CyclinD1、p27及PTEN蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达

杨丽丽 徐佳瑛 吴 伟 祝桂祥 陈启林

鳞状细胞癌是临床上较为常见的恶性肿瘤之一，其中口腔黏膜部位发生的鳞状细胞癌较为多见，与其他部位发生的鳞状细胞癌相比，OSCC更易发生转移，明显降低了患者的生活质量。据相关研究显示，与OSCC发生密切相关的基因是PTEN，PTEN是1种抑癌基因，主要位于10号染色体上，具有磷酸激酶活性［1］。PTEN基因的缺失及表达异常会促进肿瘤的发生，此外，细胞周期中CyclinD1、p27蛋白对细胞的生长也具有一定的调控作用。目前，临床上对OSCC患者CyclinD1、p27及 PTEN蛋白表达情况的研究较少［2］。本研究分析OSCC及正常口腔黏膜患者 CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表达情况，旨在探究三者表达的相关性及与组织分化程度的关系，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2011年10月-2012年10月我院收治的口腔鳞状细胞癌患者50例作为观察组;另选取正常口腔黏膜患者50例作为对照组。对照组男性27例，女性23例，年龄17～66岁，平均为(40.5±1.9)岁。观察组男性26例，女性24例，年龄18～65岁，平均为(43.6±1.2)岁。其中口腔鳞癌患者高分化22例、中分化18例、低分化10例。两组患者在年龄、性别等方面比较无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

采取免疫组织化学SP法，检测正常口腔黏膜及口腔鳞癌组织中CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表达情况。主要试剂有鼠抗人PTEN，由北京中杉金桥生物技术有限公司生产的工作型;鼠抗人PIP3，是由武汉博士德生物技术有限公司生产的浓缩型;鼠抗人CyclinD1是由福州迈新生物技术开发公司生产的浓缩型;3种试剂的工作浓度均为1∶100。将标本进行常规石蜡包埋，4 μm切片，经脱蜡、水化、微波修复、SP法免疫组织染色、DAB显色等处理。SP法检测试剂盒为链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(SP)试剂盒，显色液为DAB显色液。

1.3 观察指标

观察并比较两组患者CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表达情况，并观察口腔鳞状细胞癌中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表达与组织分化程度的关系。胞质内若出现明显的黄色或棕褐色颗粒即为CyclinD1、p27及PTEN蛋白表达阳性细胞。随机选择10个高倍视野，计数1 000个细胞，计算阳性细胞百分率。＜10%为“-”，10% ～50% 为“+”，51% ～75%为“++”，＞75%为“+++”。“-”为阴性表达;“+”、“++”、“+++”均为阳性表达［3-5］。

1.4 统计学方法

应用SPSS 15.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 正常口腔黏膜及口腔鳞癌组织中CyclinD1蛋白表达情况

正常口腔黏膜组织中CyclinD1蛋白主要呈阴性表达，阴性表达率明显高于观察组;而口腔鳞状细胞癌组织中CyclinD1蛋白以弱阳性表达为主，阳性表达率明显高于正常口腔黏膜组织，P＜0.05，具有统计学意义，见表1。

表1 两组CyclinD1蛋白表达情况(例，%)

2.2 两组p27蛋白表达情况

与对照组相比，观察组p27蛋白阳性表达率明显较高，P ＜0.05，具有统计学意义，见表 2。

表2 两组p27蛋白表达情况(例，%)

2.3 两组PTEN蛋白表达情况

对照组PTEN蛋白以弱阳性表达为主，阳性表达率明显高于观察组，P＜0.05，有统计学意义，见表3。

2.4 口腔鳞状细胞癌组织中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表达与其组织分化程度的关系

低分化者p27、PTEN蛋白表达阳性率较高分化者低，而低分化者CyclinD1蛋白表达阳性率较高分化者高，P ＜0.05，具有统计学意义，见表4。

表3 两组PTEN蛋白表达情况(例，%)

表4 CyclinD1、p27及PTEN蛋白与口腔鳞状细胞癌组织分化程度的关系(例，%)

3 讨论

口腔鳞状细胞癌是口腔科发病率较高的恶性肿瘤，在口腔癌症中的发病率较高，居80%以上，该类患者临床上的生存率较低，且预后情况也较差。近年来，随着外科诊断技术的不断进步及分子生物学的不断发展，口腔鳞状细胞癌的早期诊断率不断提高，从分子学上水平上对OSCC发生机制的阐述也不断完善［6］。目前，临床上对口腔鳞癌的研究重点主要在于分子生物学研究，旨在探寻有效的分子生物学指标，从而对口腔鳞癌进行诊断筛选。

多数国内外关于OSCC的研究显示，抑癌基因(PTEN)在OSCC的发展过程中具有较为重要的作用，可通过诱导细胞的凋亡，从而抑制癌细胞的生长繁殖，同时还能抑制端粒酶的活性，从而抑制原癌基因的表达［7-8］。恶性肿瘤的发生发展与PTEN存在较为紧密的关系，其中关于子宫内膜癌、神经胶质癌、前列腺癌、乳腺癌等恶性肿瘤方面的研究报道较多，而关于口腔鳞癌PTEN的报道较少，经不断的研究发现，PTEN的改变多发生在蛋白水平上，而基因水平上的改变不明显。PTEN基因参与机体的正常发育，该基因功能的缺失对于癌症的发展具有明显的促进作用［9］。PTEN是目前唯一一个发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，主要位于人体10q23.3，编码的蛋白质主要分布于细胞质内，在OSCC的发展过程中的阳性表达率呈不断变化的趋势。OSCC的癌变过程依次为正常口腔黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生、口腔鳞状细胞癌，有研究显示，随着病变的不断进展，PTEN的阳性表达率不断的降低，表明癌细胞正在不断的生长，病情演变也越来越重，表明OSCC患者肿瘤的恶性转变过程与PTEN基因的异常遗传学改变有关［10］。

本研究对OSCC与正常口腔黏膜患者PTEN蛋白表达情况的检测可知，OSCC患者PTEN蛋白表达的阳性率较正常口腔黏膜组患者低;高分化组患者PTEN蛋白的阳性率较低分化高，表明PTEN与OSCC的分化程度呈显著相关性。细胞正常生长过程中细胞周期的平衡调控是由各种调控因子决定的，包括细胞周期素依赖性激酶(p27)和细胞周期D1(CyclinD1)等调控因子，其中p27对细胞的生长呈负性调控，而CyclinD1对细胞的生长则呈正性调控，OSCC患者细胞的生长与p27、CyclinD1的表达有关，p27对细胞增殖起抑制作用，CyclinD1起促进作用［11-12］。CyclinD1与细胞周期的G1期相关，可促进G1期细胞转向S期。在正常的细胞周期中CyclinD1为低表达，阳性表达率低，在细胞周期的调控中起着至关重要的作用。p27是1种新近发现的属于细胞周期素依赖激酶抑制物之一，可抑制细胞周期G1期的CyclinD CDK4/6复合物和CyclinE-CDK2复合物活性，在细胞周期与分化调控中起着重要的作用，当p27过度表达时可导致细胞周期持续的维持在G1期，阻碍细胞从G1期转向S期。有研究显示，在正常口腔黏膜组织中p27呈强阳性表达，而在口腔鳞癌患者中呈弱阳性表达［13-14］。本组结果显示，口腔鳞癌组患者p27阳性表达率较正常口腔黏膜组织高，且口腔鳞癌患者呈强阳性表达;口腔鳞癌患者中CyclinD1呈弱阳性表达，且表达的阳性率高于正常口腔黏膜患者。p27、CyclinD1的表达与口腔鳞癌分化程度相关，患者鳞癌分化程度越差，p27表达水平越低，而CyclinD1表达水平越高。p27、CyclinD1等调控因子在调节细胞的增殖过程中具有重要作用，调控因子的紊乱可导致细胞的增殖出现异常，最终诱发肿瘤的发生。综上所述，口腔鳞癌的发生和发展与PTEN基因的表达具有存在较为重要的关系，3种蛋白的表达情况与组织分化程度相关，三者的联合检测对OSCC的早期诊断具有较为重要的临床价值。

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