金水保肝灵颗粒的提取工艺研究

严金柱

（广东省英德市人民医院，英德513000）

金水保肝灵颗粒的提取工艺研究

严金柱

（广东省英德市人民医院，英德513000）

目的优选金水保肝灵颗粒的最佳提取工艺。方法采用单因素试验和正交试验设计，以芍药苷的含量和总固物为指标，考察提取次数、提取时间、浸泡时间和料液比的影响，优选最佳提取工艺。结果金水保肝灵颗粒最佳提取工艺为药材提取2次，第一次加12倍量水，煎煮1.5小时，第二次加水10倍量，煎煮1.0小时。结论优选的提取工艺方法可行、工艺稳定、重复性好。

金水保肝灵颗粒；提取工艺；正交试验；芍药苷

金水保肝灵颗粒为我院开发的保肝益肝中药新品种，由白芍、金银花、水牛角等药味组成，具有清热凉血，祛湿解毒，行气舒肝的功效，用于治疗慢性肝炎和脂肪肝。本方原为汤剂，但是汤剂由于煎煮和携带不便，故将此方开发成颗粒剂。为了提高有效成分的提取率，保证药效，本试验采用单因素和正交试验考察影响药材有效成分提取率的因素，优选金水保肝灵颗粒的最佳提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Sartorius BD211D十万分之一电子天平（德国塞多利斯）；密理博超纯水器（Milli-Q advantage）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110736-201203）；白芍、金银花、水牛角等药材均购自浙江中医药大学中药饮片厂；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 芍药苷含量测定［1-2］

2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6×150mm，10μm）；流动相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（15：85）；检测波长：230nm；流速：1mL／min；柱温：35℃。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的芍药苷对照品10mg置50mL容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，精密吸取5mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1mL含芍药苷28μg）。

2.1.3 供试品溶液的制备精密吸取样品溶液10mL，加于聚酰胺柱（30～60目，3g）上，用水洗脱，准确收集洗脱液50mL，摇匀，精密吸取5mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.1.5 阴性样品溶液的制备称取除白芍外的药材加10倍量水，煎煮2次，1.5h／次，药液过滤，合并滤液，浓缩并定容至500mL，取10mL浓缩液，自供试品溶液的制备项下“取样品溶液10mL”起同法操作，制得阴性样品溶液。

2.1.5 测定法吸取上述对照品、供试品及阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果显示，芍药苷在此色谱条件下能与其他组分达到很好的基线分离，阴性样品在芍药苷峰处无假性峰，阴性无干扰。

2.1.6 标准曲线的绘制精密量取芍药苷对照品溶液（28μg／m L）2，4，8，12，16，20μL进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得回归方程：Y=1863.1X+14.6387，r=0.9998。结果表明：在0.056～0.560μg范围内，芍药苷峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.1.7 样品含量测定精密吸取各正交实验供试品溶液各10μL进样，记录色谱图，根据标准曲线计算样品中芍药苷的含量。

2.2总固体物的测定精密吸取各样品浓缩液10mL，至己恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，照干燥失重法测定，计算干膏得率，公式如下：

干膏得率（%）=W×V×100% W为10mL浓缩液中干浸膏重量，V为定容体积，Wt为药材重量。

2.3 提取次数的考察称取1／5处方量的药材3份，分别考察加热回流提取1次，2次，3次，每次加水10倍量，提取1.0h，滤过，合并滤液，浓缩定容至500mL，测定干膏得率和芍药苷提取率，结果见表1。

表1 提取次数的考察（%）

由结果可知，随着提取次数的增加，芍药苷的提取率和干膏得率都呈增加态势，提取2次和提取1次相比，芍药苷的提取率和干膏得率都呈显著性增加，而提取3次和提取2次相比，增加并不明显，考虑到节约工时和效益最大化，确定以提取2次为宜。

2.4 正交试验煎煮时间、浸泡时间和溶媒用量为3项影响提取的重要因素，各取3水平，进行L9（34）正交试验，筛选最佳工艺条件。芍药苷为方中水溶性成分之一，该成分的浸出效果代表了方中水溶性成分的浸出情况，且其含量测定有成熟方法，故选其为评价指标，权重系数定为0.6。同时总固体物的浸出多少可以作为大类。

成分间接控制的一个指标，所以选择其作为评价指标之一，权重系数定为0.4。

表2 因素水平表

表3 正交试验结果表（%）

综合评分=（60／最大芍药苷提取率）×芍药苷提取率+（40／最大得膏率）×得膏率

通过对正交试验所得结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出在该试验条件下最优的提取条件。方差分析结果见表4。

表4 方差分析结果表

由直观分析可知，影响提取效果的因素顺序为：加水量＞提取时间＞浸润时间，由此得出的最佳工艺组合为A2B1C2。经过方差分析，发现因素浸泡时间项下的离均差平方和比空白项的离均差平方和还要小，可以认为该列的离均差平方和主要是由试验误差引起的。为了提高分析精度，把它和空白项合并在误差离均差平方和中一起作为试验误差，重新进行分析，结果显示，加水量对提取结果具有显著性影响，提取时间对实验结果无显著性影响。综合考虑到各方面因素，最后确立的提取工艺为A2B1C2，即药材提取2次，第一次加12倍量水，煎煮1.5小时，第二次加水10倍量，煎煮1.0小时。

2.5 验证实验为确定该工艺的优劣和稳定性，据所筛选的最佳条件，验证3批，结果见表5。由表可知，验证试验结果与正交试验优选结果吻合，说明正交试验选出的工艺条件合理，工艺条件稳定可行。

表5 工艺验证实验 （%）

3 讨论

金水保肝灵颗粒是临床验方，原处方在临床应用上以汤剂内服，临床疗效较好，并且方中各味中药的主要有效成分为水溶性故确定以水为溶剂进行提取。为保证实验结果的重复性，考虑目前生产中大多采用多功能提取罐，确定以水为溶媒回流进行提取。

本试验采用单因素试验和正交试验法，以君药的有效成分芍药苷的转移率为评价指标，考察了金水保肝灵颗粒提取工艺中各因素的影响，确定了金水保肝灵颗粒的最佳提取工艺。所确定的提取工艺合理可行、工艺稳定、重复性好，可有效提取金水保肝灵颗粒的有效成分。

［1］余之焕，周全．高效液相色谱法测定四金通合剂中芍药苷和黄芩苷的含量［J］．中国医院药学杂志，2010，（8）：710-711．

［2］任江剑，陈斌龙，俞旭平，等．不同白芍药材中芍药苷含量比较研究［J］．中国现代中药，2010，（7）：495-496．

Optimum Extraction of Jinshui Baoganling Granul

Yan Jinzhu

（People's Hospital of Yingde City，Guangdong province，Yingde 513000，China）

ObjectiveTo optimize the extraction process of Jinshui Baoganlinggranule．MethodsUsing the single factor experiment and orthogonal experiment，with the content of paeoniflorin and total solids as indicators of extracting，we observed factors such as extraction times，extraction time，soaking time and solid-liquid ratio，that effect the extraction，optimize the extraction technology．ResultsThe optimum extraction technology for Jinshui Baoganlinggranul was：the extraction times of the herbs was 2，and first with 12 times amount of water，boiling 1．5 hours，second time with 10 times amount of water，boiling 1 hour．ConclusionThe optimum extraction technology was feasible，stable andgood repeatability．

Jinshui Baoganlinggranul；Extraction process；Orthogonal experiment；Paeoniflorin

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.098

1672-2779（2013）-11-0149-02

��张文娟

2013-05-15）