的抗原、抗体和非特异性蛋白等污物。再加酶标记物温育，形成 “夹心复合物”洗涤，显色。而现在 “两步法”检测中高浓度的HBsAg只与包被的固相抗－HBs“饱和性结合”，形成抗原抗体复合物，多余的未结合的游离HBsAg第一次洗涤时被洗掉，随后加入酶标物就能形成“双抗体夹心复合物”加底物显色试验中发现 “一步法”检测HBsAg阴性的血术经“两步法”检测HBsAg确有阳性。采取“两步法”可以削弱HOOK现象降低HBsAg的阳性漏检率。

另外，对ELISA判断在灰色区域范围的人群除行综合试验确诊是否HBsAg阳性也可建议进行FQ－PCR以判断是否为乙肝患者。因为我们知道HBV中的Dane颗粒仅占0.2%，而小球型颗粒及管型颗粒占98%以上，其仅表达HBsAg而不含DNA，所以，对于ELISA检出HBsAg阳性并不表明HBV、DNA阳性，因FQ－PCR对实验室条件要求较高，现在基层医院尚未普及。基层各中小医院还在普遍应用ELISA方法。

ELISA方法虽有灵敏度高、特异性强等优点，但它对操作要求较高。我们要想避免操作中的人为技术差错，必须按ELISA操作规程标准操作。笔者认为ELISA方法则HBsAg必须每板随测定值1ng/ml临界值质控品。它是做为试剂盒中第三个对照品，可以灵敏反应出试剂盒的检出水平，确保弱阳性标本不漏检，同时也是反应结束的判定标准。只要从试剂平衡、回样、保温、漂浮、洗涤、显色等每一步骤都严格控制，其结果重复性很好。

当然，“高值阴性”中也有相当比例的阴性结果，多为操作中洗板不净等因素所致。

R392.11

A

1007－8517（2013）10－0125－01

2013.04.19）