新城疫抗体测定的规范操作

向双云，周珍辉

（北京农业职业学院，北京 房山 102442）

1 测定的器材及使用方法

1.1 托盘天平

托盘天平测量开始前，必须先将游码移到标尺左端的零刻度处，然后才开始调节平衡螺母，使天平平衡。若将平衡螺母左右移至尽头天平仍不得平衡，则应检查原因，不能移动游码来达到平衡。

1.2 离心机

离心机使用时离心管液体不能装得太满，对称放置的试样必须配平。

1.3 移液枪

移液枪吸头装配时需将移液器垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可，切勿用移液器反复撞击吸头来上紧。

1.4 移液器

移液器吸液时应垂直吸液，吸头尖端侵入液面3mm以下，吸液时枪头应预润湿，然后再正式移液。吸液可将按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时先按下第一档，打出大部分液体，再按下第二档，将余液排出。吸取的过程应该做到“慢吸快打”，在吸液时要慢、准，放液时对准后速度要快，可以避免打完后吸头下存留液体，保证加入的液体体积一致。

2 规范的采血方法

采血前采血者先将注射器内吸入3.8%的枸橼酸钠。采血时，一人将鸡侧卧保定，一人固定鸡的头部和脚；从侧翅膀采血，一手固定采血部分，一手采血；采血完毕后采血者一手将抗凝剂和血液轻轻摇匀，一手用干棉球按压采血部位止血。采血部位最好从翅静脉丛刺入，比较容易采血成功且不容易淤血。

3 红细胞悬液的配制

血液采集完毕需取下针头，把血液沿离心管的管壁缓慢注入离心管中，防止红细胞的破坏。然后轻轻来回晃动离心管，使血液与抗凝剂充分混合，配平后置于离心机中开始离心。离心完毕，应先选用5mL的移液器吸取上面的液体，然后再选用1 mL或200μL的移液器吸取，最好以画圈的方式吸取，比较容易把白细胞和血小板吸干净。最后一次离心完毕，按照计算量用移液器从离心管底部吸取红细胞放入加好生理盐水的烧杯中，再反复回用生理盐水将移液器吸头里的红细胞洗下来，保证配制红细胞浓度的准确性。

4 血凝试验

血凝试验操作过程中需要注意的是使用微量移液器吸取液体时，吸头需碰壁以除去多余的液体；加样时应将所加物在V型板的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；倍比稀释时，要注意避免产生过多的气泡，影响结果的准确性；加红细胞时最好悬滴或由后往前加，因为孔内已有稀释的抗原，如果吸头接触到孔内混合液，会造成各个孔间液体相互污染，导致试验结果出现误差。抗原悬液在使用前一定要摇匀，红细胞悬液要边摇边加，以保证每一孔中加入浓度的准确一致，但注意不要用力过大，防止红细胞被破坏，造成溶血。结果判断应按照操作规程规定的时间，在对照孔成立的前提下及时观察读数，读数过早，血凝价易判高，血凝抑制价易判低，读数过晚，红细胞发生裂解，结果不再有意义。

5 四单位病毒的配制

四单位病毒的配制应根据计算结果用大移液器先吸取生理盐水，然后用小移液器吸取抗原，抗原吸取前要摇匀，再反复用生理盐水将移液器吸头里的抗原洗下来，保证配制四单位病毒浓度的准确性。配制好的四单位病毒最好能进行回归试验检测，回归试验的操作方法是：在微量反应板的1～4孔均加入0.025mL生理盐水，取四单位病毒液0.025mL加入第1孔内，混匀后吸取0.025mL加入第2孔，依次倍比稀释至第4孔，从第4孔吸取0.025mL弃去。然后每孔再加入0.025mL1%鸡红细胞悬液，轻轻混匀，室温（20℃～25℃）下静置40min后观察结果。若第1孔，2孔凝集，则视为抗原配制正确；若第1孔凝集，第2孔、3孔、4孔均沉淀，则抗原浓度配制偏低；若前3孔均凝集第4孔沉淀，则抗原浓度配制偏高。

6 血凝抑制试验

血凝抑制试验操作过程中加样的注意事项与血凝试验基本相同，主要注意四单位病毒和红细胞悬液加样时要滴或由前往后滴加，避免移液器吸头与孔内的液体接触，保证结果的准确性。血清要摇匀后加样，四单位病毒和红细胞悬液要边摇匀边加样，保证每孔所加的样品量和浓度的准确性。判定结果的时间要严格控制，一般来说，以阳性和阴性对照成立，红细胞对照孔完全沉淀的前后5min内判定试验结果较好。试验结果判读时，微量反应板倾斜45°，孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒的为凝集完全抑制，以能完全抑制四单位病毒的血清最高稀释度作为血凝抑制滴度。

综上所述，在新城疫抗体测定中，影响试验结果的因素很多，只有严格按规定操作，细致、耐心地做好每一个环节，发现问题找出原因，及时纠正处理，才能保证试验结果的准确。